软肝冲剂对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化及肠道菌群的影响

目的 基于肠道菌群探究软肝冲剂抗四氯化碳(CCl4)所致大鼠肝纤维化的作用机制。方法 采用40%CCl_(4)(2 mL·kg^(-1))灌胃的方法建立大鼠肝纤维化模型,软肝冲剂干预后采用Masson染色评价抗纤维化的作用;采用16S rDNA检测技术对各组大鼠肠内容物的菌群进行检测,采用QIIME2 2019.4生物数据分析系统对样本肠道菌群Alpha多样性、Beta多样性、物种构成及相关通路进行分析。结果 Masson染色结果显示,与模型组比较,软肝冲剂各组胶原沉积明显减少,纤维间隔减少,纤维增生带变浅;Illumina Miseq测序结果显示,软肝冲剂干预后能显著提高大鼠肠道菌群的丰富度和多样性,与模型组比较具有显著性(P<0.05),与空白组比较无显著性差异。代谢通路分析显示,软肝冲剂干预后氨基酸生物合成、脂肪酸和脂质生物合成等多条代谢途径发生变化。结论 软肝冲剂对CCl_(4)所致大鼠肝纤维化具有很好的防治作用,其作用机制可能与通过调节肠道菌群的丰度进而调节氨基酸和脂质等代谢而发挥抗肝纤维化的作用。

基于非靶向代谢组学软肝冲剂抗肝纤维化作用机制研究

目的基于非靶向代谢组学探究软肝冲剂对CCl4所致大鼠肝纤维化的作用及其可能的作用机制。方法采用40%CCl4(2 mL·kg^(-1))诱导大鼠肝纤维化模型,每周2次,共计8周。造模第6周开始给与软肝冲剂,干预8周后采用HPLC-QTOF-MS联用技术检测软肝冲剂干预后各组大鼠血浆中代谢物的变化,利用Ropls软件进行偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)、差异代谢物筛选及代谢通路分析。结果代谢组学分析显示,与模型组比较,软肝冲剂干预后共有137种代谢物发生变化,其中上调的有23种,下调的有114种,如异亮氨酸、鸟氨酸、酪氨酸、脱氧胆酸等。主要与氨基酸代谢、酪氨酸代谢、初级胆汁酸代谢等途径有关。结论软肝冲剂对CCl_(4)所致大鼠肝纤维化的治疗作用可能与调节氨基酸代谢、胆汁酸合成等代谢途径有关。

软肝冲剂对CCl_4肝纤维化大鼠TGFβ_1mRNA表达的影响

目的 :研究软肝冲剂对CCl4肝纤维化大鼠转化生长因子 β1(TGFβ1)mRNA表达的影响 ,从分子水平探讨软肝冲剂促进肝细胞再生、阻止肝纤维化、肝硬化形成的作用机制。方法 :采用Northern blot方法检测CCl4肝纤维化大鼠TGFβ1mRNA表达。结果 :Northern blot杂交显示 ,实验第 45、90天 ,模型组、中药各组和西药秋水仙碱组大鼠肝脏TGFβ1mRNA表达均较正常组增强 (P <0 0 1)。但中药各组和西药秋水仙碱组TGFβ1mRNA表达水平均低于模型组(P <0 0 1)。其中中药高剂量组TGFβ1mRNA表达水平均低于中药低剂量组和西药秋水仙碱组 (P <0 0 1)。结论 :软肝冲剂能调节CCl4肝纤维化大鼠TGFβ1mRNA表达 ,促进肝细胞再生 ,抑制肝纤维化、肝硬化的形成。

肝纤维化模型中小鼠肝脏的病理变化及软肝冲剂的治疗作用

目的观察肝纤维化模型中小鼠肝脏的病理改变以及软肝冲剂对小鼠肝纤维化模型的治疗作用。方法将60只雄性SPF级C57B/L小鼠随机分为空白对照组、模型组、护肝片对照组、软肝冲剂低剂量组和软肝冲剂高剂量组,每组12只。空白对照组给予100%花生油1 mL/kg腹腔注射,每周2次,共10周;模型组给予含20% CCl_4的花生油1 mL/kg腹腔注射,每周2次,共10周;护肝片对照组给予含20% CCl_4的花生油1 mL/kg腹腔注射,每周2次,共10周,并从第3周起给予护肝片0.1 mg/(kg·d)灌胃至第10周;软肝冲剂低剂量组给予含20% CCl_4的花生油1 mL/kg腹腔注射,每周2次,共10周,并从第3周起给予软肝冲剂1 g/(kg·d)灌胃至第10周;软肝冲剂高剂量组给药剂量为5 g/(kg·d),造模及给药方法与低剂量组相同。在第10周通过摘除眼球取血,检测小鼠血清中的透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、三型前胶原(PCⅢ)、四型胶原(Ⅳ-C)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST);检测肝脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量;计算肝脏指数;观察小鼠肝脏的HE染色和MASSON染色病理组织学改变。结果模型组与空白对照组比较,小鼠血清中HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C、ALT和AST水平显著升高(P<0.05),肝脏组织中SOD显著降低(P<0.05),MDA显著升高(P<0.05),肝脏指数增加(P<0.05),病理切片显示肝细胞坏死并出现脂肪空泡、纤维组织增生和炎细胞浸润,MASSON染色显示肝组织内出现明显脂肪空泡和纤维组织增生;软肝冲剂组与模型组比较,小鼠血清中HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C、ALT和AST的水平显著降低(P<0.05),肝脏组织中SOD显著升高(P<0.05),MDA水平显著降低(P<0.05),肝脏指数降低(P<0.05),病理检查显示肝脏组织中无炎性浸润、脂肪空泡和纤维组织沉积,MASSON染色显示肝组织内出现明显脂肪空泡和纤维组织增生。结论 CCl_4腹腔注射可以形成小鼠肝硬化模型,病理改变以脂肪空泡出现和纤维化为主;软肝冲剂可以改善肝脏功能。

抗纤软肝冲剂对肝星状细胞自分泌转化生长因子β_1的影响

目的：从细胞分子水平研究抗纤软肝冲剂对肝星状细胞(HSC)表达转化生长因子β1(TGF-β1)的影响。方法：抗纤软肝冲剂药物血清温育传一代HSC,以生理盐水和秋水仙碱为对照。免疫细胞化学分析TGF-β1 的蛋白合成；半定量RT-PCR 法检测TGF-β1 的mRNA 表达量。结果：抗纤软肝冲剂能明显抑制HSC 的自分泌TGF-β1及其mRNA 表达(P<0.01)。结论：抗纤软肝冲剂能抑制HSC 的TGF-β1 的基因和蛋白表达,阻断其自分泌放大活化效应,这可能是该方抗肝纤维化的细胞分子学机制之一。

软肝冲剂对肝炎肝硬化门脉高压患者血清一氧化氮、内皮素的影响

目的:观察软肝冲剂对肝炎肝硬化门脉高压患者门静脉主干内径及血流量、血流速度和血清一氧化氮(NO)、内皮素(ET)的影响。方法:选择肝炎肝硬化门脉高压患者97例,随机分为两组,治疗组口服软肝冲剂,对照组以西药常规治疗,观察治疗后的总有效率、肝功能、门静脉主干内径及血流量、血流速度和血清NO、ET的变化。结果:经治疗后治疗组总有效率优于对照组(P<0.05),患者ALT、TBil明显降低,Alb和A/G均明显升高,门静脉内径变窄、血流量增多、血流速度变快,同时NO及ET亦显著降低,与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05或0.01)。结论:软肝冲剂治疗肝炎肝硬化门脉高压疗效显著,能明显改善肝功能,降低门静脉压力,其作用机制之一是降低血清NO、ET水平。

软肝冲剂治疗肝纤维化的临床研究

应用软肝冲剂治疗肝纤维化患者６０例，治疗后血清透明质酸酶（ＨＡ）、Ⅳ型胶原肽（Ｃ Ⅳ）、板层素（ＬＮ）、谷丙转氨酶（ＡＬＴ）、和γ球蛋白（γ－Ｇ） 明显下降，与干扰素对照组（６０例）比较，差异有显著或非常显著性意义。提示该方具有显著抗肝纤维化作用。

软肝冲剂对肝硬化大鼠p^(21)及细胞周期调控的影响

目的:研究软肝冲剂对CCl_4肝硬化大鼠p^(21)mRNA表达及细胞周期各时相DNA含量的影响,从mRNA、DNA水平探讨软肝冲剂阻止肝硬化的作用机理。方法:采用RT-PCR及流式细胞计数仪分别检测CCl_4肝硬化大鼠P^(21)mRNA表达、DNA含量。结果:软肝冲剂能降低CCl_4肝硬化大鼠p^(21)mRNA表达,与模型组比较差异有显著性意义(P<0.01),大剂量组的疗效与小剂量组比较无明显差异(P>0.05)。正常肝组织p^(21)mRNA呈相当低水平表达,其表达相对值为(0.17±0.06)U。定量DNA图像分析发现模型组中处于G1期的细胞数要明显多于其他各组(P<0.01),软肝冲剂大剂量组中处于G1期的细胞数要明显少于软肝冲剂小剂量组(P<0.01)。结论:软肝冲剂能调节p^(21)基因表达,调节细胞周期,促进肝细胞再生,抑制肝纤维化、肝硬化的形成。

抗纤软肝冲剂对肝星状细胞胶原降解相关基因表达的影响

目的从细胞分子水平研究抗纤软肝冲剂对肝星状细胞(HSC)胶原降解的影响。方法抗纤软肝冲剂药物血清温育传一代HSC,以生理盐水和秋水仙碱为对照。ELISA法测定细胞上清Ⅰ型胶原,并测定细胞层总蛋白以校正胶原含量;半定量RT-PCR法检测间质胶原酶(MMP1)和金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的mRNA表达。结果抗纤软肝冲剂组细胞上清中的Ⅰ型胶原含量明显低于其他两组(P<0.05或P<0.01);明显促进细胞MMP1的mRNA表达(P<0.05或P<0.01),显著抑制细胞TIMP-1的mRNA表达(P<0.05或P<0.01)。结论抗纤软肝冲剂能促进MMP1基因表达,抑制TIMP-1基因表达,从而促进胶原降解,这可能是该方抗肝纤维化的细胞分子学机制之一。

软肝冲剂抑制血管紧张素Ⅱ诱导的肝星状细胞上调基因的表达

目的:旨在研究软肝冲剂是否通过抑制血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的肝星状细胞(HSCs)上调基因起作用。方法:用DNA微点阵分析用AngⅡ(10-8M)以及AngⅡ和软肝冲剂(2.5mg/L)处理的HSCs与对照组之间基因的差异性表达,其结果用实时定量RT-PCR证实。用Westernblot分析软肝冲剂对HSCs在AngⅡ诱导下的胶原蛋白的表达,ELISA分析有生物活性的TGF-β1的含量。结果:软肝冲剂能抑制AngⅡ诱导HSCs上调基因的表达,特别是一些细胞外基质和细胞因子如IL-13,IL-15,MCP-2,TGF-1,TGF-2,细胞因子受体基因,如TGF-1受体。分泌到细胞培养基中的胶原蛋白和有生物活性的TGF-β1也被抑制。结论:软肝冲剂抑制AngⅡ诱导HSCs上调的基因的表达,这可能是软肝冲剂治疗肝纤维化和肝硬化的机制之一。

抗纤软肝冲剂抗大鼠肝纤维化的实验研究

采用四氯化碳（ＣＣｌ４）高脂低蛋白等复合因素诱导的大鼠肝纤维化模型，以秋水仙碱作对照，观察抗纤软肝冲剂对肝功能、免疫学、肝纤维化相关指标、肝组织羟脯氨酸（Ｈｙｐ）及肝组织病理学的影响。结果：抗纤软肝冲剂和秋水仙碱有良好的抗肝纤维化效果，其中抗纤软肝冲剂有显著改善肝功能、调节免疫功能、降低免疫复合物（ＩＣ）、降低肝纤维化相关指标和Ｈｙｐ 含量的作用。

软肝冲剂对肝纤维化大鼠组织金属蛋白酶抑制剂的影响

目的:探讨软肝冲剂治疗肝纤维化和肝硬化的机制是否与抑制TIMP-1的表达有关。方法:用CCl4诱导大鼠的肝纤维化模型(病理分期为0～Ⅴ期),将大鼠随机分成两组,分别用软肝冲剂和生理盐水治疗2个月后,对肝组织TIMP-1mRNA的表达进行分析,并检测羟脯氨酸(Hyp)的量,同时检测血清中TIMP-1和TGF-β1的浓度。结果:软肝冲剂能够降低大鼠肝组织中TIMP-1mRNA的表达和胶原蛋白的含量,同时血清中TIMP-1和TGF-β1较CCl4诱导的模型组和生理盐水治疗组显著降低(P<0·05)。结论:软肝冲剂治疗肝纤维化可能通过阻止TIMP-1的表达起作用。

软肝冲剂对免疫性肝纤维化大鼠血清TGFβ_1和Ⅰ、Ⅲ型胶原水平的影响

目的 :研究软肝冲剂对免疫性肝纤维化大鼠转化生长因子 β1(TGFβ1)和Ⅰ、Ⅲ型胶原水平的影响 ,以探讨软肝冲剂促进肝细胞再生及阻止肝纤维化、肝硬化形成的作用机制。方法 :复制免疫性肝纤维化动物模型 ,采用Rennard方法检测大鼠血清TGFβ1和Ⅰ、Ⅲ型胶原水平及肝脏组织羟脯氨酸含量。结果 :模型组大鼠血清TGFβ1和Ⅰ、Ⅲ型胶原水平及肝脏组织羟脯氨酸含量明显增加 ,与正常对照组比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 1 ) ;中药软肝冲剂和西药秋水仙碱能明显降低免疫性肝纤维化大鼠血清TGFβ1和Ⅰ、Ⅲ型胶原水平及肝脏组织羟脯氨酸含量 ,与模型组比较 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 5或P <0 .0 1 ) ,且中药高剂量组优于中药低剂量组和西药秋水仙碱组(P <0 .0 5或P <0 .0 1 ) ;中药低剂量组与西药秋水仙碱组比较 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 :软肝冲剂能明显降低免疫性肝纤维化大鼠血清TGFβ1和Ⅰ、Ⅲ型胶原水平 ,以促进肝细胞再生 ,抑制肝纤维化。

抗纤软肝冲剂药物血清对肝星状细胞增殖的影响

目的:从细胞学水平探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机制.方法:采用酶消化法、密度梯度离心法,分离正常大鼠肝星状细胞(HSC),培养、鉴定及传代.制备抗纤软肝冲剂药物血清,温育传一代HSC,并设生理盐水组和秋水仙碱组为对照.3H-proline掺入法测定细胞活力;3H-TdR掺入法和MTT比色法测定细胞增殖.结果:抗纤软肝冲剂组药物血清对细胞形态无影响,还能明显提高细胞的3H-proline掺入(P＜0.01),明显抑制细胞的3H-TdR掺入量和MTT转化(P＜0.01),且对MTT的抑制作用呈浓度依赖性递增趋势.结论:抗纤软肝冲剂能提高细胞活力,无细胞毒性作用;能抑制HSC的增殖,这可能是该方抗肝纤维化的细胞学机制之.

抗纤软肝冲剂的制备及质量研究

目的:介绍抗纤软肝冲剂的制备方法并对其进行定性定量研究。方法:用水提醇沉法制备抗纤软肝冲剂;对方中山楂进行薄层定性鉴别;对方中主药丹参所含主要有效成份原儿荼醛的含量进行了双波长薄层扫描测定。检测波长为λ_s=280nm,参比波长为λ_R=400nm;采用硅胶G薄层板,展开剂为氯仿-丙酮-甲酸(8:1:1)。结果:山植薄层鉴别结果显示供试品色谱与对照品及对照药材色谱在相应的位置上,显示相同颜色斑点;双波长薄层扫描测定结果显示原儿茶醛在0.509～5.599μg/μl浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数r=0.9995,其平均加样回收率为96.74%,RSD为3.2%。结论:抗纤软肝冲剂制剂稳定,检测方法可靠,结果准确。丹参中原儿茶醛含量应控制在大于0.090mg/10g的范围。该冲剂可作为治疗肝硬变患者的常用药物。

软肝冲剂治疗肝纤维化的实验研究

建立肝纤维化的病理模型,观察软肝冲剂抗肝纤维化的作用,通过治疗实验结果显示:治疗组肝内胶原蛋白含量显著低于造型组,电镜下肝细胞损伤程度明显减轻,表明软肝冲剂具有治疗肝纤维化的作用。

软肝冲剂在大白鼠实验性肝纤维化中对NAG的影响及防治作用

软肝冲剂在大白鼠实验性肝纤维化中对ＮＡＧ的影响及防治作用湖北中医学院附属医院（４３００６１）李天望，肖琳，李延福，万永红关键词：益气活血法；软肝冲剂；ＮＡＧ；实验研究ＮＡＧ（Ｎ－乙酰－β－Ｄ－氨基葡萄糖苷酶）是溶酶体中的一种蛋白水解酶，参与结缔组织基...

软肝冲剂对四氯化碳所致小鼠肝纤维化模型的影响

目的观察软肝冲剂对四氯化碳性肝纤维化小鼠模型的治疗作用。方法取50只雄性SPF级C57B/L小鼠,随机分为空白对照组、模型组和软肝冲剂治疗组。给予空白对照组100%花生油1 m L/kg腹腔注射,每周2次,共10周;模型组给予含20%四氯化碳的花生油1 m L/kg腹腔注射,2次/周,共10周;软肝冲剂3个治疗组第3周起给予软肝冲剂高、中、低7.5、5.0、3.5 g/(kg·d)剂量灌胃至第10周。在实验结束后,检测小鼠血清中的透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、三型前胶原(PCⅢ)、四型胶原(Ⅳ-C)、丙氨酸转氨酶(ALT)和天门冬氨酸转氨酶(AST)的含量;计算肝脏指数;使用Masson和HE染色观察肝脏的病理组织学改变。结果软肝冲剂组血清中的HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C、ALT和AST的含量均低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);中剂量组和高剂量组肝脏指数与模型组相比具有统计学意义(P<0.05);病理学检查发现软肝冲剂中、高剂量组小鼠肝脏的炎性浸润和脂肪空泡消失,Masson染色显示在汇管区无纤维素沉积。结论软肝冲剂可以降低四氯化碳所致小鼠肝纤维化模型中血清HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C、ALT和AST的水平,对肝脏具有保护作用。

软肝冲剂对肝细胞影响及星状细胞活化机制的干预作用

目的:观察软肝冲剂抗肝纤维化的作用及机理。方法:体外培养四氯化碳(CCL4)肝纤维化大鼠肝细胞(HC)、星状细胞(HSC),观察软肝冲剂含药血清对其影响。结果:软肝冲剂有保护肝细胞、减轻CC l4对肝细胞损伤,抑制HSC活化,促肝细胞再生的作用。结论:软肝冲剂具有抗脂质过氧化和抑制HSC活化的作用,从而抑制肝纤维化的形成。