NaCl胁迫对转BADH-反义4Cl基因二色胡枝子组培苗的影响

本研究以转BADH-反义4Cl二色胡枝子(L.bicolor)为研究对象,对其进行抗盐性试验。通过在茎段增殖培养基添加不同浓度的Na Cl(0g/L,2g/L,4g/L,6g/L,8g/L)和生根培养基中添加不同浓度的Na C(0g/L,1g/L,2g/L,3g/L,4g/L),对转l BADH-反义4Cl基因的不同株系,进行茎段增殖和生根培养。结果表明培养基中添加2g/L Na Cl不能抑制生根,适合作为生根阶段的选择剂浓度。当Na Cl浓度达到4g/L时茎段分化率低下,该浓度可作为适合茎段分化的选择剂浓度。Na Cl浓度大于6g/L就抑制了茎段分化,Na Cl浓度大于3g/L浓度就抑制了根的生长。两个浓度为胡枝子的筛选浓度或极限浓度。综合茎段增殖系数、平均分化芽数量等测定因素,22号株系在转入双基因BADH-反义4Cl之后耐盐性相对较高。综合生根率、平均生根数量等因素,74号株系在转入双基因BADH-反义4Cl之后耐盐性相对较高。本实验旨在为转基因胡枝子的育种提供一定的理论基础。

NaCl胁迫对转BADH-反义4CL基因二色胡枝子盆栽苗的影响

为探讨外源BADH基因的导入对植物渗透调节的影响,本文以二色胡枝子盆栽苗为例,在不同浓度NaCl溶液(0、0.5g/L、1.0g/L、2.0g/L)处理下,对转BADH-反义4CL基因的二色胡枝子和非转基因植株的部分生理指标进行研究,提出了外源BADH基因的导入可提高二色胡枝子植株在盐胁迫下的渗透调节能力,且不同转基因株系间存在差异的观点。

反义4CL1基因转化烟草调控木质素生物合成

将控制木质素生物合成的关键限速酶 (香豆酸CoA连接酶 ,4CL)基因 4CL1反向插入植物表达载体pBI12 1构建表达载体 ,通过农杆菌叶盘法介导转化烟草 ,获得一批转基因抗性植株 .经PCR检测 ,证明 4CL1基因已成功反义转入到烟草植株中 .通过对转基因植株和对照植株的纤维素和木质素含量的对比分析 ,发现反义 4CL1基因转化植株的纤维素含量比对照提高了 11 4 % ,而木质素含量比对照降低了 19 1% .

反义4CL基因转化桉树调控木质素生物合成的研究

以桉树主栽品种尾叶桉U6(Eucalyptus uroplrylla)为试材,通过根癌农杆菌介导法,将反义4-香豆酸∶辅酶A连接酶基因(4-eoumarate:CoA ligase)导入尾叶桉U6叶盘,经卡那抗性筛选共获得了6株转化植株,其中3株转化植株的RT-PCR和Northern blot结果显示内源4CL基因的表达受到抑制。

GRP1.8融合反义4CL1基因调控烟草木质素生物合成

该研究成功地将从刺槐 (Robiniapseudoacacia)中克隆得到的定位于形成层表达的GRP1 8启动子 ,分别与GUS报告基因及从毛白杨 (Populustomentosa)中克隆的香豆酸连接酶 (4CL1)基因连接构建成GRP1 8 GUS和GRP1 8 anti 4CL1融合基因 ,转基因于烟草植物 .经组织化学检测分析 ,GUS基因成功地由GRP1 8启动子驱动定位于形成层表达 ;融合基因GRP1 8 anti 4CL1的表达明显地改变了转基因烟草植株的木质素和纤维素的含量和比例 .转基因烟草的木质素含量较对照平均降低了 13 7% ,而转基因植株的纤维素含量较对照升高了 15 6 % .

尾叶桉U6 4CL基因cDNA克隆及反义表达载体的构建

[目的]为了获得桉树4-香豆酸:辅酶A连接酶(4CL)基因,构建植物反义表达载体,研究4CL基因对木质素的调控机理。[方法]从尾叶桉U6幼茎组织中提取总RNA,经RT-PCR扩增得到1.4 kb cDNA片段,将其克隆到质粒载体pGEM-T Easy。[结果]测序结果表明,该基因1413 bp,编码471个氨基酸。克隆片段经双酶切消化,反向插入到植物表达载体pBI121上,构建成4CL反义基因表达载体。通过冻融法将携带反义cDNA的植物表达载体质粒导转入根癌农杆菌EHA105,得到完整的Ti质粒表达载体系统。[结论]为该基因转化桉树的主栽品种尾叶桉U6以降低其木质素含量奠定了基础。

Par-4基因在PC12细胞缺氧后的表达及其反义寡核苷酸的抗凋亡作用

目的研究前列腺凋亡反应基因4(Par4)在PC12细胞缺氧后的表达及其反义寡核苷酸(ASODN)的抗凋亡作用。方法在正常或缺氧条件下培养PC12细胞,分组将不同浓度Par4反义寡核苷酸转染PC12细胞,吖啶橙/溴化乙锭荧光染色观察PC12细胞形态,流式细胞分析评价凋亡百分率。Westernblot测定Par4蛋白表达量,比色法检测Caspase3的酶活性。结果缺氧24h,PC12细胞中Par4蛋白表达量上调157.42±7.53,明显高于正常对照组10.51±3.36(P<0.01)。10μmol/L的Par4,ASODN使Par4蛋白降为31.79±3.09,明显低于缺氧组157.42±7.53(P<0.01)。Par4的ASODN抑制缺氧诱导的PC12细胞凋亡,10μmol/LASODN使细胞凋亡百分数降为(34.5±3.5)%,明显低于缺氧组的(69.3±5.7)%(P<0.05)。Par4的ASODN抑制缺氧诱导的PC12细胞中Caspase3的酶活性上调,10μmol/LASODN使其活性降为0.549±0.078,与缺氧组0.917±0.051相比,差别有显著性意义(P<0.05)。结论Par4基因可能参与了缺氧诱导的PC12细胞损害。Par4ASODN可拮抗缺氧诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与Caspase3酶活性下调有关。

反义Smad_4基因转染对抗昆明小鼠肝脏纤维化发展的效果观察

目的探讨反义Smad4基因阻断TGF β信号传导系统对抗小鼠肝脏纤维化的效果。方法将反义Smad4基因导入CCl4 /乙醇诱导的昆明小鼠纤维化肝脏 ,用Southernblot检测整合情况 ,用Northernblot、RT PCR及Westernblot方法观察Smad4的表达 ,比较各组小鼠肝脏纤维化程度。结果反义Smad4基因可整合到病毒处理组小鼠肝脏。纤维化肝脏Smad4表达较正常组明显增强。经转基因处理后 ,小鼠纤维化肝脏Smad4的表达明显弱于对照组 ,肝脏纤维间隔不同程度地减少、变窄或不完整 ,纤维化程度也有所减轻。结论反义Smad4基因能有效减少Smad4基因的表达 ,进而部分阻断TGF β信号传导系统 ,以阻止贮脂细胞的活化 ,减少细胞外基质的产生 ,从而减缓肝纤维化的发展。

反义4CL基因调节烟草木质素生物合成

采用根癌农杆菌介导法的叶盘转化法,将紫穗槐反义4CL基因片段导入烟草中,获得T0代阳性转化植株。T0代转基因植株自花授粉,收获种子,种植后获得T1代植株。PCR、RT-PCR(T1代)检测、目的片段测序的结果表明,反义4CL基因已经稳定遗传到T1代中。T1代烟草阳性植株和阴性植株的比例为77:23,接近于3:1。两株T1代烟草转化植株q RT-PCR及4CL酶含量检测表明,叶片4CL1基因表达量较野生植株降低了19.51%;茎4CL酶含量降低了10.50%,说明该反义基因能够干扰烟草4CL基因的表达。T1代烟草茎木质素含量平均下降了11.87%,根木质素含量降低了14.23%。种植60 d的转基因植株与野生型植株生长一致,在株高、株重等方面差异不显著(p>0.05),说明反义4CL基因的转入在降低了木质素含量的同时并没有影响烟草的正常生长。

降低木质素、提高抗逆性的无标记植物表达载体的构建

采用高保真酶用PCR方法从pMD18-BADH载体上扩增出目的基因BADH,替换pBI121质粒中的gus基因,构建pBI121-BADH植物表达载体。经过2对引物检测,证明pBI121-BADH载体构建正确。又从pBI121-BADH质粒中扩增出35s-BADH-nos片段,所用引物加上了Nhe I和Cla I接头,扩增片段经回收后插入到pUCm-T载体中测序。测序表明,所扩增的35s-BADH-nos片段与模版同源性为100%。将测序正确的质粒pUCm-35s-BADH-nos用Nhe I和Cla I酶切后连接到进行了相同酶切的pBI121-xylA载体上,用35s-BADH-nos片段取代pBI121-xylA载体上的npt II基因片段,构建pBI121-xylA-BADH双元植物表达载体,该载体经PCR检测和酶切检测,与预期结果相同。最后,用Pme I、Cla I从pBI121-xylA-BADH上切出片段35s-BADH-nos,将其连接到进行了相同酶切的pt4CL1-p载体上,使35s-BADH-nos片段取代pt4CL1-p载体上的npt II基因片段,构建了无选择标记的反义4CL-BADH植物双元表达载体。