轮状病毒LLR株在两种不同细胞中病毒滴度的比较

目的:通过轮状病毒LLR株在牛肾细胞和Vero细胞中培养效果的比较,为轮状疫苗的生产筛选最佳的细胞基质和培养条件。方法:将轮状病毒LLR株按MOI 0.02分别接种牛肾细胞和Vero细胞,在相同培养条件下进行培养,每天观察两种细胞病变的情况,同时抽样检测病毒滴度,分析两种细胞对轮状病毒LLR株的敏感性。结果:牛肾细胞在感染轮状病毒LLR株后d 3病毒滴度达到最高,为6.8 lgCCID50.mL-1;而Vero细胞在感染轮状病毒LLR株后d 8病毒滴度达到最高,为7.3 lgCCID50.mL-1。轮状病毒LLR株在牛肾细胞和Vero细胞上均能达到满意的病毒表达量。结论:轮状病毒LLR株在Vero细胞中培养能够达到理想的病毒表达量,利用Vero细胞培养轮状病毒LLR株,有利于提高疫苗的产量和质量。

轮状病毒的LLR疫苗株全基因组克隆及结构蛋白VP6基因遗传特征

目的 了解轮状病毒（RV）的LLR疫苗株全基因组基因和蛋白特征、完善关键基因遗传稳定性研究,为疫苗的质量控制和研发提供依据.方法 将LLR株毒种第38代在原代牛肾细胞上连续传至49代,提取第38、43、44、49代病毒RNA.通过RT-PCR方法扩增LLR株（38代）全基因组11个dsRNA片段和传代病毒VP6基因,分别将其克隆到pGEM-T载体中,进行序列测定与分析.结果 LLR株全基因组11条RNA,由18 498个核苷酸组成,共编码5 796个氨基酸;全基因组研究表明,所克隆的LLR株属于G10P[15]/NSP4[A]/SG Ⅰ基因型.LLR株VP6基因全长1 356 bp,含编码397个氨基酸的单一的开放读码框架（ORF）.各代次病毒的VP6基因核苷酸与推导的氨基酸变化完全一致,与GenBank中LLR参考株（L11595）同源性分别为99.9％和99.7％.与16株SG Ⅰ亚群RV代表株之间,核苷酸与推导的氨基酸序列同源性分别为84.0％ ～ 99.7％和97.0％ ～ 99.2％;与不同亚群RV代表株之间,VP6基因核苷酸与推导的氨基酸同源性分别为77.7％ ～ 82.2％和92.2％ ～93.5％;LLR株各代病毒VP6基因核苷酸、氨基酸序列高度保守,各关键功能区未发生变异.结论 LLR疫苗株关键基因遗传特性稳定,为在分子水平保证LLR株毒种及其生产疫苗的安全性提供了依据;其全基因组克隆,为进一步研究RV生物学、免疫学和确定该病毒的分类学地位提供了科学依据.

轮状病毒LLR株培养条件的优化

目的为提高轮状病毒滴度,对病毒培养过程中的关键因素如感染复数(multiplicityofinfection,MOI)、胰蛋白酶浓度及维持液pH进行优化,为口服轮状病毒活疫苗生产提供数据依据。方法将轮状病毒LLR株分别以MOI0.005、0.01、0.02、0.04和0.08接种牛肾细胞后收获病毒;以MOI0.02接种牛肾细胞,分别加入含1、2、3、4、5和7μg/mL胰蛋白酶的MEM培养液后收获病毒;以MOI0.02接种牛肾细胞,分别加入pH为6.0、6.5、7.0、7.5、8.0及8.5的MEM培养液后收获病毒。分别在24、48、72及96h取样,检测病毒滴度。结果以MOI0.02接种牛肾细胞后滴度最高,为7.5lgCCID_(50)/mL;当维持液中胰蛋白酶质量浓度为4μg/mL时滴度最高,为7.2lgCCID_(50)/mL;当pH为6.5及7.0时滴度最高,均为7.5lgCCID_(50)/mL。结论通过对牛肾细胞培养轮状病毒关键条件的优化,获得了提高病毒滴度的有效方法,为口服轮状病毒活疫苗生产过程控制提供数据依据。