婴幼儿轮状病毒G血清型与腹泻病情关系的分析

A组轮状病毒（group A rotavirus，RV）是世界范尉内婴幼儿腹泻的最主要病原。根据RV的VP7和VP4蛋白分为GI血清型和P血清型，而最常见的为G1～G4，

湖北荆州地区A组轮状病毒G血清型分布情况调查

轮状病毒归属呼肠病毒科，系dsRNA病毒，基因组包含11个节段的dsRNA，分别编码6种结构蛋白和5种非结构蛋白。依抗原性不同区分病毒血清型称G型，至今已确定14种G血清型，其中10种可感染人，以G1-G4在人群中占优判。

多重逆转录聚合酶链反应同步检测A组轮状病毒G基因型的研究

目的 为了检测A组轮状病毒VP7的基因型 ,建立一步多重逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)同步检测A组轮状病毒G基因型技术。方法 在参照文献并分析A组轮状病毒VP7基因的基础上 ,选取了一个共用的下游引物RVG9和 6个A组轮状病毒G基因型G1、G2、G3、G4、G8和G9的特异性上游引物 ,利用多重RT PCR技术对标准株和样品进行检测。结果 进行一轮RT PCR ,即可至少同时检出 5种不同标准株混合物中的各个基因型。对纯化的A组轮状病毒标准株RNAO2 6 5进行系列稀释后 ,其检测灵敏度可达 1PFU。经对A组轮状病毒阳性的 6 0份样本进行检测 ,其中G3有 5 1例、G2有 4例 ,G1与G3混合感染 3例 ,另外尚有 2例不能分型。 结论 本研究建立的一步多重RT PCR技术对A组轮状病毒基因型研究将为临床诊断和实验研究提供一种快速、灵敏和特异的检测手段。

人轮状病毒G2和G3型主要中和抗原VP7基因在重组腺病毒中的表达

目的 研究我国G2和G3型轮状病毒主要中和抗原VP7基因在重组腺病毒中的表达。方法 在前期成功表达G1型VP7的基础上 ,选用我国G2和G3型主要流行株 97S4 3和 97S4 8VP7基因 ,用非复制型腺病毒载体对上述基因进行表达。结果 获得了表达我国G2型和G3型人轮状病毒流行株VP7基因的非复制型重组腺病毒rvAdG2VP7和rvAdG3VP7,应用PCR及Southernblot技术证实在重组腺病毒中整合有轮状病毒G2型VP7和G3型VP7基因 ,RT PCR证明重组腺病毒在感染的 2 93细胞内均能有效地转录插入基因 ,Westernblot检测到轮状病毒VP7基因的表达。结论 这一工作为进一步进行动物实验 ,发展多价轮状病毒疫苗打下了基础。

婴幼儿轮状病毒流行的新趋势——G9型轮状病毒全球流行综述

轮状病毒 (HRV)是世界范围内婴幼儿重症腹泻的最主要病因。轮状病毒腹泻至今尚无特效药物 ,发展轮状病毒疫苗成为控制该病主要手段 ,而 HRV疫苗的研究、开发和应用又有赖于 HRV流行病学调查。本文作者分析了世界各地 HRV流行病学调查资料 ,综述了 G9型 HRV在全球流行现状 ,展示了婴幼儿轮状病毒流行的新趋势 ,即 G9型 HRV将要或已经成为全球第五个常见的流行优势株。

羊轮状病毒LLR VP4单克隆抗体的制备与特性研究

目的建立抗羊轮状病毒LLR(G10P〔12])VP4特异的单克隆抗体。方法用纯化羊轮状病毒LLR免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,利用间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞,有限稀释法单克隆化,Western-blot鉴定单克隆抗体识别的抗原。结果获得4株稳定分泌抗VP4单克隆抗体的杂交瘤细胞株1B1、1B8、1F11和1G10,其中1-B1,1-B8,1-G10分泌的抗体为Ig M型,1-F11为IgG1亚类;腹水抗体效价均在1×104以上;单克隆抗体均特异性识别羊轮状病毒LLR VP4。结论1B1、1B8、1F11和1G10分泌的抗体为抗羊轮状病毒LLR VP4特异的单克隆抗体。

南京地区2012～2013年G9型轮状病毒VP7基因特征的分析

A组轮状病毒是引起成人和婴幼儿急性腹泻的主要病原。了解轮状病毒流行株的型别,对主要中和抗原VP7的编码基因进行遗传变异分析,可为当地轮状病毒疫苗的应用和开发提供指导。我们对2012年10月至2013年12月南京地区908例腹泻门诊患者的粪便标本进行轮状病毒检测,采用RT-PCR方法对随机抽取的50份阳性标本进行G分型,并对其中19份G9型轮状病毒的VP7基因序列测序分析。结果发现轮状病毒阳性率11.34%(103/908),其中以G9型为主,占78.0%(39/50),其次是G2、G1和G3型。对G9型轮状病毒VP7基因核苷酸序列进行分析,显示主要分为G9-VI亚型和G9-III亚型,以G9-VI亚型为主,且属于中国和日本G9型轮状病毒亚簇,部分毒株在A、B、C、F四个中和抗原表位中有变异,这可能有助于G9型轮状病毒的流行,值得引起注意。

G1型轮状病毒分子生物学检测及临床应用价值

目的探讨G1型轮状病毒(rotavirus,RV)的分子生物学检测及其在RV感染性腹泻诊治中的应用价值。方法收集90例腹泻患儿第1、3天大便标本各90份,根据RV基因序列,结合文献设计针对RV G1型引物和探针,采用PCR法检测第1天标本中RV核酸,以免疫胶体金法检测第1、3天标本中RV抗体,比较2种方法检测阳性率。将PCR检测阳性病例随机分为2组,观察组立即行抗病毒及对症治疗,对照组在免疫胶体金法RV抗体阳性时再行上述治疗,比较2组住院时间。结果 PCR法共检出RV核酸51例,检测阳性率(56.7%)与第1天免疫胶体金法检测阳性率(6.7%)比较差异有统计学意义(P<0.01),与第3天阳性率(48.9%,)比较差异无统计学意义(P>0.05);观察组住院时间((8.0±2.5)d)低于对照组((15.0±1.5)d)(P<0.05)。结论 PCR技术对RV G1型检测具有较高特异性和敏感性,有助于疾病的早期诊断与治疗。

北京地区2007—2008年G9型A组人轮状病毒VP7和VP4基因分析

目的了解北京地区2007—2008年检测到的G9型A组人轮状病毒外壳蛋白VP7和VP4的基因特征。方法选取经过轮状病毒核酸杂交方法检测为G9型轮状病毒的12份儿童腹泻患儿的粪便标本，应用针对VP7全长基因的特异引物对进行RT-PCR扩增，对所获得的VP7全长基因进行克隆和测序，将所获得的序列与GenBank中的G9型原型病毒株和近期流行株的VP7基因进行序列和种系进化分析；经巢式PCR对G9型的VP4进行P基因分型。结果12株G9型轮状病毒经VP7基因的序列比较分析得到确认。P基因分型结果显示北京地区近年来存在G9P[8]和G9P[6]型两种组合的轮状病毒感染。序列和种系进化分析发现北京G9型株VP7基因与世界范围内近期流行的G9型株一样都属于进化分支Ⅲ，彼此间的核苷酸和氨基酸同源性较高，而与国内最早报道的G9型T203进化关系较远，且北京G9P[8]和G9P[6]型株分别与国内近期报道的新疆G9P[8]和G9P[6]型株及相应的武汉G9型株VP7基因，在氨基酸位点上存在一些共同的氨基酸残基取代。结论北京地区近年存在G9P[8]和G9P[6]两种不同基因组合的G9型轮状病毒感染，需要进一步加强对G9型轮状病毒的分子流行病学监测。

青海高原地区婴幼儿腹泻病例中检出G9型A组轮状病毒

目的:对2010年西宁地区秋冬季婴幼儿病毒性腹泻病例进行监测,分析青海省A组轮状病毒主要流行株。方法:采集婴幼儿腹泻病例粪便标本,实验室采用巢氏PCR方法对标本进行A组HRV检测。结果:25例A组轮状病毒感染病例中G3型14例,G9型11例,分别占阳性病例的56%和44%。结论:2010年西宁地区婴幼儿腹泻病例中检出G9型A组轮状病毒,近年来各地报道较多的G9型A组轮状病毒将要或已经成为青海省重要的流行株。