hnRNPA2B1通过抑制转铁蛋白受体增强胰腺癌细胞对铁死亡的抵抗

目的:探讨异质核核糖核蛋白A2B1(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2B1,hnRNPA2B1)对胰腺癌细胞铁死亡的影响及其潜在机制。方法:将3种胰腺癌PaTu8988、MIA-paca2、PANC1细胞用不同浓度Erastin处理3 d,CCK8法检测细胞活性,计算3种细胞Erastin半数抑制浓度(IC_(50))并比较其对Erastin的抵抗力;荧光实时定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法分别检测3种胰腺癌细胞中hnRNPA2B1 mRNA和蛋白的相对表达。通过GEPIA平台分析hnRNPA2B1在胰腺癌组织和正常组织中的差异性表达,通过GEO数据库下载临床数据集分析差异性表达hnRNPA2B1患者的预后。在PaTu8988细胞中干扰hnRNPA2B1表达,分别转染sh-Control、sh-hnRNPA2B1质粒;在PANC1细胞中过表达hnRNPA2B1,分别转染Vector、Flag-hnRNPA2B1质粒;分别采用qRT-PCR和蛋白免疫印迹检测转染效率,通过Transwell实验检测hnRNPA2B1对胰腺癌细胞迁移和侵袭的影响,通过CCK8法检测hnRNPA2B1对胰腺癌细胞增殖的影响;对sh-Control组和sh-hnRNPA2B1组、Vector组和Flag-hnRNPA2B1组,分别予以对照(0μmol/L Erastin)、Erastin(IC_(50)浓度)处理,通过流式细胞术检测脂质过氧化物含量,比色法检测丙二醛和组织铁含量,此外sh-hnRNPA2B1组和Flag-hnRNPA2B1组加入Erastin的同时加入铁死亡挽救剂Ferrostatin-1,坏死挽救剂Necrostatin-1或凋亡挽救剂ZVAD-FMK,台酚蓝染色法检测细胞活性;qRT-PCR和蛋白免疫印迹法分别检测胰腺癌细胞转铁蛋白受体(transferrin receptor,TFRC)、铁蛋白重链、谷胱甘肽过氧化物酶4、溶质载体家族7成员11等mRNA和蛋白相对表达水平。结果:3种胰腺癌细胞对Erastin抗性由高到低依次是PaTu8988、MIA-paca2、PANC1细胞,其Erastin IC_(50)依次为18.020、15.760、2.947μmol/L;hnRNPA2B1表达量由高到低的趋势与Erastin IC_(50)趋势相同,于PaTu8988细胞中最高,MIA-paca2细胞中次之,PANC1细胞中最低(P均<0.05);胰腺癌组织中hnRNPA2B1表达水平明显高于正常组织,高表达hnRNPA2B1患者预后较差(P均<0.05)。下调hnRNPA2B1表达后,PaTu8988细胞迁移、侵袭和增殖能力明显降低,上调则与之相反(P均<0.05)。经Erastin处理后sh-hnRNPA2B1组和Flag-hnRNPA2B1组降低的细胞活性仅可被Ferrostatin-1挽救(P<0.05);与sh-Control组相比,sh-hnRNPA2B1组脂质过氧化物、丙二醛和组织铁含量明显增高(P均<0.05);与Vector组相比,Flag-hnRNPA2B1组脂质过氧化物、丙二醛和组织铁含量明显降低(P均<0.05)。hnRNPA2B1可抑制TFRC表达,干扰hnRNPA2B1则与之相反(P均<0.05)。结论:hnRNPA2B1通过抑制TFRC表达阻止铁蓄积,从而促进胰腺癌细胞铁死亡抵抗。

转铁蛋白受体-2在铁稳态中的作用研究进展

铁是人体内非常重要的元素,不仅参与细胞构成,还广泛参与重要的生命代谢过程.体内铁稳态的维持对正常机体生长发育和健康发挥着重要作用.铁调素(hepcidin)是维持铁稳态的重要分子,hepcidin水平受许多因素的调节,近年来有研究发现转铁蛋白受体-2(transferrin receptor 2,TFR2)参与了多条hepcidin调节通路,进而调节全身铁代谢.本文就TFR2在铁稳态中的作用相关研究进展作一综述.

IDA患者血清铁调素、铁幼素、膜铁转运蛋白和转铁蛋白受体2的表达特点及意义

目的 研究缺铁性贫血（IDA）患者血清铁调素（hepcidin,Hep）、铁幼素（hemojuvelin,HJV）、膜铁转运蛋白（ferroportin,FPN）和转铁蛋白受体2 （trasferrin-receptor2,TFR2）表达特点,并探讨他们在IDA发病机制中的意义.方法 应用ELISA方法测定28例IDA患者和20例健康对照者的血清Hepcidin,HJV,FPN和TFR2浓度,并进行相关分析.同时还检测了血清铁蛋白（SF）和促红细胞生成素（EPO）.结果 ①IDA组血清铁调素水平为2.04±1.27 ng/ml,明显低于对照组的3.07±1.68 ng/ml（t=2.203 6,P〈0.05）.②IDA组的血清HJV水平为0.65±0.51 ng/ml,明显低于对照组的0.99±0.46 ng/ml（t=2.352 9,P〈0.05）.③IDA组血清TFR2水平为8.15±3.09 ng/ml,明显高于对照组的6.62±1.42 ng/ml（t=2.061 7,P〈0.05）.④IDA组的血清FPN水平为2.69±1.71 ng/ml略高于对照组的2.11±0.58 ng/ml,但差异无统计学意义（P＞0.05）.⑤SF与EPO呈负相关（r=-0.4958,t=2.911 0,P〈0.01）,与HJV和Hepcidin均呈正相关（r=0.5015,t=2.9560,P〈0.01;r=0.515 7,t=3.069 1,P〈0.01）.⑥Hepcidin与HJV呈正相关（r=0.398 3,t= 2.214 1,P〈0.05）.结论 IDA患者高表达TFR2,低表达Hep和HJV.Hep和HJV在IDA的发病中有一定的意义,TFR2对IDA的诊断有重要的意义.联合Hep,HJV和TFR2对IDA与慢性病贫血等疾病的鉴别诊断有重要意义.FPN在IDA中的意义有待于进一步探讨.

缺铁大鼠肠道黏膜铁调节蛋白-2和转铁蛋白受体mRNA的表达

目的 了解缺铁对大鼠肠道黏膜铁调节蛋白 2和转铁蛋白受体 (TfR)mRNA表达的影响。方法 建立大鼠缺铁动物模型。根据血清铁 (SI)、血清铁蛋白 (SF)、Hb结果分隐性、轻度、中度贫血 3个实验组 ,设正常对照组。取各组缺铁大鼠小块十二指肠黏膜组织 ,研磨后常规提取RNA备用。按照 5′端相同 ,3′端互补的原则 ,根据NCBIGeneBank中IRPs 2和TfR蛋白受体的cDNA序列设计引物 ,以 β actin为内参对照 ,做RT PCR。结果 随着缺铁程度加重 ,十二指肠黏膜中IRP2mRNA表达增加。中、轻度贫血组均高于对照组 (P <0 .0 1) ,中度贫血组高于隐性贫血组 (P <0 .0 5 ) ,有显著性差异 ,而相邻两组间比较无差异 (P >0 .0 5 ) ;TfRmRNA表达与IRP2mRNA有相似现象 ,随着缺铁加重表达增加 ,实验组均高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,各试验组之间比较均有差异 (P <0 .0 5 )。IRP2mRNA和TfRmRNA具有显著正相关 (r=0 .80 2 P <0 .0 1)。结论 IRP2在转录后水平通过调控TfRmRNA表达影响肠道铁的吸收 。

转铁蛋白受体指数在2型糖尿病中的意义探讨

目的通过检测2型糖尿病(T2DM)转铁蛋白受体指数的变化,探讨T2DM铁贮存状况并为诊断铁贮存提供一个新指标。方法T2DM患者30名,对照组30名。免疫透射比浊法测可溶性转铁蛋白受体(sTfR)水平,电化学发光法测血清铁蛋白(SF)浓度。结果与对照组比较,T2DM组转铁蛋白受体指数(sTfR/lgSF比值)降低,SF值升高,差异有显著性(P<0.01);sTfR水平降低,两组间差异无显著性(P>0.05)。对照组SF与sTfR呈负相关(r=-0.288,P=0.03),T2DM组无此相关性。结论转铁蛋白受体指数在T2DM组明显降低,说明T2DM患者存在由铁过载引起的铁代谢紊乱;转铁蛋白受体指数可全面地反映铁贮存情况。

低氧训练对大鼠肝脏转铁蛋白受体2及骨骼肌可溶性铁调素铁调节蛋白mRNA表达的影响

目的:研究低氧、低氧运动对大鼠血红蛋白以及血清、骨髓、肝脏总铁含量的影响,进一步探讨机体铁代谢上游调节因子肝脏转铁蛋白受体2(TfR2)和骨骼肌可溶性铁调素调节蛋白(s-HJV)的调节作用。方法:雄性SD大鼠32只,随机分为常氧安静组(NC)、常氧运动组(NE)、低氧安静组(HC)和低氧训练组(HE)。NC组在标准环境下安静饲养;NE组进行跑台训练:速度21～25 m/min,每周增1 m/min,坡度为0,1 h/天,6天/周;HC组进行低氧暴露:13.6%氧,8 h/天,6天/周;HE组同NE组同时进行跑台训练后再与HC组同时进行低氧暴露。应用血细胞自动分析仪检测大鼠血红蛋白浓度,分光光度计法检测大鼠血清铁,原子吸收法检测大鼠骨髓、肝脏总铁含量,RT-PCR检测大鼠肝脏s-HJV mRNA的表达,Western blot检测骨骼肌TfR2的表达。结果:(1)与NC组相比,NE、HE、HC组大鼠血红蛋白和血清铁浓度明显升高,而HE组明显高于其他三组(P<0.01);(2)与NC组比,HC组骨髓总铁含量明显升高(P<0.05),HE组明显高于其他三组(P<0.05,P<0.01);与NC组相比,NE组肝脏总铁含量明显升高(P<0.05),而HE组明显低于其他三组(P<0.05);(3)与NC和NE比,HC组和HE组骨骼肌s-HJV mRNA明显升高(P<0.05)。(4)与NC组比,NE、HC和HE组肝脏TfR2明显降低,而HE明显低于其他三组(P<0.05)。结论:适度运动和单纯低氧刺激均使大鼠机体铁代谢能力提高,而低氧训练更有利于机体铁动员,增加肝脏和骨髓铁的利用,血清铁浓度明显升高,用于红细胞生成增加,其中大鼠机体铁代谢上游调节因子肝脏TfR2和骨骼肌s-HJV mRNA表达的适应性变化是引起大鼠机体铁代谢发生变化的重要调节因素之一。

转铁蛋白受体2及其功能与相关疾病

转铁蛋白受体 2 (transferrinreceptor 2 ,TfR2 )是最近发现的一种重要铁代谢蛋白 .研究显示它不仅是一种介导肝脏细胞铁摄取的主要蛋白 ,而且在调节小肠铁吸收方面起着极其关键的作用 ,是控制肝脏铁调素合成和释放的关键成分 .已经证实 ,TfR2基因突变是遗传性血色素沉着病的重要原因之一 .

延边黄牛转铁蛋白受体2基因克隆与序列分析

【目的】克隆延边黄牛转铁蛋白受体2(transferrin receptor 2,TFR2)基因,并分析该基因在不同组织器官中的表达分布。【方法】通过提取肝脏组织总RNA,采用RT-PCR及RACE方法克隆延边黄牛TfR2基因,采用生物信息学软件进行序列分析,用半定量PCR(SqRT-PCR)方法分析TfR2基因在不同组织器官中的表达分布规律。【结果】①成功克隆出了延边黄牛TfR2基因完整ORF区及3′UTR区(GenBank登录号:GU553087),该基因全长2 901 bp,ORF区2 412 bp,编码803个氨基酸;②延边黄牛TfR2基因核苷酸序列与其它物种的同源性在80%以上,不同物种间TfR2基因氨基酸序列,尤其是影响其功能的关键氨基酸位点高度保守;③各物种TfR2蛋白功能结构域同样高度保守;④牛TfR2基因主要在肝脏中表达,其它组织,如脾脏、心脏、肾脏和肠道(十二指肠)中也存在少量表达。【结论】不同物种间TfR2基因具有高度同源性,功能结构域及组织分布规律具有高度保守性。

增生性贫血患儿骨髓单个核细胞转铁蛋白受体2表达情况及其意义探讨

本研究旨在探讨增生性贫血患儿骨髓单个核细胞转铁蛋白受体2(transferrin receptor 2,TfR2)表达情况,分析TfR2 mRNA表达水平与贫血程度、骨髓红系增生程度、基础疾病种类和铁状况等指标的相关关系,评价TfR2受体蛋白在红系造血方面的作用和在增生性贫血诊断方面的应用价值。实验分为两组:实验组系我院儿童血液肿瘤科收治的40例增生性贫血患者,对照组系经骨髓检查排除红系疾病和血液系恶性肿瘤的10例患者。收集研究对象的骨髓抗凝标本,采用荧光定量PCR检测增生性贫血患儿骨髓单个核细胞TfR2 mRNA表达水平,分析其与骨髓增生程度、原发疾病种类以及机体铁状况的关系。结果表明,增生性贫血组骨髓单个核细胞TfR2相对表达量显著高于对照组;增生性贫血组TfR2相对表达量与外周血Hb含量呈负相关关系(rs=-0.715),而与骨髓幼红细胞比例呈正相关关系(rs=0.533)。结论:增生性贫血患者TfR2表达水平增高,与骨髓增生程度、外周血贫血程度密切相关。

儿童急性淋巴细胞白血病单个核细胞转铁蛋白受体2表达及其意义

目的研究急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿单个核细胞转铁蛋白受体2(TFR2)基因表达情况,分析其与儿童ALL不同预后因素的相关性。方法采用荧光定量逆转录聚合酶链反应法测定56例新发ALL患儿和15例对照患儿骨髓或外周血单个核细胞TFR2相对表达量。结果泼尼松敏感组患儿TFR2相对表达量(中位数为0.0848)显著高于泼尼松不敏感组(中位数为0.0126,P=0.038)。低危组、中危组和高危组TFR2相对表达量的中位数分别为0.1677、0.0728和0.0125,差异具有统计学意义(P=0.003)。初诊时外周血白细胞(WBC)计数WBC<50×109/L、(50～100)×109/L和≥100×109/L3组患儿TFR2相对表达量的中位数分别为0.0974、0.0294和0.0078,差异也具有统计学意义(P=0.013)。另外,B细胞ALL和T细胞ALL患儿TFR2相对表达量的中位数分别为0.0636和0.0065,B细胞型TFR2表达水平显著高于T细胞型(P=0.004)。秩相关统计分析表明,ALL患儿单个核细胞TFR2表达量与初始外周WBC总数、外周血幼稚细胞比例、幼稚细胞绝对计数的秩相关系数分别为-0.398、-0.307、-0.421,具有负相关关系(P分别为0.003、0.022、0.001)。结论TFR2可能为儿童ALL一个新的分子生物学预后因素,在ALL患儿预后评估和指导个体化治疗方面可能具有临床应用价值。

不同强度跑台训练大鼠肝铁调素调节蛋白和转铁蛋白受体2的变化

目的:研究不同强度跑台训练大鼠肝铁调素调节蛋白(hemojuvelin,HJV)及转铁蛋白受体2(transferrin receptor2,Tfr2)mRNA的变化,探讨HJV和Tfr2在运动性低血红蛋白发生中的作用。方法:18只雄性Wistar大鼠(300±10g)随机分为对照组(CG)、适度运动组(MG)和过度运动组(SG)。对照组大鼠不运动,适度运动组和过度运动组大鼠分别进行不同负荷的递增负荷跑台训练。于运动5周后安静时取材,采用实时定量荧光PCR(Real Time RT-PCR)检测大鼠肝组织匀浆中HJV、neogenin(HJV受体)和Tfr2 mRNA表达;Western Blot检测肝细胞Tfr2蛋白表达。结果:(1)过度运动组大鼠HJV、neogenin和Tfr2 mRNA均显著高于对照组和适度运动组(P<0.01,P<0.05);(2)适度运动组大鼠肝Tfr2 mRNA和蛋白表达量显著低于对照组(P<0.05),HJV和neogenin mRNA表达量与对照组相比无显著差异(P>0.05)。结论:长时间大强度运动后肝HJV和Tfr2表达增加,这可能与运动性低血红蛋白的发生有关。

胃癌患者血清白介素2受体和转铁蛋白受体的检测及意义

目的 了解胃癌患者血清白介素 2 (IL - 2R ,CD2 5)及转铁蛋白受体 (TfR ,CD71 )的表达。方法 应用卵白素·生物素·过氧化物酶复合物 (ABC)法检测 38例胃癌患者血清IL - 2R ,CD2 5和TfR ,CD71 。结果 胃癌患者血清IL - 2R和TfR明显高于良性胃病组和正常对照组 (P <0 .0 1 ) ,而且随胃癌病情的发展 ,血清IL - 2R和TfR也呈升高趋势 ,化疗后胃癌IL - 2R和TfR也明显降低。结论 IL -

转铁蛋白受体2研究进展

转铁蛋白受体 2(transferrin receptor 2,TfR2)是一种新近发现的铁转运和铁稳态调节蛋白,在基因结构、蛋白结构、与转铁蛋白(Tf)结合和铁摄取方面与转铁蛋白受体 1(transferrin receptor 1,TfR1)具有相似性,但在mRNA表达的组织分布和调节方面有很大的差异。TfR2 mRNA不具有3’-端未翻译区的铁效应元件(Iron Responsive Element,IRE)结构,其表达水平不受细胞内铁状况的调节,在肝细胞、红系前体细胞、K562细胞和HepG2细胞高水平表达。TfR2的突变可导致遗传性血色病Ⅲ的发生。TfR2可能在铁转运、铁代谢调节、肝脏功能和红系细胞分化发育方面具有十分重要的作用,可能是红系前体细胞的一种分子标志。现综述TfR2基因和蛋白的结构特点、mRNA的表达和调控,及其可能的生物学功能。

银屑病病人外周血淋巴细胞白细胞介素2受和转体转铁蛋白受体的表达

银屑病病人外周血淋巴细胞白细胞介素２受和转体转铁蛋白受体的表达２５００３１济南济南军区总医院刘翠杰，刘华昌，武翠华，徐军关键词银屑病；受体，内源性物质；受体，白介素中国图书资料分类号Ｒ７５８．６３应用ＣＤ单克隆抗体，借助致敏红细胞花环试验检测３８例银...

病毒肽/HLA-A2复合物与抗转铁蛋白受体单链抗体融合蛋白的构建、表达及鉴定

目的制备抗转铁蛋白受体单链抗体与病毒肽/HLA-A2的融合蛋白。方法利用重组DNA技术将HLA-A2基因和转铁蛋白受体单链抗体(TfRscFv)基因,用柔性的linker(Gly-4-Ser)3连接并克隆到原核表达载体pET28a(+)上,转化大肠埃希菌BL21(λDE3)菌株,获取重组子,经IPTG诱导表达目的蛋白。将纯化的目的蛋白和β2微球蛋白(β2m)与HLA-A2限制性的乙肝病毒(HBV)核心抗原肽HBcAg18-27在体外进行稀释复性,形成HBcAg18-27/HLA-A2/TfRscFv融合蛋白。利用ELISA和微球结合试验检测融合蛋白的空间构象。结果构建的融合蛋白基因具有正确的序列,经IPTG诱导后以包涵体形式表达的蛋白分子量正确,体外稀释复性后的融合蛋白具有正确的HLA-A2空间构象。结论成功构建了HBcAg18-27/HLA-A2/TfRscFv融合蛋白,为进一步将该融合蛋白通过其单链抗体加载到肿瘤细胞表面从而诱导乙肝病毒肽特异性细胞毒性T淋巴细胞杀伤肿瘤细胞奠定了物质基础。

NIDDM淋巴细胞白细胞介素-2受体及转铁蛋白受体的表达

为了探讨NIDDM患者外周血中单个核细胞白细胞介素 - 2受体 (IL - 2R、CD2 5)及转铁蛋白受体 (TfR、CD71)的表达情况 ,了解NIDDM免疫功能状态 ,采用卵白素·生物素·过氧化物酶复合物 (ABC)法检测了 73例不同病程NIDDM患者外周血的CD2 5、CD71水平。结果表明 :NIDDM患者有无并发症CD2 5、CD71均显著低于正常对照组 (P <0 .0 1) ,有并发症组显著低于无并发症组 (P <0 .0 1)。提示NIDDM存在细胞免疫功能的降低 ,且随着病情的进一步加重其降低更明显 。

淋巴细胞白介素-2受体及转铁蛋白受体在肝硬化、肝癌患者中的表达

为探讨肝硬化、肝癌患者机体细胞免疫功能状态 ,采用卵白素·生物素·过氧化物酶复合物法检测其外周血淋巴细胞白介素 -2受体 (IL -2R)及转铁蛋白受体 (TfR)的表达。结果显示 :肝硬化、肝癌患者外周血淋巴细胞IL -2R及TfR的表达比正常对照组明显降低 ,差异有高度显著性 (P <0 .0 1) ,但肝功能分级与IL -2R及TfR表达无关 (P >0 .0 5 )肝癌患者随着病程的进展 ,IL -2R及TfR的表达进一步降低 ,Ⅲ期与Ⅰ期相比差异有高度显著性 (P <0 .0 1)。提示 :肝硬化、肝癌患者存在细胞免疫功能下降。肝癌患者随着病情加重细胞免疫功能下降更明显。

Graves病淋巴细胞白介素2受体及转铁蛋白受体的表达

应用卵白素·生物素·过氧化物酶复合物（ＡＢＣ）法检测５４例Ｇｒａｖｅｓ病患者外周血淋巴细胞ＩＬ－２Ｒ，ＣＤ２５及ＴｆＲ，ＣＤ７１的表达。结果表明，Ｇｒａｖｅｓ病亢进期患者ＩＬ－２Ｒ与ＴｆＲ均显著高于正常对照组（Ｐ＜０．００１），缓解期ＩＬ－２Ｒ及ＴｆＲ迅速恢复（与亢进期比，Ｐ＜０．００１），但ＩＬ－２Ｒ仍高于正常对照组（Ｐ＜０．００１），而ＴｆＲ与正常对照组差异无显著性（Ｐ＞０．０５），ＩＬ－２Ｒ与Ｔ３（ｒ＝０．５８６８，Ｐ＜０．０１），Ｔ４（ｒ＝０．４９８５，Ｐ＜０．０１）呈正相关，ＴｆＲ与Ｔ３（ｒ＝０．４８５２，Ｐ＜０．０１），Ｔ４（ｒ＝０．４２３８，Ｐ＜０．０１）呈正相关。

IL-2受体及TfR在慢性肺心病患者急性发作期的变化

观察了25例慢性肺心病急性发作期患者体内激活T细胞中IL－2R和TfR的状况，以及CD5、CD4、CD8的变化并与正常人进行了对比分析。结果显示患者IL－2R和TFR明显低于对照组，CD5细胞和CD4也明显降低。说明该病患者免疫功能紊乱，应注意用免疫调节剂改善机体状况。