培养基中细胞生长因子增强人间充质干细胞成瘤性风险

目的本中心在人间充质干细胞(hMSCs)第三方复核检验中发现某些无血清培养基会促使hMSCs在软琼脂克隆试验中呈现阳性结果。为进一步明确该现象,探索促使hMSCs软琼脂克隆阳性的培养基成分并深入分析其风险。方法比较几种不同品牌的商品化无血清培养基对hMSCs软琼脂克隆形成的影响,通过细胞因子抗体芯片和ELISA定量检测筛选并初步确定促使软琼脂克隆形成的培养基成分,通过在培养基中添加特定成分进一步明确该成分对hMSCs成瘤性的影响,并通过长期添加试验和细胞转录组测序分析该培养基成分持续作用对hMSCs生长和基因转录方面的影响。结果研究结果显示,部分品牌无血清培养基可促使hMSCs在软琼脂克隆形成试验中呈现阳性。培养基成分分析显示这些培养基中表皮细胞生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和血小板源性生长因子(PDGF-BB)呈现出较高水平。在含10%FBS的完全培养基中分别或组合添加EGF(50 ng/ml)、bFGF(50 ng/ml)和PDGF-BB(10 ng/ml),均可促使hMSCs软琼脂克隆形成。以上述浓度添加生长因子持续培养hMSCs 10代后,再撤掉生长因子继续培养3代,细胞增殖和基因转录发生显著改变。结论培养基中含有的高浓度EGF、bFGF和PDGD-BB等生长因子成分能够增强hMSCs成瘤性风险,用这些生长因子长期培养hMSCs可对细胞增殖和基因转录造成显著影响。本研究提示在hMSCs类细胞治疗产品工艺研发中,需高度关注培养基关键成分对hMSCs特性的影响,结合成瘤性分析优化并筛选最适培养基。