参桃软肝方抑制人肝癌细胞HepG2活性的作用机制研究

目的探讨参桃软肝方抗肝癌的作用及机制。方法四甲基噻唑蓝(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测参桃软肝方对人肝癌细胞HepG2活性及胞内磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B/丝裂原活化蛋白激酶(Phosphatidylinositol-3-kinase/Protein Kinase B/mitogen-activated protein kinase,PI3K/Akt/MAPK)抑制剂:LY294002、Atk抑制剂(Akt inhibitor,Akti)、分裂原活化抑制剂(MEK inhibitor,MEKi)、c-Jun氨基末端蛋白激酶抑制剂(c-Jun N-terminal protein kainse inhibitor,JNKi)、凋亡抑制剂(Z-VAD)、自噬抑制剂(Wortmanin)、铁死亡抑制剂(Ferrostatin-1)、细胞坏死抑制剂(Necrostatin-1)对参桃软肝方抑制人肝癌细胞HepG2活性的影响;乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)法检测参桃软肝方对人肝癌细胞HepG2的毒性作用;实时荧光定量(Real-time PCR)检测参桃软肝方对人肝癌细胞HepG2焦亡标志物白介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)的影响;蛋白质印迹法(Western blot)检测参桃软肝方对人肝癌细胞HepG2中Akt/ERK信号通路关键蛋白Akt、ERK、P-ERK蛋白表达的影响,凋亡信号通路关键蛋白半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(Caspase 3)、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl2)、Bcl2-Associated X的蛋白质(Bax),细胞焦亡标志物卵裂半胱天冬酶1(Cleavaged Caspase-1)蛋白表达的影响。结果参桃软肝方及醇提上清和沉淀都能有效抑制人肝癌细胞HepG2的活性(P<0.05),LY294002、Wortmanin、Akti、MEKi、JNKi、Z-VAD、Ferrostatin-1、Necrostatin-1对参桃软肝方、醇提上清和沉淀抑制人肝癌细胞HepG2活性没有显著的影响;参桃软肝方促进人肝癌细胞HepG2中LDH的释放,引起细胞毒性;参桃软肝方抑制人肝癌细胞HepG2焦亡标志物IL-1β和Cleavaged Caspase-1的表达;参桃软肝方降低人肝癌细胞HepG2中Akt的蛋白表达,升高Caspase3蛋白表达量。结论参桃软肝方具有抑制肝癌细胞活性、抗肝癌的作用,其作用机制可能与自噬、坏死性凋亡等程序性死亡方式及PI3K/Akt/MAPK信号传导无关;能抑制Akt的表达和促进Caspase3表达有关。同时,能降低焦亡标志物IL-1β和Cleavaged Caspase-1表达,很可能通过阻断细胞焦亡过程起作用。参桃软肝方抗肝癌活性优于总提物醇提上清和沉淀,醇提上清和沉淀很可能存在协同抗肝癌的作用。

通络软肝方对肝纤维化大鼠TGF-β1/Smad信号通路和氧化应激的影响

目的:探究通络软肝方对肝纤维化大鼠TGF-β1/Smad信号通路和氧化应激的影响。方法:54只雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、阳性药组、通络软肝方低剂量组、通络软肝方中剂量组、通络软肝方高剂量组。除对照组外,其余组大鼠腹腔注射50%CCl4橄榄油溶液,每周2次,连续8周,建立肝纤维化大鼠模型。各给药组大鼠灌胃给予相应药物,对照组和模型组大鼠灌胃给予生理盐水,1次/d,连续6周。检测大鼠血清ALT、AST水平;HE和Masson染色后镜下观察大鼠肝组织病理学变化;Western blotting法检测大鼠肝组织中α-SMA、TGF-β1、Smad3、Smad7蛋白相对表达量;ELISA法检测肝组织SOD、MDA的水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠肝组织内可见大量肝细胞变性坏死,炎症细胞浸润和纤维结缔组织增生,胶原面积分数明显升高(P<0.01),血清ALT、AST水平明显升高(P<0.01),肝组织α-SMA、TGF-β1、Smad3蛋白相对表达量及MDA水平均明显升高(P<0.01),Smad7蛋白相对表达量及SOD水平均明显降低(P<0.01);与模型组比较,通络软肝方低、中、高剂量组大鼠肝组织炎症、纤维结缔组织增生明显减轻,肝组织胶原面积分数明显降低(P<0.01),血清中ALT、AST水平均明显降低(P<0.05或P<0.01),肝组织α-SMA、TGF-β1、Smad3蛋白相对表达量及MDA水平均明显降低(P<0.05或P<0.01),Smad7蛋白相对表达量及SOD水平均明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:通络软肝方可以抑制肝纤维化大鼠TGF-β1/Smad信号通路和氧化应激,降低肝组织胶原纤维沉积,保护肝脏功能,发挥抗肝纤维化的作用。

四逆软肝方干预肝郁脾虚型肝硬化的临床研究

目的:探讨四逆软肝方治疗肝郁脾虚型肝硬化的临床疗效及安全性。方法:选择2018年9月至2019年12月期间湖南中医药大学第一附属医院收治的29例肝郁脾虚型肝硬化患者,根据随机信封抽签原则分为观察组(14例)与对照组(15例)。对照组患者给予常规病因治疗加扶正化瘀片,观察组患者给予常规病因治疗加四逆软肝方,观察比较两组患者疗效。结果:观察组患者治疗总有效率为100.00%,高于对照组的86.67%,差异具有统计学意义(P <0.01)。治疗后1个月、2个月、3个月两组患者的中医病症主症积分均较治疗前降低,差异具有统计学意义(P <0.01)。治疗前、治疗后1个月、2个月两组患者的同期中医病症主症积分比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。治疗3个月观察组患者的中医病症主症积分低于对照组,差异具有统计学意义(P <0.01)。治疗后两组患者的谷丙转氨酶(ALT)水平均有不同程度下降,差异具有统计学意义(P <0.01)。治疗后两组患者的谷草转氨酶(AST)比较有所降低,但差异无统计学意义(P> 0.05)。治疗后两组患者的ALT、AST分别比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。治疗后观察组患者的IV型胶原(IV–C)、透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原肽(PⅢP)水平均较治疗前下降,差异具有统计学意义(P <0.05),治疗后对照组患者的IV–C、HA、PⅢP水平均较治疗前有所下降,但差异无统计学意义(P> 0.05)。治疗后两组患者的层粘连蛋白(LN)与治疗前比较,差异均无统计学意义(P> 0.05)。治疗前、治疗后两组患者的同期IV–C、HA、PⅢP、LN水平分别比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。治疗后两组患者的肝脏瞬间弹性均有不同程度下降,差异具有统计学意义(P <0.01),治疗后两组患者的肝脏瞬间弹性结果比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。结论:四逆软肝方治疗肝郁脾虚型肝硬化效果显著,能够有效改善患者症状体征、肝功能转氨酶以及肝纤维化水平,从而抑制肝硬化发展。且不良反应少。

复方鳖甲软肝方对肺纤维化大鼠细胞外基质的影响

目的 :研究复方鳖甲软肝方对博莱霉素诱导大鼠肺纤维化细胞外基质的影响。方法 :SD雄性大鼠 54只 ,分为假手术对照组、模型对照组、复方鳖甲软肝方高剂量组、中、低剂量组、强的松组 ,每组 9只。除假手术对照组外其余各组大鼠气管内一次性滴注盐酸博莱霉素 ,假手术对照组大鼠气管内一次性滴注等体积的生理盐水。 2 8d后给药 ,复方鳖甲软肝方高、中、低剂量组 ,强的松组分别灌服复方鳖甲软肝方 1.4,0 .7,0 .3 5g·kg- 1及强的松 0 .56mg·kg- 1,假手术对照组、模型对照组分别灌服等体积的生理盐水。观察 80d时大鼠肺组织羟脯氨酸和血清中Ⅲ (Ⅲ C) ,Ⅳ (Ⅳ C)胶原及层粘连蛋白 (LN)和透明质酸 (HA)的含量 ,同时取肺组织行HE ,Masson染色。结果 :复方鳖甲软肝方可降低肺纤维化大鼠Ⅰ ,Ⅲ胶原 ,层粘连蛋白及透明质酸含量 ,减轻肺组织纤维性增生。结论

复方鳖甲软肝方防治肺纤维化大鼠自由基损伤作用的实验研究

目的研究复方鳖甲软肝方防治肺纤维化大鼠自由基损伤的作用和机制。方法SD雄性大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、强的松(0.56 m g/kg)组、复方鳖甲软肝方高、中、低剂量(1.4、0.7、0.35 g/kg)组,每组10只。除正常组、假手术组外,其余各组大鼠气管滴注盐酸博莱霉素制备大鼠肺纤维化模型。造模后第2天,各组分别ig给药,连续给药4周。测定各组大鼠肺组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(G SH-Px)、诱导型一氧化氮合酶(iNO S)活性和丙二醛(M DA)水平;采用W estern b lotting实验研究肺组织蛋白中核因子κB(NF-κB)和核因子κB抑制剂(IκBα)的表达。结果复方鳖甲软肝方能提高肺纤维化大鼠体内的G SP-Px和SOD活性,降低M DA水平和iNO S活性,减弱肺纤维化大鼠肺组织核蛋白中NF-κB表达,增强胞浆蛋白中IκBα的表达。结论复方鳖甲软肝方能调节肺纤维化大鼠体内自由基水平,减轻自由基对肺组织结构的氧化损伤,调节肺组织蛋白IκBα的表达,进而抑制NF-κB表达,是该方防治肺纤维化的作用机制。

复方鳖甲软肝方药物血清干预TGF-β_1对HSC增殖的影响

目的 观察复方鳖甲软肝方 (FFBJRGF)药物血清干预TGF β1对离体肝星形细胞 (HSC)增殖的影响作用。方法 采用改进的中药血清药理学方法 ,在HSC的培养体系中添加外源性TGF β1,运用MTT法检测TGF β1对HSC增殖的影响 ,观测不同剂量复方鳖甲软肝方药物血清的干预TGF β1对离体肝星形细胞 (HSC)增殖的作用。结果 添加外源性TGF β1可减低HSC的增殖能力 ,但显效时间较长(72h) ;高、中、低剂量FFBJRGF药物血清组和IFN -γ血清组与正常对照HSC培养组比较 ,均明显HSC的增殖活性 (各组OD值比较 ,分别P <0 0 5 ) ,且显效时间短于添加外源性TGF β1组(2 4h)。结论 FFBJRGF药物血清、IFN γ血清和TGF β1均具有减弱HSC增殖的作用 ,且FFBJRGF药物血清可在TGF

益气软肝方与肝刺激因子对大鼠免疫性肝纤维化保护作用的对照研究

目的:通过与肝刺激因子(HSS)保肝作用的比较,评估益气软肝方(PGSL)对肝纤维化的保护作用。方法:大鼠肝纤维化模型由人血清白蛋白制备,PGSL保护组予PGSL中药汤剂每日两次灌胃,HSS保护组同时予HSS每周两次腹腔内注射,共8周。结果:PGSL及HSS均可以降低肝纤维化大鼠的死亡率;肝组织羟脯氨酸测定、大体标本、HE染色、嗜银及VG染色,提示二者均可以降低大鼠肝纤维化的增生程度。上述两个保护组比较均无统计学差异。结论:益气软肝方预防肝纤维化的作用与肝刺激因子相似。

复方鳖甲软肝方对离体肝星形细胞向肌成纤维细胞转型的影响

目的:观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体肝星形细胞(hepaticstellatecells,HSC)转型的影响,以探讨该药物血清防治肝纤维化作用的机制。方法:将成年的健康雄性SD大鼠75只随机分为对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组,并制备各组血清。采用大鼠HSC分离技术,将分离得到的HSC分别添加各组血清培养24,48h后,免疫组化ABC法检测各组HSC的α-平滑肌肌动蛋白(α-smoothmuscleactin,α-SMA)表达,经图像分析系统定量分析。结果:培养24,48h各药物血清组血清对HSC中α-SMA阳性染色不同时相吸光度(A值)(24h:高、中、低剂量分别为110.95±45.21,243.82±62.97,417.46±126.72;48h分别为:333.71±57.90,345.08±51.85,675.35±202.20)与模型组(24h:778.93±190.26;48h:1032.69±106.64)比较,差异有显著性意义(P<0.05);模型组、高、中剂量药物血清组与正常组比,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:高、中剂量复方鳖甲软肝方药物血清能抑制HSC的α-SMA表达,其抗肝纤维化作用机制可能与药物能抑制HSC向α-SMA的转型有关。

芍药软肝方对荷肝癌H_(22)小鼠肿瘤组织TGF-β_1 RⅡ、NF-κB、VEGF表达的影响

目的:观察芍药软肝方对小鼠H22肝癌肿瘤组织TGF-β1RⅡ、NF-κB、VEGF基因表达的影响。方法:ICR荷H22肝癌小鼠50只,随机分生理盐水对照组,芍药软肝方低、中、高剂量组,环磷酰胺组,停药次日处死小鼠,取皮下肿瘤组织。采用荧光定量RT-PCR法测定芍药软肝方对小鼠H22肝癌组织TGF-β1RⅡ、NF-κB、VEGF基因的表达。结果:芍药软肝方能上调小鼠H22肝癌组织TGF-β1RⅡ表达水平,以中剂量组最明显,与生理盐水组相比有显著性差异(P<0.01)。芍药软肝方各给药组均能明显下调荷H22肝癌实体瘤小鼠肿瘤组织中NF-κB的表达水平,与生理盐水组相比均有显著性差异(P<0.01)。芍药软肝方中、高剂量组能明显降低ICR小鼠H22肝癌肿瘤组织中VEGF的表达水平,以高剂量组最明显,中、高剂量组与生理盐水组均有显著差异(P<0.01)。结论:芍药软肝方抑瘤作用的机理可能是通过下调荷瘤小鼠肿瘤组织NF-κB、VEGF表达,并上调TGF-β1RⅡ的表达水平,从而抑制肿瘤组织新生血管生成,抑制肿瘤细胞增殖,实现其抗肿瘤作用。

复方鳖甲软肝方对肝星状细胞细胞周期的影响

目的 探讨复方鳖甲软肝方 (FFBJRGF)药物血清对离体肝星状细胞 (HSC)细胞周期及凋亡的干预作用。方法 运用流式细胞仪技术检测外源性TGF β1对HSC细胞周期及凋亡率的影响 ,进而观察FFBJRGF高、中、低剂量药物血清对HSC细胞周期及凋亡的干预作用 ,并以IFN γ药物血清及正常对照大鼠血清组作对照。结果 FFBJRGF各剂量药物血清组、TGF β1及IFN γ血清均不同程度增加G0 、G1期HSC细胞数量 ,其中FFBJRGF各剂量药物血清组作用尤为明显 ;与正常对照组比较 ,FFBJRGF各剂量药物血清组对HSCG2 、M、S期有一定的干预作用 ;TGF β1组能显著上调HSC凋亡率 ,但FFBJRGF各剂量药物血清组及IFN γ血清组作用不明显。结论 FFB JRGF药物血清具有显著抑制HSC细胞增殖周期作用 ,可能为其抗肝纤维化的机制之一 。

健脾软肝方对四氯化碳致肝纤维化大鼠α-SMA及其mRNA表达的影响

目的:明确健脾软肝方对肝纤维化大鼠α-SMA及其mRNA表达的影响,初步探讨健脾软肝方防治肝纤维化的作用机制,为肝纤维化的中医临床治疗提供实验依据。方法:选取Wistar雄性大鼠72只,随机分为正常组、模型组、扶正化瘀胶囊组、健脾软肝方高、中、低剂量组。模型组利用CCl4对大鼠进行腹腔注射,按0.2 m L/100 g腹腔注射30%CCl4与70%橄榄油混合溶液,正常组注射等量生理盐水,2次/周,4周后复制大鼠肝纤维化动物模型,该实验采用免疫组化ABC法检测肝纤维化大鼠α-SMA蛋白的表达水平,采用Real-time PCR法检测肝纤维化大鼠α-SMA mRNA的表达水平,采用H-E染色和Mallory染色观察大鼠肝纤维化的病变程度。结果:模型组α-SMA蛋白表达显著上升(P<0.05);健脾软肝方高、中、低剂量组组与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中高、中、低剂量组之间α-SMA蛋白阳性表达逐渐升高,可以呈一定的药物依赖关系。模型组α-SMA mRNA表达显著上升(P<0.05);健脾软肝方高、中、低剂量组组与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05),且高、中、低剂量组之间α-SMA mRNA表达水平逐渐升高,呈一定的药物依赖关系。结论:健脾软肝方抗肝纤维化的作用机制可能与抑制大鼠肝脏内α-SMA及其mRNA的表达有关。

复方鳖甲软肝方对肝星形细胞结蛋白、突触素表达的影响

目的观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体SD大鼠肝星形细胞(hepaticstellatecells,HSC)结蛋白、突触素表达的影响,以探讨其抗肝纤维化作用机制。方法将成年健康雄性SD大鼠75只,随机分为正常对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组,并制备各组血清。采用大鼠HSC分离技术,将分离得到的HSC分别添加各组血清培养24,48,72h后,免疫组化检测各组HSC的结蛋白、突触素表达,并经图像分析系统作定量分析。结果培养24h正常对照组、高、中、低剂量药物组大鼠HSC结蛋白、突触素的表达(A值)(78.93±18.56,396.29±78.56;58.95±5.21,138.92±20.21;63.83±12.97,190.87±52.97;75.46±26.72,284.54±66.72)与模型组(119.69±23.84,528.79±26.84)比较,差异有显著性意义(P<0.05);培养48,72h各组结蛋白、突触素的表达(A值)与模型组比较,差异也有显著性意义(P<0.05)。除低剂量药物组外的其余各组大鼠HSC结蛋白、突触素表达与正常对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。结论复方鳖甲软肝方能显著抑制HSC结蛋白、突触素的表达,其抗肝纤维化作用机制可能与药物抑制HSC活化有关。

四逆软肝方病证结合治疗肝硬化特色分析

肝硬化为慢性、难治性、不可逆性、高死亡率、顽固性疾病。笔者认为肝硬化的病因病机复杂多样,但始动病因为湿热疫毒,病机为肝肾阴虚、痰瘀互结、本虚标实、虚实夹杂,结合现代医学临床表现及病证分型,在治疗上立足中医整体观、辨证论治,以清热利湿、疏肝健脾、活血化痰、软坚散结、益气养阴为基本大法,创制四逆软肝方治疗肝硬化,临床疗效颇著,实现了肝硬化难以逆转的"四逆"。

复方鳖甲软肝方防治肺纤维化细胞凋亡的实验研究

目的通过观察细胞凋亡,探讨复方鳖甲软肝方防治肺纤维化的机理和疗效。方法选SD雄性大鼠180只,随机分为假手术组,模型组,阳性药物对照组,复方鳖甲软肝方高、中、低剂量组,共6组,每组30只。博莱霉素常规造模的同时给药,假手术组和模型组每天灌胃生理盐水,其余4组灌药进行防治。各组分别于7,14,28 d随机抽取10只大鼠,8只制成光镜标本,2只麻醉后快速开胸取肺组织,进行电镜标本的制作。免疫组化载玻片用DEPC处理后备用。结果Ⅰ型和Ⅱ型肺泡上皮细胞以及成纤维细胞均有凋亡。bax在肺泡Ⅰ型和Ⅱ型上皮细胞,肺泡巨嗜细胞胞质和胞膜均表达。假手术组和高、中剂量组呈弱阳性表达,模型组强阳性表达。Bc l-2在核膜和线粒体表达,模型组强阳性表达,药物组弱表达。结论复方鳖甲软肝方通过调节细胞凋亡,上调Bax活性,抑制Bc l-2的活性,抑制Ⅱ型上皮细胞凋亡,减少纤维积聚和纤维化形成,对肺纤维化起到防治作用。

去脂软肝方对高脂诱导大鼠脂肪肝血管性血友病因子作用的实验研究

目的探讨去脂软肝方对高脂诱导脂肪肝大鼠肝组织血管性血友病因子的影响作用。方法高脂饮食复制大鼠脂肪肝模型,将实验鼠随机分为三组:正常组,模型组,去脂软肝方组。去脂软肝方组予去脂软肝方药液灌胃(1 mL/200 g)共12周;HE染色观察肝脏脂肪变性情况;测定大鼠血清血脂、肝脂、血浆血小板聚集率及肝组织血管性血友病因子(vWF)。结果 12周末模型组大鼠血脂[血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)]水平比正常组高,差异有统计学意义(P<0.05);模型组大鼠肝组织匀浆(肝脏TC、TG)与比正常组高,差异有统计学意义(P<0.05);去脂软肝方组血清脂质和肝组织脂质水平比模型组低,差异有统计学意义(P<0.05);模型组大鼠血小板聚集率比正常组高,差异有高度统计学意义(P<0.01);模型组大鼠肝脏组织中vWF比正常组高,差异有高度统计学意义(P<0.01);去脂软肝方组血浆血小板聚集率变化及肝组织vWF比模型组低,差异有高度统计学意义(P<0.01)。结论去脂软肝方能明显改善高脂诱导脂肪肝大鼠血脂、肝脂及肝组织脂肪变性。减少vWF分泌、抑制血小板聚集、减轻血管及肝窦内皮细胞损伤可能是其作用机制之一。

健脾软肝方对肝纤维化TGF-β/Smad细胞信号转导通路的影响

目的:观察健脾软肝方对四氯化碳大鼠肝纤维化模型中TGF-β/Smad信号转导通路的影响。方法:复制CCl4大鼠肝纤维化模型,观察不同剂量健脾软肝对模型大鼠肝纤维化TGF-β/Smad通路各位点的影响。利用RT-PCR方法检测TGF-β1mRNA的表达水平,免疫组化法检测TGF-β1受体的表达和Western Blot法检测大鼠肝组织中Smad3、Smad7蛋白的表达。结果:健脾软肝方可以下调TGF-β1mRNA和TGF-β1受体的表达,调节Smad3/Smad7的比例。结论:健脾软肝方对TGF-β/Smad细胞信号转导途径中多个位点均有抑制作用。

健脾软肝方及拆方对CCl_4肝纤维化大鼠脂质过氧化的影响

目的:观察福尔肝健脾软肝方及拆方对CCl4肝纤维化大鼠脂质过氧化的影响。方法:复制CCl4肝纤维化大鼠模型,以等效剂量健脾软肝方及拆方灌胃,并以鳖甲软肝片为对照,观察模型大鼠肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量。结果:与正常组比较,模型组大鼠肝组织Hyp含量显著增加,SOD活性明显下降,MDA含量显著升高,表现为显著的脂质过氧化损伤和肝损伤。经药物治疗后,各药物组SOD活性(除理气活血软肝方组、活血软肝方组外)均有不同程度升高,以健脾软肝方组和健脾活血软肝方组在升高SOD活性方面优于其它治疗组;各药物组MDA含量(除活血软肝组外)均有不同程度降低,以健脾软肝方组MDA含量降低较为明显,显示良好的抗肝脂质过氧化作用。结论:福尔肝健脾软肝方及拆方具有良好的抗肝纤维化作用,尤以健脾软肝方全方组作用为好。抗脂质过氧化可能是健脾软肝方及拆方抗肝损伤和抗肝纤维化作用的重要靶点之一。

复方鳖甲软肝方对阿霉素肾病大鼠肾组织内皮素-1蛋白及其mRNA表达的影响

目的:探讨复方鳖甲软肝方对阿霉素肾病大鼠肾组织的保护作用机制。方法:将45只大鼠随机分为3组,正常对照组(9只)、假手术组(9只)及手术组(27只)。切除大鼠右侧肾脏并腹腔注射阿霉素建立阿霉素肾病大鼠模型。于术后1周,手术组按体重再次随机均分为模型组、苯那普利组和复方鳖甲软肝方组。从开始注射阿霉素后,苯那普利组(25 m g/kg)和复方鳖甲软肝方组(14 g/kg)开始灌胃治疗,假手术组给予等量生理盐水灌胃。观察并记录实验2、4、6、8和10周大鼠体重、24 h尿蛋白;于10周末处死大鼠,取大鼠颈动脉血检测尿素氮、血肌酐、胆固醇、甘油三酯、总蛋白和白蛋白;观察肾组织病理形态学改变,采用免疫组化及原位杂交方法分析肾组织ET 1蛋白及其mRNA表达。结果:除正常对照组和假手术组外,其余3组大鼠均有不同程度的摄食减少、精神不振、活动迟缓、尿量减少、体重减轻、24 h尿蛋白定量增高、血生化指标异常等,而苯那普利组和复方鳖甲软肝方组均有不同程度改善,且复方鳖甲软肝方组优于苯那普利组,但两者差异无显著性。模型组大鼠肾小管上皮细胞、肾小球系膜细胞以及肾小球脏层上皮细胞胞浆中ET 1蛋白及mRNA表达呈强阳性;复方鳖甲软肝方组与苯那普利组大鼠肾组织ET 1蛋白及mRNA表达均较模型组显著减少,但两者比较差异无显著性。结论:复方鳖甲软肝方能够减少阿霉素肾病大鼠肾小管上皮细胞、肾小球系膜细胞以及肾小球脏层上皮细胞胞浆中ET 1蛋白及其mRNA表达,降低肾组织ET 1含量,从而起到保护肾功能,延缓肾功能衰竭的作用。

复方鳖甲软肝方对离体肝星形细胞增殖的影响

目的:观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体肝星形细胞(hepaticstellatecells,HSC)增殖的影响,以探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法:将成年健康雄性SD大鼠75只,随机分为正常对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组,并制备各组血清。采用大鼠CCl4造模后肝星形细胞分离、培养,药物血清制备,MTT法检测法各组血清对HSC不同时相增殖的影响,酶标仪波长为450nm。结果:培养24h,各组HSC增殖比较,差异无显著性意义(P>0.05);培养48,72h,高、中、低剂量药物组HSCA值(0.47±0.02,0.55±0.07;0.46±0.02,0.58±0.08;0.51±0.03,0.69±0.07)与模型组(0.66±0.05和0.96±0.05)比较,差异有显著性意义(P<0.05);高、中剂量组药物组与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:不同剂量的复方鳖甲软肝方药物血清作用48,72h后均能降低或抑制HSC的增殖,尤以高、中剂量作用明显。