转mdr1基因诱导CIK细胞耐药并保持肿瘤杀伤活性

目的 将多药耐药基因 (mdr1)转入细胞因子诱导的杀伤 (cytokine inducedkiller,CIK)细胞 ,观察其是否产生耐药性并且保持肿瘤杀伤活性。方法 用IFN γ ,CD3单抗 ,IL 2 ,IL 1等细胞因子体外诱导外周血单个核细胞获得CIK细胞。采用电穿孔方法将mdr1基因表达质粒pHamdr转入CIK细胞。转染后 72h提取细胞总RNA ,DNA酶消化残留质粒DNA后进行RT PCR ,鉴定mdr1基因表达 ;流式细胞仪检测细胞膜耐药蛋白 (P gp)表达。四唑蓝比色法 (MTT)检测转基因后CIK细胞对阿霉素和秋水仙碱的耐药性 ;同时检测转染前后CIK细胞对MCF7细胞 (人类乳腺癌细胞系 )的杀伤活性变化。结果 转染mdr1后的CIK细胞mdr1mRNA阳性 ,P gp阳性的CIK细胞为 2 1%～ 37% (平均 2 7% )。转染后CIK细胞获得了多药耐药性 ,对阿霉素的IC50 值较转染前升高了 2 2 .3～ 4 5 .8倍 ,对秋水仙碱的IC50 值升高了 6 .7～ 11.35倍。转染前后CIK细胞对MCF7肿瘤细胞的杀伤活性无明显变化 (P >0 0 5 )。结论 CIK细胞转入mdr1基因后获得了多药耐药性 ,转染后的CIK细胞仍然保持原有的肿瘤细胞杀伤活性。

导入MDR1的脐血有核细胞对化疗药物耐受性的体外研究

目的探讨一种抵抗大剂量化疗药物的方法。方法通过腺病毒载体介导使多药耐药(MultidrupResistance,MDR1)基因转染入脐血有核细胞(CordBloodNucleateCells,CBNC),提高其对化疗药物的耐受性。结果转染MDR1基因的CBNC对化疗药物有明显的抵抗性(P<0.01,与未转染的CBNC相比)。结论通过腺病毒介导的MDR1基因转染CBNC能有效的抵抗化疗药物对其的损伤,从而有望对临床肿瘤的大剂量化疗提供一种有效的防护细胞损伤的方法,提高化疗效果。

连翘苷经血脑屏障体外透过机制研究

目的：研究连翘苷经血脑屏障的体外透过机制。方法：以0（阴性对照）、10、25、50、75、100μg/ml连翘苷溶液培养大肠癌MDR1基因转染的马丁达比犬肾上皮（MDCK-MDR1）细胞24 h,刃天青法检测细胞活力并计算细胞生存率。以10、25、50、75、100μg/ml连翘苷溶液培养MDCK-MDR1细胞10 min后,检测胞内连翘苷含量并绘制质量浓度-摄取速率曲线;0（阴性对照）、50、100μg/ml连翘苷溶液培养MDCK-MDR1细胞3 h后,倒置荧光显微镜下观察细胞紧密连接蛋白结构。结果：与阴性对照比较,10~100μg/ml连翘苷溶液培养细胞24 h后细胞存活率无明显改变。在10~100μg/ml质量浓度范围内,MDCK-MDR1细胞摄取速率与连翘苷的质量浓度不呈线性关系,有逐渐饱和趋势。50、100μg/ml连翘苷溶液培养细胞3 h后,细胞紧密联接蛋白完整。结论：在透过模拟血脑屏障时,连翘苷的吸收可能为被动转运结合主动转运,其质量浓度对细胞紧密联接蛋白有影响。