大鼠胚胎睾丸组织体外培养方法的建立

目的:建立大鼠胚胎睾丸组织体外培养方法。方法:取SPF级性成熟(体重200～250 g) SD雄性大鼠3只、雌性6只,根据阴道涂片判断雌鼠所属的发情时期,在其发情期及发情前期按照1∶2合笼,发现精子则记为怀孕0. 5 d(0. 5 dpc)。解剖显微镜下分离出15. 5 dpc胚胎睾丸,一式2份,1份直接进行HE染色,另1份置于软琼脂糖培养系统,37℃、5%CO_2进行培养,分为对照组和hC G组。培养当天为d0,倒置显微镜记录培养睾丸生长情况,每天更换并收集d1、d2、d3、d4培养液及d4的睾丸组织。检测培养液睾酮浓度,培养结束后睾丸固定脱水包埋进行组织学研究。结果:应用阴道涂片方法可高效获得15. 5 dpc大鼠,HE染色提示能准确分离出15. 5 dpc胚胎睾丸。倒置显微镜下可见培养睾丸发育良好,体积逐渐增大,生精小管逐渐增粗、迂曲、清晰。培养液中可检测到睾酮,且睾酮浓度逐渐增高,d3时达到峰值; hC G可刺激睾酮分泌。HE染色可见培养后睾丸组织结构完整,无中央坏死现象发生,组织内有典型的生精小管,可见生殖母细胞、支持细胞及间质细胞;透射电镜下可见生精小管管腔中的生殖母细胞、支持细胞以及管腔外的间质细胞,细胞内的线粒体、内质网等细胞器,未见明显肿胀。结论:大鼠胚胎睾丸组织可在软琼脂糖培养系统中生长良好、保持活性,并向培养液中分泌睾酮。