转铁蛋白受体单克隆抗体OX26修饰的眼镜蛇神经毒素脂质体的制备及其对小鼠的镇痛作用研究

目的：制备转铁蛋白受体单克隆抗体OX26修饰的眼镜蛇神经毒素（αCT）脂质体（OX26-αCT-LP）,考察其理化性质、体外释放行为,并研究其镇痛作用。方法：采用薄膜分散-挤出法制备αCT-LP,巯基化后的OX26再与脂质体相连制得OX26-αCT-LP。考察所制脂质体的形态、粒径、Zeta电位;采用透析袋法考察OX26-αCT-LP和αCT-LP在p H 7.4的磷酸盐缓冲液中60 h内的释放特性;采用小鼠热板法考察鼻黏膜滴注生理盐水、αCT原料药、αCT-LP和OX26-αCT-LP对小鼠舔后足反应潜伏期的影响。结果：所制OX26-αCT-LP形态呈球形,均匀圆整,平均粒径为（106.3±5.36）nm,Zeta电位为（-23.17±1.14）m V,药物包封率为（56.82±1.18）%;OX26-αCT-LP和αCT-LP的体外释药行为均符合Weibull方程（r=0.986 7、0.981 0）;与生理盐水比较,αCT-LP和OX26-αCT-LP给药后60~480 min内能明显延长小鼠舔后足反应的潜伏期（P〈0.01或P〈0.05）,且OX26-αCT-LP效果强于αCT-LP（P〈0.01）。结论：成功制得对小鼠有一定镇痛作用的OX26-αCT-LP。

转铁蛋白受体的单克隆抗体OX26偶联三氧化二砷免疫脂质体对鼠脑胶质瘤细胞系的体外抑制作用

目的探讨转铁蛋白受体单克隆抗体(OX26)偶联三氧化二砷(As_2O_3)免疫脂质体对鼠脑胶质瘤细胞株的体外抑制作用。方法体外培养C6脑胶质瘤细胞,实验分为盐水组,As_2O_3(6μmol·L^(-1))组和OX26偶联As_2O_3脂质体(6μmol·L^(-1))组;采用四唑盐比色法(MTT),检测OX26偶联As_2O_3免疫脂质体对脑胶质瘤细胞生长的抑制作用,DAPI染色观察OX26偶联As_2O_3免疫脂质体对脑胶质瘤细胞促凋亡的影响。免疫印迹法检测OX26偶联As_2O_3免疫脂质体对脑胶质瘤细胞胶质瘤胶质纤维酸性蛋白(GFAP)蛋白表达的影响。结果 MTT比色法检测显示:OX26偶联As_2O_3免疫脂质干预对脑胶质瘤生长的抑制率为40.21%,显著高于As_2O_3组的25.77%,比较差异有统计学意义(P<0.05);核染显示:与盐水组和As_2O_3组比较,OX26偶联As_2O_3免疫脂质组脑胶质瘤细胞的光密度和面密度值显著减少,比较差异有统计学意义(P<0.01);Westernblot检测显示:OX26偶联As_2O_3免疫脂质组脑胶质瘤细胞GFAP蛋白的表达较盐水组和As_2O_3组少。结论 OX26偶联As_2O_3免疫脂质体对鼠脑胶质瘤细胞具有明显的体外抑制作用,其作用机制可能与促进脑胶质瘤细胞凋亡和GFAP蛋白的表达相关。

转铁蛋白受体单克隆抗体纳米载药系统治疗白血病的基础研究

目的:探讨转铁蛋白受体单克隆抗体(TfR mAb)纳米载药系统靶向治疗急性白血病的效果及其潜在的抗肿瘤机制。方法:合成纳米载药粒TfR mAb-聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)-聚L-赖氨酸(PLL)-聚乙二醇(PEG)-柔红霉素(DNR)。急性髓性白血病细胞株HL60细胞经药物干预后,倒置荧光显微镜下观察细胞内DNR的累积;流式细胞技术(FCM)检测HL60细胞内DNR浓度及细胞凋亡率;Western blot测定凋亡相关蛋白Cleaved-caspase 3的表达量。结果:单药DNR组和TfR mAb-PLGA-PLL-PEG-DNR组HL60细胞内可见DNR自发荧光累积,且TfR mAb-PLGA-PLL-PEG-DNR组细胞内DNR浓度高于单药DNR组(P<0.05);FCM检测结果显示,TfR mAb-PLGA-PLL-PEG-DNR组细胞凋亡率高于单药DNR组(P<0.05);Western blot检测结果证实,TfR mAb-PLGA-PLL-PEG-DNR组凋亡相关蛋白Cleaved-caspase 3表达量明显高于单药DNR组(P<0.05)。结论:TfR mAb-PLGA-PLL-PEG纳米载药系统将化疗药物靶向作用于肿瘤细胞HL60,可通过凋亡途径增加药物的抗肿瘤能力。

抗人转铁蛋白受体单克隆抗体增强姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌的抑制效应

目的检测抗人转铁蛋白受体单克隆抗体(TfR mAb)对雄激素非依赖性前列腺癌细胞生物学行为的影响,了解抗人TfR mAb对姜黄素抗瘤作用的协同效应。方法利用杂交瘤细胞株制备抗人TfR mAb,分别采用CFSE染色、AnnexinⅤ-PI染色和PI染色法流式细胞仪检测抗人TfR mAb对PC-3细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。采用FITC标记的鼠抗人TfR mAb检测姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞表面TfR表达的影响。采用流式细胞仪进一步检测抗人TfR mAb联合姜黄素对PC-3细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。结果抗人TfR mAb对PC-3细胞增殖、凋亡和细胞周期无明显影响(均P>0.05)。姜黄素能够显著上调雄激素非依赖性前列腺癌细胞表面TfR表达(P<0.05)。抗人TfR mAb可显著增强姜黄素对PC-3细胞凋亡的诱导作用(P<0.05),而不影响姜黄素对PC-3细胞增殖和细胞周期的影响(均P>0.05)。结论姜黄素可导致雄激素非依赖性前列腺癌细胞表面TfR表达增高。抗人TfR mAb单独作用对雄激素非依赖性前列腺癌细胞的生物学行为无显著影响,但抗人TfR mAb可以增强姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞的凋亡效应。

抗人转铁蛋白受体单克隆抗体体外抗瘤效应研究

目的:探讨抗人转铁蛋白受体(TfR)单克隆抗体(mAb)体外抗瘤效应。方法:采用CFSE染色、PI-AnnexinⅤ染色和PI染色,通过流式细胞术分析抗人TfR mAb对高表达的人肝癌细胞系HepG2和人乳腺癌细胞系MCF-7增殖、凋亡和周期的影响;通过MTT法检测抗人TfR mAb联合化疗药物对HepG2和MCF-7细胞增殖的抑制作用。结果:抗人TfRmAb能抑制HepG2和MCF-7细胞的增殖,并诱导其凋亡和S期阻滞;与化疗药物联用可增强其对肿瘤细胞增殖的抑制作用。结论:抗人TfR mAb具有良好的体外抗瘤效应。

选择性支气管动脉插管转铁蛋白受体单克隆抗体灌注治疗中晚期肺癌(附68例临床报告)

对68例中晚期肺癌进行选择性支气管动脉插管采用转铁蛋白受体单克隆抗体与表阿霉素、顺铂等药物制成偶联物灌注。结果显示，肿瘤明显消退24例占35．2％，部分消退36例，占52.5％，无变化8例占12．7％，总有效率为87.3％通过对支气管动脉插管，导向灌注疗法结果显示，本疗法优于周围静脉供药，且无严重并发症，副作用轻，不失为一种可供选择的治疗方法。

选择性支气管动脉插管转铁蛋白受体单克隆抗体灌注治疗中晚期肺癌(附68例临床报告)

本文对68例中晚期肺癌进行选择性支气管动脉插管采用转铁蛋白受体单克隆抗体与表阿霉素、顺伯等药物制成偶联物灌注。结果显示,肿瘤明显消退24例(35.2％),部分消退36例(52.5％),无变化8例(12.3％),总有效率为87.7％。通过对支气管动脉插管,导向灌注疗法结果显示,本疗法优于周围静脉供药,且无严重并发症,副作用轻,不失为一种可供选择的治疗方法。

人转铁蛋白受体特异性单克隆抗体的研制及其初步鉴定

目的建立能分泌人转铁蛋白受体(TfR)特异性抗体的杂交瘤细胞株,并对其分泌的抗体进行初步鉴定。方法将人肝癌细胞株HepG2分离纯化的TfR蛋白,采用常规法免疫BALB/C小鼠;采用间接ELISA法测定免疫血清抗体效价;采用常规聚乙二醇(PEG)介导法,将免疫小鼠脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞株SP2/0融合,用含HAT培养基筛选杂交瘤细胞;采用间接ELISA和Cell-ELISA法筛选TfR抗体阳性的杂交瘤细胞;采用有限稀释法进行克隆和多次亚克隆以建立稳定分泌TfR抗体的杂交瘤细胞株;将杂交瘤细胞注射经石蜡油致敏的小鼠腹腔以产腹水抗体,采用硫酸-辛酸法纯化腹水抗体;采用秋水仙素处理,计数细胞染色体数以进行杂交瘤细胞鉴定;采用免疫荧光染色法和Western blot法初步鉴定抗体与细胞表面或细胞总蛋白中TfR的结合。结果提取纯化的人TfR蛋白免疫小鼠获得成功,其1∶5 000稀释的血清抗体光吸收值(A_(490))是对照小鼠血清(1∶200稀释)的16倍以上;细胞融合率为42.22%,其中TfR抗体阳性孔20个,抗体阳性率为13.16%;抗体阳性孔B6和孔E8中杂交瘤细胞经克隆和亚克隆后建立起稳定分泌抗体的细胞株;B6杂交瘤细胞染色体数量位于56~60条之间,应为B细胞和SP2/0细胞融合而来;腹水抗体染色使HepG2细胞表面出现明亮荧光,并且能使HepG2细胞提取的总蛋白电泳图谱在95 000处出现清晰条带,表明该杂交瘤细胞分泌的抗体能特异性结合TfR蛋白。结论分泌抗人TfR抗体的小鼠杂交瘤细胞株已被筛选和建立;其分泌的抗体能与HepG2细胞的TfR特异性结合。

转铁蛋白受体单克隆抗体与偶联物治疗恶性肿瘤的护理

应用转铁蛋白受体单克隆抗体WuT9与阿霉素、顺铂偶联物导向化疗治疗33例晚期肿瘤患者,疗效良好。药物的副作用及临床观察护理应注意:(1)导向化疗中易产生乏力、困倦。护理上主要保持病房安静,使患者得到良好的休息;(2)部分患者有发热,体温38.5℃左右,给予物理降温,对症处理或保暖;(3)针对化疗易发生胃肠道反应,可先给以静脉滴注康泉、枢复宁或地塞米松5mg加胃复安10mg;(4)如发生静脉炎时,用频谱局部照射每日1次。

抗转铁蛋白受体鼠源性单链抗体基因的构建、表达及初步鉴定

目的 利用基因工程技术将鼠源性单克隆抗体WuT9改造成单链抗体。方法 从分泌抗CD71单克隆抗体的杂交瘤细胞WuT9中提取总RNA ,采用OligodT为逆转录引物 ,逆转录合成cDNA第一链 ,然后分别采用VL 和VH 框架区的PCR引物 ,扩增VH(重链可变区 )和VL(轻链可变区 )DNA片段 ,利用事先合成的存在于VL 下游引物和VH 上游引物的部分人工连接子重叠互补序列 ,将VL 和VH 的PCR回收产物进行部分重叠PCR(SOE) ,形成单链抗体基因。最后将此基因重组进表达载体pBAD gIII C中 ,经L arabinose(左旋阿拉伯糖 )诱导表达并初步鉴定。结果 构建出 70 0bp左右的单链基因 ,并获得阳性重组表达载体克隆 ,表达产物为相对分子质量 2 70 0 0左右的蛋白分子。结论 经因特网查询表明 ,单链抗体基因重链部分属于小鼠H链可变区ⅠA亚组 ;轻链属于小鼠κ轻链可变区Ⅱ亚组 ,此单链抗体基因的表达产物具有一定的特异结合活性。本研究为抗CD71单链抗体的临床应用打下了基础。

转铁蛋白受体基因表达及其抗体诊断肝癌的研究

目的研究肝癌转铁蛋白受体 (TfR)的基因表达及其单克隆抗体免疫诊断肝癌的价值。 方法对 2 0例肝癌手术标本包括癌巢组织、癌旁组织及周围正常组织进行Northernblot分析 ,了解三种组织TfRmRNA表达情况 ;通过间接免疫荧光及免疫组织化学ABC法了解肝癌细胞和正常肝细胞膜上TfR表达情况。 结果TfRmRNA表达癌组织最高 ,癌旁组织次之 ,周围正常组织最低 ,后两者间无显著差异 ;肝癌细胞膜转铁蛋白受体荧光阳性率明显高于正常肝细胞 ,两者有显著差异。免疫组织化学ABC法中 1 9例强阳性染色 ,1例阴性。 结论转铁蛋白受体的基因表达在肝癌组织中明显增高 。

人OX40胞外区基因的克隆、原核表达及单克隆抗体的制备

目的制备抗人OX40单克隆抗体,为进一步研究OX40/OX40L通路以及针对该通路进行疾病干预、疾病治疗和药物筛选奠定基础。方法 PCR扩增人OX40胞外区的基因序列,将其构建到原核表达载体pET-32a(+)中,利用大肠杆菌表达系统表达OX40胞外区蛋白,经Ni柱纯化后获得目的蛋白。以纯化的OX40胞外区蛋白为免疫原免疫小鼠,采用常规方法进行细胞融合,通过ELISA和多次克隆化培养,筛选出分泌特异性鼠抗人OX40单克隆抗体的杂交瘤细胞株;通过ELISA、Western blot和免疫荧光检测抗体的效价及特异性。结果成功构建人OX40原核表达质粒pET-32a(+)-OX40,并在BL21(DE3)中诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot鉴定、Ni柱纯化、透析后获得OX40胞外区蛋白;以此纯化蛋白为免疫原,成功制备具有较强亲和力的单克隆抗体。结论克隆表达并纯化了人OX40蛋白,成功制备针对该蛋白的高亲和力单克隆抗体,为进一步研究OX40/OX40L的生物学功能奠定了实验基础。

贫血患者血清转铁蛋白受体测定的临床意义

采用 Dot- ELISA法定量测定了 6 8例不同贫血患者的血清转铁蛋白受体 (s Tf R)水平 ,发现缺铁性贫血、溶血性贫血和急性失血性贫血患者 s Tf R均显著高于正常人 (P<0 .0 0 1) ;而慢性再生障碍性贫血患者 s Tf R显著低于正常人 (P<0 .0 0 1)。缺铁性贫血 s Tf R水平与血清铁蛋白水平呈负相关 (P<0 .0 0 5) ,溶血性贫血 s Tf R与网织红细胞计数呈正相关 (P<0 .0 0 5) ,s Tf R可以反映机体贮存铁和骨髓红细胞系造血活动。认为 s Tf R测定为诊断缺铁性贫血和判断骨髓红细胞生成的一项具有实用价值的新指标。

两个CD71单克隆抗体的生物学特性研究

本实验初步探讨ＣＤ７１单克隆抗体（ＭｃＡｂ）ＨＩ１６０和ＨＩ１６６的生物学特性，结果表明ＨＩ１６０和ＨＩ１６６对Ｔ、Ｂ淋巴细胞的活化增殖和ＣＦＵ－ＧＭ祖细胞的生长具有下调作用。ＨＩ１６０可明显抑制Ｔ、Ｂ淋巴细胞的活化增殖及ＣＦＵ－ＧＭ集落形成，而ＨＩ１６６仅抑制Ｔ淋巴细胞的活化增殖。这两个ＭｃＡｂ生物学特性的差异，可能主要取决于其所识别ＣＤ７１分子的表位不同。

转铁蛋白受体单抗化疗药偶联物动脉灌注/栓塞治疗晚期恶性肿瘤

采用转铁蛋白受体单克隆抗体与表阿霉素或卡铂偶联物通过动脉灌注或栓塞治疗18例晚期恶性肿瘤。结果:9例肝癌中,完全缓角(CR)1例,部分缓解(PR)7例,无变化(NC)1例;3例肺癌中,PR2例,NC1例;其他6例中,1例壶腹癌及1例卵巢癌为CR,2例结肠癌术后复发及1例胰头癌术后复发为PR,1例肾癌术后腰椎转移为NC。无一病变加重,总有效率(CR+PR)达83.2％。病人治疗过程中,除一过性恶心、呕吐外,无特殊不良反应。

转铁蛋白受体介导的药物转运在急性脑梗死治疗中的应用

在急性脑缺血的超早期,完整的血脑屏障(BBB)使许多治疗药物无法在有效治疗时间窗内进入脑组织发挥作用。转铁蛋白受体(TfR)单克隆抗体能有效通过受体介导的细胞内吞作用使结合的药物通过BBB,从而大大增加了治疗药物的定向选择性,使之更好地发挥治疗作用。

Elisa试剂盒法测定抗体修饰纳米粒表面OX26浓度

脑血管疾病是发病率较高的一种疾病,严重危害人类健康。为提高药物血脑屏障透过率可将药物进行抗体修饰,本文针对这种新剂型,应用Elisa试剂盒检测制剂表面是否连接有转铁蛋白受体的单克隆抗体OX26,并测定OX26浓度。

胃癌的单克隆抗体导向治疗现状与展望

胃癌的单克隆抗体导向治疗现状与展望王立夫吴裕火斤作者单位：上海第二医科大学附属瑞金医院消化科（上海２０００２５）胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，占我国全死因的第二位。虽然通过传统的手术治疗和化疗等可取得一定疗效，但对于进展期胃癌患者，其疗效并不令人满意。...

转铁蛋白受体在肝癌细胞上的表达

作者用抗转铁蛋白受体单克隆抗体抗TfR McAb,(D71)检测17例原发性肝癌患者肿瘤组织。发现14例肝癌细胞呈现特异性结合,阳性率为82.4％。其余3例肝癌细胞未检测到转铁蛋白受体(TfR),可能与肝癌细胞的分化程度或分泌程度有关。同时用抗A-FP单克隆抗体与CD71进行比较,发现肝癌胞细TfR含量高于A-FP含量。该发现为肝癌的诊断及导向治疗提供了新的较好的载体。