温州地区767例腹泻患儿A群轮状病毒感染分析

目的分析浙江温州地区腹泻患儿A群轮状病毒感染情况。方法收集2013年9月～2014年9月门诊及住院767例腹泻患儿粪便标本,采用胶体金免疫层析法检测,检测结果应用SPSS 19.0统计软件进行统计分析。结果 767例腹泻患儿中,有156例检出轮状病毒阳性,阳性率为20.3%。其中,0～6个月、6个月～1岁、1～2岁、2～3岁、〉3岁患儿RV阳性率分别为11.1%、22.3%、35.4%、42.9%、5.6%,而1～2岁、2～3岁这两个年龄段的腹泻患儿RV感染阳性率明显高于其他年龄段的患儿,差异有统计学意义（P〈0.01）;男性患儿与女性患儿间的阳性率分别为18.6%和22.8%,差异无统计学意义（χ2=2.056,P〉0.05）;秋冬季10月、11月、12月以及次年的1月是RV感染高峰,其阳性率分别为39.2%、43.3%、43.1%、32.1%,不同月份之间阳性率差异有统计学意义（χ2=107.439,P〈0.01）。结论 1～3岁儿童是A群轮状病毒感染高发年龄段群体,每年秋冬季节高发。

轮状病毒LLR疫苗株非结构蛋白NSP4基因稳定性研究

目的研究轮状病毒(RV)LLR疫苗株NSP4基因的遗传特征及基因稳定性,为疫苗的质量控制提供依据。方法将LLR株轮状病毒毒种LLR38代在原代牛肾细胞上连续传至49代,提取第38、43、44、49代病毒RNA。通过RT-PCR扩增NSP4基因片段,将其克隆入质粒pGEM-T中,进行序列测定与分析。结果 LLR株NSP4基因全长751 bp,含编码175个氨基酸的单一的开放读码框架(ORF)。各代次病毒的NSP4基因核苷酸与推导的氨基酸序列完全一致,与GenBank中LLR参考株(AY219873)进行比较,核苷酸与推导的氨基酸同源性分别为99.1%和99.7%,各关键功能区均未发生改变。与27株A～F不同基因群RV代表株进行比较,LLR株与A基因群RV的NSP4同源性较高,核苷酸推导的氨基酸同源性为89.2%～95.5%;与B、C、D、E、F基因群RV核苷酸推导的氨基酸同源性分别为83.5%～87.5%、85.2%～87.5%、65.9%～67.8%、27.6%～30.8%、77.8%;系统发生树显示LLR株与A基因群RV在一个分支内。结论轮状病毒LLR疫苗株在原代牛肾细胞上连续传代NSP4基因遗传特性极其稳定,从分子水平证明LLR疫苗株毒种及其生产的疫苗是安全的。

检测痰液中轮状病毒抗原对小儿肺炎的意义

近年研究表明,轮状病毒(RV)也是小儿肺炎的重要病原之一.本文旨地探讨痰液RV检测对小儿肺炎病原学的诊断价值.1 临床资料1.1 诊断标准 小儿肺炎诊断标准参照1978年成都会议标准1.2 对象 121例小儿肺炎病例为本院儿科1995年3月至1998年2月住院患儿.其中男37例,女64例,男:女为0.89:1.年龄为15天～8岁,以2岁以下的婴幼儿多见.发病至就诊时间3小时～21天.

1568例婴幼儿腹泻轮状病毒检测及流行病学特征分析

目的对1568例婴幼儿腹泻患者进行粪便轮状病毒（RV）抗原检测，分析其流行病学特征。方法以免疫金标记技术对2012年1-12月来我院就诊的腹泻患儿的1568例粪便标本进行RV抗原检测，并对检测结果进行统计分析。结果1568例粪便标本中，阳性检出632例，阳性率为40．3％；不同性别腹泻患儿的阳性检出率差异不显著，无统计学意义（P〉0．05）；10～12月的阳性检出率最高，其中12月最高，为51．7％。结论RV是婴幼儿腹泻的主要病原，其发病具有显著的季节性，建议于流行季节为6～24月龄的婴幼儿接种疫苗。

双黄连、黄芪联用对小儿急性轮状病毒性肠炎的疗效观察

目的:评价双黄连粉针剂、黄芪注射液联合应用对小儿急性轮状病毒肠炎的疗效。方法:通过对照观察50例患儿应用双黄连、黄芪联合治疗急性轮状病毒性肠炎的疗效。结果:观察组显效率为66.0％,总有效率为92.0％,与对照组相比均具有高度显著性差异。结果:说明双黄连、黄芪联用对小儿急性轮状病毒性肠炎具有起效快、疗效好、止泻时间快、安全可靠、无毒副作用,值得临床推广应用。

乳酸菌重组表达TGEV、PEDV和RV抗原蛋白的研究

乳酸菌能够耐受动物胃肠道中高浓度的胆盐和各种酶类,在肠壁上黏附定植,同时对宿主的免疫系统有调节作用,特别是能诱导s Ig A的分泌,产生更为理想的黏膜免疫效果,进而引起全身性系统免疫反应。因此将猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪轮状病毒(RV)这3个具有肠组织嗜性的腹泻病毒的主要保护性抗原基因在乳酸菌中表达,以期为胃肠道疾病的预防提供一种新的途径。

哺乳仔猪轮状病毒和肠产毒性大肠杆菌混合感染病例的诊治

2022年8月中旬广西地区某规模化养猪场产房中7~15日龄哺乳仔猪发生严重腹泻和呕吐,甚至死亡,且死亡率较高。为查明病因和控制该病,试验首先根据临床症状和病理剖检结果进行初步判断;然后采集病料,分别对病毒性病原和细菌性病原进行进一步检测,并针对细菌性病原进行药敏试验;最后根据诊断结果进行有针对性的治疗。结果表明:腹泻哺乳仔猪小肠壁呈薄的半透明状,部分肠段呈灰黄色和灰黑色;肠壁充血,内容物为絮状的黄色或灰色液体;胃内充满黄色液体,可见少量凝乳块;初步判断为轮状病毒(RV)或猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)和大肠杆菌的混合感染。进一步检测发现,病料中A群轮状病毒(RVA)呈阳性,猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和PDCoV呈阴性。从病料中分离到1株肠产毒性大肠杆菌(ETEC);该分离株对头孢曲松、庆大霉素和卡那霉素敏感,对氟苯尼考、多西环素和恩诺沙星中介,对阿莫西林、替米考星、泰万菌素和新霉素耐药。对产房腹泻仔猪按2~3 mL/头的剂量灌服10%庆大霉素进行治疗,每天1次,连续3 d,仔猪腹泻情况得到了有效控制。说明导致该场哺乳仔猪发生严重腹泻的主要原因为RV和ETEC混合感染,采取的治疗措施具有良好的效果。

北京婴幼儿腹泻中G1、G3型轮状病毒VP7基因分子进化动态分析

北京儿童腹泻中G1和G3型轮状病毒(Rotavirus,RV)的流行随时间动态变化。鉴于G1和G3型RV在疫苗研发设计中的重要地位,本研究依据前期对2007～2017北京腹泻就诊患儿中RV流行的监测结果,分别选取G1(15例)和G3(18例)型RV标本,应用DNAStar、MEGA 6.0和BEAST软件包及Datamonkey在线工具,分析和预测11年来其主要中和抗原VP7基因的分子进化动态。结果显示G1和G3型RV同近年世界各地的各自主要流行株之间的进化距离近,相比同一进化树分支内参考株的VP7基因并没有表现出特有的氨基酸变异,提示并未有特别的基因变异直接改变北京G1和G3型RV的流行。本研究中北京G1和G3型RV最近共同祖先株形成时间分别约为2005年和1996年,其VP7基因平均进化速率分别为2.29×10^(-3)和5.11×10^(-4)氨基酸替换·位点^(-1)·年^(-1)。尽管G1型的变异速率大于G3型,但有意思的是它们均无正向选择变异位点。群体流行历史(Bayesian skyline plot,BSP)分析显示人群中G1和G3型RV的感染水平呈现缓慢下降,并均在2010年前后出现了跳跃式下降,随后有所上升并维持在较平稳的感染水平,基本符合北京腹泻儿童中RV流行趋势监测,据此推测群体免疫压力可能是影响G1和G3型RV的流行分布随时间动态变化的原因。分子分析结果还显示本研究中G1和G3型RV和相应型别疫苗株之间的进化距离远,且均在主要抗原区存在变异,这些是否对疫苗应用效果产生影响仍需要对RV的流行进行持续监测。

猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪A群轮状病毒多重PCR检测方法的建立

为了能够同时快速准确检测出猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（Porcinetransmissible gastroenteritis virus,TGEV）及猪A群轮状病毒（Porcine rotavirus,RV）,试验通过设计引物、优化PCR条件构建了一个能同时检测出TGEV、PEDV及RV的多重PCR方法。结果表明：该方法能同时检测到TGEV、PEDV及RV,而对猪瘟病毒（CSFV）、猪呼吸与繁殖综合征病毒（PRRSV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪圆环病毒Ⅱ型（PCV-2）、细小病毒（PPV）、日本乙型脑炎病毒（JEV）、牛病毒性腹泻病毒（BVDV）等无扩增,TGEV、PEDV及RV的最低检测浓度为1×102拷贝/μL。说明试验设计的多重PCR方法不仅省时、省力,而且具有敏感性高、特异性强等优点。

120例秋季腹泻小儿的心肌酶观察

目的探讨婴幼儿秋季腹泻患儿的心肌酶学变化。方法将2012年2月-2015年2月我院诊治的120例婴幼儿秋季腹泻患者纳入研究,轮状病毒阳性者入观察组共67例,轮状病毒阴性患儿53例作对照组,测定两组AST、CK、CK—MB、LDH、HBDH及心电图的变化。结果观察组的AST、CK、CK-MB、HBDH明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组心电图异常率明显高于对照组(P<0.01)。结论轮状病毒不仅可以侵犯到人体的胃肠道系统,还有可能进入呼吸道等部位,造成心肌损伤乃至小儿病毒性心肌炎。心肌酶谱是反映心肌损害的特异性指标,RV肠炎患儿的临床治疗,可将心肌酶谱作为一项重要的基础性检测指标,以便早期判断心肌损害程度,及早加用营养心肌药物治疗保护心肌。

轮状病毒感染患者外周血单个核细胞的转录组学分析

轮状病毒(Rotavirus,RV)是引起急性肠胃炎的主要病原体,分析RV感染患者的人外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中差异表达基因(Differentially expressed genes,DEGs)有利于探讨人PBMC在清除RV中的作用。为此,本研究采集2019年2月-2019年6月长春儿童医院中RV感染患者和健康儿童血液,分离PBMC,通过转录组测序(RNA sequencing,RNA-seq)技术比较RV感染患者与健康儿童之间的RNA表达图谱,借助基因本体论(Gene Ontology,GO)数据库功能富集分析、京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)、Reactome通路富集分析DEGs,使用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qPCR)技术进行验证。结果显示,与健康对照组相比,RV感染轻症患者PBMC中有1619个DEGs;重症患者PBMC中有2816个DEGs,主要与干扰素(Interferon,IFN)反应、中性粒细胞、溶酶体、核小体、染色质等相关。qPCR验证轻症患者干扰素刺激基因(IFN-stimulated genes,ISGs)15表达上调,白介素(Interleukin,IL)1β表达下调;重症患者IL15、ISG15表达上调,IL1β表达下调,与转录组结果相一致。本研究提示,RV感染可能激活人I型和II型IFNs反应抵御病毒感染,但也会抑制溶酶体相关基因,对细胞自噬过程产生影响。

轮状病毒VP7糖蛋白基因的克隆及在毕赤酵母菌中的表达及免疫原性的分析

轮状病毒(Rotavirus,RV)是一种双链核糖核酸病毒,属于呼肠孤病毒科,流行病学调查显示,轮状病毒是秋冬季引起婴幼儿感染性腹泻的重要致病因子,全世界每年有大约一亿人感染该病毒。目前,研制安全有效的疫苗是控制轮状病毒感染的重要手段之一。本研究通过基因克隆和重组技术检测20份患儿的粪便标本,提取病毒RNA,再逆转录为cDNA,根据GenBank中发表的VP7全序列设计引物,应用RT-PCR技术,从分离的轮状病毒中扩增出来960bp特异性目的片段,并构建融合表达载体pPICZαA-VP7,转入GS115毕赤酵母中。经1%甲醇诱导,镍柱亲和层析蛋白纯化,获得浓度为0.65mg/mL单一目的蛋白,经SDS-PAGE和Western Blot分析VP7蛋白的表达。结果显示克隆的VP7基因与预计的糖蛋白基因大小一致,构建的重组表达载体在GS115毕赤酵母中表达出分子质量约34kD重组糖蛋白,说明成功克隆和表达了轮状病毒的糖蛋白基因。经小鼠免疫实验结果表明,VP7蛋白加强免疫2周后,肌注组(IM)和滴鼻组(IN)小鼠IgG抗体几何平均滴度分别达到492和676,滴鼻组SIgA平均几何滴度达到43.5,可产生高水平的IFN-γ,表明VP7蛋白免疫可以有效地诱导机体产生细胞免疫,具有进一步开发研究的价值。

猪流行性腹泻病毒、传染性胃肠炎病毒和轮状病毒多重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

为了建立一种能够同时检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、传染性胃肠炎病毒(TGEV)和轮状病毒(RV)的多重实时荧光定量PCR方法,试验根据PEDV CV777株、TGEV Purdue P115株全基因序列和RV OSU毒株的VP6基因序列,设计出3对特异性引物及探针,优化反应条件,开展特异性、敏感性、重复性和验证试验。结果表明:该方法的检测最低限为1×10~2拷贝/μL的RNA标准品或1×10^(-2)TCID_(50)/mL的疫苗毒,具有较高的敏感性;变异系数均小于10%,符合统计学要求;利用本试验所建立的方法以及商品化试剂盒对20份临床样品进行检测,符合率为100%。说明本试验建立的方法特异性好,敏感性高,重复性稳定,可用于PEDV、TGEV和RV的鉴别诊断和防控。

被动免疫轮状病毒NSP4&VP7双抗原重组腺病毒对感染乳鼠的排毒保护作用

为建立小鼠轮状病毒(Rotavirus,RV)感染动物模型,研究可同时表达轮状病毒NSP4(Nonstructural protein4)和VP7(Viral protein 7)的重组腺病毒疫苗免疫孕鼠后对新生乳鼠感染RV的被动保护作用。新生乳鼠口服异源株轮状病毒Wa、ZTR-68或SA11株后(分2次给予,每次含5×10^(4)CCID_(50)的RV),观察乳鼠是否有腹泻症状、肠道病理变化,检测乳鼠粪便排毒百分率;另以重组腺病毒rAd-NSP4-VP7免疫孕鼠后,检测母鼠血清抗体产生情况,并对比乳鼠粪便中RV抗原检出率初步评价疫苗的被动免疫保护作用。发现口服异源株RV的乳鼠未出现类似人类婴幼儿感染后的明显腹泻症状,但在粪便中可检测到RV抗原的存在(Wa、ZTR-68攻毒组均超过80%)。经rAd-NSP4-VP7被动免疫的乳鼠接受Wa和ZTR-68攻毒后其粪便中的RV检出率比未受到被动免疫保护的对照组降低(P<0.05)。rAd-NSP4-VP7重组腺病毒免疫母鼠可显示出对孕鼠感染RV的被动免疫保护作用。

甲氰脒胍治疗婴幼儿病毒性肠炎的疗效观察

目的探讨甲氰脒胍对婴幼儿病毒性肠炎其中主要是轮状病毒治疗作用。方法将收入漯河市第三人民医院儿科的大便轮状病毒检查呈阳性的腹泻患儿120例,随机分为治疗组60例,对照组60例。两组均给予静脉补液、抗病毒、纠正脱水及电解质紊乱、酸碱平衡,微生态制剂等综合治疗。治疗组在此基础上给予甲氰脒胍10～15mg/(kg.次),1次/d,静脉滴注。观察全身症状及大便性状。结果治疗组总有效率93.3%,对照组总效率75%,两组比较有显著差异(P<0.01)。结论甲氰脒胍治疗婴幼儿轮状病毒性肠炎有较好疗效。