A组轮状病毒SA11VP6基因的克隆和表达

从ＳＡ１１ＶＰ６基因全序列克隆开始，设计一对两端带有酶切位点的引物，逆转录ＰＣＲ扩增出ＶＰ６全基因ｃＤＮＡ。经酶切后插入ｐＵＣ１９，构建了ＶＰ６全基因克隆ｐＲＡ６。再经酶切后插入痘苗病毒载体质粒ｐＪＳＡ１１７５中。利用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ寻人ＴＬ－１４３细胞，利用ＴＫ基因和Ｌａｃ基因作为重组病毒的筛选标记。表达产物用单克隆抗体ＥＬＩＳＡ法检测，发现细胞培养上清和细胞裂解液都是阳性。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ显示，表达产物分子量大小与天然ＶＰ６一致。