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副猪嗜血杆菌转铁结合蛋白A基因的分段表达及其免疫原性分析
被引量:
3
1
作者
辛伟
李郁
+1 位作者
黄晓慧
魏建忠
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第12期1743-1749,共7页
本研究旨在获得副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)转铁结合蛋白A基因(tbpA)的表达产物(TbpA),并对其免疫原性进行分析鉴定。采用生物信息学方法预测HPS的TbpA抗原表位,根据GenBank上发表的HPS(SH0165株)tbpA的核苷酸序列设计合成...
本研究旨在获得副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)转铁结合蛋白A基因(tbpA)的表达产物(TbpA),并对其免疫原性进行分析鉴定。采用生物信息学方法预测HPS的TbpA抗原表位,根据GenBank上发表的HPS(SH0165株)tbpA的核苷酸序列设计合成3对引物,用PCR从安徽省HPS分离株(LJ3)tbpA中分段扩增出tbpA1、tbpA2和tbpA3,并连接到pET-32a(+)载体上,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切鉴定和测序确认,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中,进行IPTG诱导表达。利用SDS-PAGE检测目的蛋白,Western blotting分析重组蛋白的免疫活性;通过小鼠免疫攻毒保护试验和血清杀菌力试验,鉴定重组蛋白的免疫原性以及诱导机体产生保护性免疫反应的能力。结果表明,从HPS(LJ3)tbpA中扩增出与预期设计的1 140、897、666bp大小相符的3个片段(tbpA1、tbpA2、tbpA3),扩增产物连接载体得到重组质粒,在大肠杆菌中实现表达,获得大小为62、54、44ku的目的蛋白(rTbpA1、rTbpA2、rTbpA3),均能与HPS阳性血清反应。rTbpA1与甲醛灭活菌体对小鼠免疫攻毒的保护率分别为20%和40%,但rTbpA1引起小鼠平均死亡时间显著延迟,兔抗rTbpA1与兔抗HPS(LJ3)血清具有同样显著的杀菌活性。结果显示,成功表达的rTbpA1、rTbpA2、rTbpA3均具有良好的反应原性,其中rTbpA1更具有良好的免疫原性以及诱导机体产生保护性免疫反应的能力,可望成为副猪嗜血杆菌病疫苗和血清学检测的候选成分。
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关键词
副猪嗜血杆菌
转铁结合蛋白a基因
表达
免疫原性鉴定
下载PDF
职称材料
副猪嗜血杆菌转铁结合蛋白A基因的原核表达与鉴定
被引量:
3
2
作者
黄晓慧
辛伟
+5 位作者
魏建忠
连凯琪
郑海学
朱启运
才学鹏
李郁
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第10期1053-1057,共5页
为获得副猪嗜血杆菌(HPS)转铁结合蛋白A基因(tbpA)的表达产物,根据GenBank发表的HPS(SH0165株)tbpA的核苷酸序列设计合成1对特异性引物,以HPS血清13型安徽分离株(LJ3)的基因组DNA为模板,利用PCR扩增tbpA基因,然后将其克隆至pET-SUMO载体...
为获得副猪嗜血杆菌(HPS)转铁结合蛋白A基因(tbpA)的表达产物,根据GenBank发表的HPS(SH0165株)tbpA的核苷酸序列设计合成1对特异性引物,以HPS血清13型安徽分离株(LJ3)的基因组DNA为模板,利用PCR扩增tbpA基因,然后将其克隆至pET-SUMO载体,构建重组原核表达质粒pET-SUMO-tbpA,通过PCR鉴定和测序确认,将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)中,并进行IPTG诱导表达和His-Ni-resin纯化目的蛋白。经SDS-PAGE检测,获得了110ku的表达产物,与预期大小的转铁结合蛋白A(TbpA)的分子质量一致。Western-blot分析表明,表达产物与HPS阳性血清能发生反应,显示表达产物具有良好的免疫活性。结果表明,成功表达的TbpA为研制HPS新型疫苗和诊断试剂奠定了基础。
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关键词
副猪嗜血杆菌
转铁结合蛋白a基因
原核表达
鉴定
原文传递
题名
副猪嗜血杆菌转铁结合蛋白A基因的分段表达及其免疫原性分析
被引量:
3
1
作者
辛伟
李郁
黄晓慧
魏建忠
机构
安徽农业大学动物科技学院
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第12期1743-1749,共7页
基金
安徽省"十一五"科技攻关项目(07010302144)
安徽省自然科学基金项目(11040606M89)
安徽省生猪产业体系基金
文摘
本研究旨在获得副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)转铁结合蛋白A基因(tbpA)的表达产物(TbpA),并对其免疫原性进行分析鉴定。采用生物信息学方法预测HPS的TbpA抗原表位,根据GenBank上发表的HPS(SH0165株)tbpA的核苷酸序列设计合成3对引物,用PCR从安徽省HPS分离株(LJ3)tbpA中分段扩增出tbpA1、tbpA2和tbpA3,并连接到pET-32a(+)载体上,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切鉴定和测序确认,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中,进行IPTG诱导表达。利用SDS-PAGE检测目的蛋白,Western blotting分析重组蛋白的免疫活性;通过小鼠免疫攻毒保护试验和血清杀菌力试验,鉴定重组蛋白的免疫原性以及诱导机体产生保护性免疫反应的能力。结果表明,从HPS(LJ3)tbpA中扩增出与预期设计的1 140、897、666bp大小相符的3个片段(tbpA1、tbpA2、tbpA3),扩增产物连接载体得到重组质粒,在大肠杆菌中实现表达,获得大小为62、54、44ku的目的蛋白(rTbpA1、rTbpA2、rTbpA3),均能与HPS阳性血清反应。rTbpA1与甲醛灭活菌体对小鼠免疫攻毒的保护率分别为20%和40%,但rTbpA1引起小鼠平均死亡时间显著延迟,兔抗rTbpA1与兔抗HPS(LJ3)血清具有同样显著的杀菌活性。结果显示,成功表达的rTbpA1、rTbpA2、rTbpA3均具有良好的反应原性,其中rTbpA1更具有良好的免疫原性以及诱导机体产生保护性免疫反应的能力,可望成为副猪嗜血杆菌病疫苗和血清学检测的候选成分。
关键词
副猪嗜血杆菌
转铁结合蛋白a基因
表达
免疫原性鉴定
Keywords
Haemophilus parasuis
transferrin-binding protein A gene
expression
immunogenicity characterization
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
副猪嗜血杆菌转铁结合蛋白A基因的原核表达与鉴定
被引量:
3
2
作者
黄晓慧
辛伟
魏建忠
连凯琪
郑海学
朱启运
才学鹏
李郁
机构
安徽农业大学动物科技学院
中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室
出处
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第10期1053-1057,共5页
基金
安徽省自然科学基金项目(11040606M89)
家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金课题(SKLVEB2011HZKFKT013)
文摘
为获得副猪嗜血杆菌(HPS)转铁结合蛋白A基因(tbpA)的表达产物,根据GenBank发表的HPS(SH0165株)tbpA的核苷酸序列设计合成1对特异性引物,以HPS血清13型安徽分离株(LJ3)的基因组DNA为模板,利用PCR扩增tbpA基因,然后将其克隆至pET-SUMO载体,构建重组原核表达质粒pET-SUMO-tbpA,通过PCR鉴定和测序确认,将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)中,并进行IPTG诱导表达和His-Ni-resin纯化目的蛋白。经SDS-PAGE检测,获得了110ku的表达产物,与预期大小的转铁结合蛋白A(TbpA)的分子质量一致。Western-blot分析表明,表达产物与HPS阳性血清能发生反应,显示表达产物具有良好的免疫活性。结果表明,成功表达的TbpA为研制HPS新型疫苗和诊断试剂奠定了基础。
关键词
副猪嗜血杆菌
转铁结合蛋白a基因
原核表达
鉴定
Keywords
Haemophilus parasuis; transferrin-binding protein A gene; prokaryotic expression; identification;
分类号
S852.612 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
副猪嗜血杆菌转铁结合蛋白A基因的分段表达及其免疫原性分析
辛伟
李郁
黄晓慧
魏建忠
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
3
下载PDF
职称材料
2
副猪嗜血杆菌转铁结合蛋白A基因的原核表达与鉴定
黄晓慧
辛伟
魏建忠
连凯琪
郑海学
朱启运
才学鹏
李郁
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2012
3
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