胡萝卜软腐欧氏杆菌胡萝卜亚种游动性突变体的筛选

用转座子 Tn5对胡萝卜软腐欧氏杆菌胡萝卜亚种 ( Erwinia carotovora subsp.carotovora,Ecc)进行诱变 ,获得 9个游动性改变了的突变体。 M4 32游动性变大 ;M143、M4 51和 M574游动性完全丧失 ;M4 3、M4 9、M330、M72 5和 M72 6游动性较野生型变小。这 9个突变体在大白菜叶柄上的致病力均减弱。游动性变小或丧失的突变体鞭毛数目减少或未发现有鞭毛。

软腐欧氏杆菌在离体条件下产生胞外酶的比较研究

3种软腐细菌在21,26和31℃下及6种培养液中的生长量和产生胞外酶的能力各不相同。Ecc在26℃生长最好,Eca为21℃,Ech在三种温度下的生长量差别不大。与其它2种细菌比较,Ech的生长及产生果胶裂解酶(PL)的能力总是最强的。随着温度的升高,各种细菌的PL活性都下降。果胶水解酶(PG)变化不大,但Ech在高温下产PG有减少趋势,且总没有另二种细菌的活性强。Eca以26℃时产PG最适宜。Ech在较高温度下蛋白酶活性大大下降,而Ecc,变化不大,Eca的蛋白酶活性则随温度升高而加强。培养液的无细胞滤液对马铃薯块茎组织的浸离力与其中PL的活性有密切关系,但没有或只有很低果胶酶活性,而蛋白酶活性正常的这种滤液也能使小薯碟浸离。Eca在31℃培养后果胶酶活性很低,蛋白酶活性很高,其无细胞滤液对马铃薯组织也表现较强浸离力。

大白菜根表结构与软腐欧氏杆菌吸附和侵入的关系

用大白菜6个品种和软腐欧氏杆菌(Erwinia carotovora subsp.carotovora)致病力等性状不同的3个菌株测定表明,病菌对根毛吸附的菌量与对根系侵入的菌量间有正相关关系。吸附表现出可逆和不可逆两种状态,试验中用改进的方法对它们作了定量研究。可逆吸附发生和完成的最早时间分别是1～5和10～15分钟,此时用水洗法可使28～100%的菌体解吸附。不可逆吸附发生和完成的时间分别为15和30分钟,菌体以静止不动为特征,只能由解吸附剂处理而部分地解吸附。在接种后15分钟,可逆吸附逐渐向不可逆吸附转化,条件是病菌对根毛表面的种群压力必须保持在最初接种液含菌量的50%以上。病菌吸附还表现出根毛区段的差别,常以根毛顶端吸附菌量较高。

异源Harpin对软腐欧氏杆菌与植物互作关系的影响

本文通过三亲交配将带有梨火疫欧文氏杆菌功能完整的 hrp基因簇的重组粘粒 p CPP4 30转移到了胡萝卜软腐欧氏杆菌 (Erwinia carotovora) Se9R中。从接合子中提纯的质粒与 p CPP4 30的大小、酶切图谱相同 ;以该质粒为模板 ,用针对 hrp N序列的引物经 PCR扩增得到与 hrp N大小相同的片段 ;用地高辛标记的 hrp N作为探针进行 Southern blotting分析 ,在接合子中的质粒上得到预期的杂交带。接合子可以在烟草叶片上稳定地引起过敏反应。另外 ,接合子可以在寄主马铃薯叶片上引起过敏反应样枯斑 ,表明异源 harpin的表达及功能不受软腐菌的抑制。该接合子在体外产生的果胶酸裂解酶活性与受体菌 Se9R无明显差别。低浓度的接合子在马铃薯块茎上的软腐症状明显低于受体菌 Se9R。外源harpin表达可能不改变软腐欧氏杆菌的致病力、而是通过诱导马铃薯抗性达到减轻发病的作用。

三种环境因子对大白菜软腐欧氏杆菌根毛吸附的影响

温度、pH和离子条件是影响病原细菌对寄主吸附的基本因子,文章测定了它们对大白菜软腐欧氏杆菌(Erwinia carotovora pv.carotoyora)在寄主根毛上吸附的影响。病菌在5个给定温度下对寄主根毛吸附量的变化,呈现为由吸附起始温度(18℃)、温度稳恒渐近范围(18—22℃)和温度饱和点(22℃)组成的吸附动力曲线。病菌在12个pH梯度下的运动状态、生活力及对寄主根毛吸附量的变化表明,病菌吸附以pH5.8—7.2为适宜范围,pH4.6和8.2为低限和高限;偏酸(pH5.0以下)和偏碱(pH7.2以上)可通过影响病菌的生活力和运动性而影响吸附。5×10^(-6)M的Ca++可使病菌吸附量提高2.5—4.2倍,同浓度的Mg++可使吸附量提高2.7倍。文章讨论了温度和pH条件影响吸附的动力学,以及吸附调节的可能机制。

软腐欧氏杆菌的蛋白酶与致病作用的关系

胡罗卜软腐欧氏杆菌(Erwinia carotovora var.carotovora Dyc)在合成培养基MS中产生两种蛋白酶,但在无细胞滤液中测不到果胶裂解酶和果胶水解酶的活性。用等电聚焦电泳测得这两种蛋白酶都是碱性蛋白酶,等电点分别为8.3和8.9。变性温度为49—50℃,对酸或碱具有较高的稳定性。纯化的蛋白酶单独作用马铃薯块、能使其变软,切片观察表明细胞壁被明显降解。通过滤膜结合法,将供体菌1830/pJB4J1::Tn5的转座子转入到野生型StEcc—12中,从2000个接合子中获得了11个缺少产蛋白酶能力的突变体。这些突变体的分泌性蛋白质等电聚焦图谱与野生型菌株明显不同,其中一个变突体蛋白酶带完全缺失,另外一个则出现8条新的蛋白带,其他5个属部分缺失。这些突变体对马铃薯块组织离析、腐烂的能力都有不同程度的减弱。研究结果认为在由胡罗卜软腐欧氏杆菌引起的软腐病程中蛋白酶和果胶酶是协同作用的,果胶酶降解植物细胞间和胞壁中的果胶质,而蛋白酶则降解植物细胞壁和膜中的蛋白质。

大白菜软腐欧氏杆菌与寄主相互作用的阶段性和专化性

在大白菜软腐病系统中,病菌-寄主的相互作用主要经历以接触识别为核心的侵入前阶段和以病菌致病性与寄主抗病性之间的相互作用为核心的潜伏侵染阶段和发病阶段。相互作用的专化性表现为病菌的趋根运动和根系富集作用、病菌对寄主根表的专化性吸附和表面分子识别、病菌致病酶的作用与寄主对酶作用的影响。关于相互作用阶段性和专化性的观点,重新认识和修正了对该病害系统的原有认识,并为病害控制新途径的探讨和建立提供了依据。

几种软腐欧氏杆菌对马铃薯致病性及块茎感病性的研究

3类软腐欧氏杆菌在不同温度下对马铃薯块茎的致病性差异很大。在2l±1℃,致病力的强弱顺序为 Eca,Ecc,Ech;26+2℃时为 Ecc,Ech,Eca;而31.5℃时则为 Ech,Ecc,Eca.Ecc,Ech 随温度升高而致病力增强,比较了克新1号和内薯1号品种对软腐病的感病性,发现当接种方法不同时,两个品种的抗性次序不同。同一品种薯块的茎端比芽端的感病性强。

软腐欧氏杆菌的Ⅲ型分泌系统对harpin蛋白的识别与分泌

本文研究软腐欧氏杆菌分泌致病蛋白的Ⅲ型分泌系统的组分是否能识别梨火疫欧氏杆菌存在于mRNA上的分泌识别信号。用PCR的方法 ,将带有上游 75bp可以在其mRNA的5′端形成一个典型的作为Ⅲ型分泌识别信号的茎环结构的梨火疫欧氏杆菌的诱导植物过敏反应的harpin的基因hrpN ,从带有hrp基因簇的质粒pCPP43 0上克隆到pGEM T载体上 ,获得重组质粒pWGF1 ,经化学法转化到hrpN基因的转座突变体DH5α(pCPP43 0hrpN- )中 ,同时将pWGF1电击转化到胡萝卜软腐欧氏杆菌Se9R中 ,转化子的无细胞抽提物 (CFEP)经Western blot检测到harpin蛋白已被表达 ;带有双重质粒的DH5α(pCPP43 0hrpN- pWGF1 )在番茄植物上可以引起过敏反应 ,Se9R(pWGF1 )在大白菜上的致病力明显低于Se9R ,初步表明一种植物病菌的harpin蛋白可被另外一种病菌的Ⅲ型分泌系统所识别。

马铃薯品种对软腐欧氏杆菌皮孔侵染的抗性机制

抗病品种的薯块单位面积上皮孔数目少,表皮角质层厚,周皮细胞层数多,皮孔组织角质化程度高。抗性不同的10个马铃薯品种自然带菌的薯块在人工诱发时,抗病品种的腐烂率显著低于来自同一田块的感病品种。9个品种的薯块用皮孔浸渍法进行人工接种后,抗病品种皮孔内细菌数量迅速减少或缓慢增多,而感病品种内则迅速增多。扫描电镜观察表明,抗病品种Murlur的薯块皮孔内的细菌畸形,皮孔内有大量颗粒状或块状填充物质,感病品种晋薯二号薯块皮孔内的细菌形态正常,皮孔內无填充物质。

甜瓜细菌性软腐病病原鉴定

近年来,浙江义乌等地的甜瓜(CucumismeloL.)果实上普遍发生一种外观褐色小斑,果肉水渍状腐烂现象,局部田块发病率高,损失严重。为确定病原,从病果上分离到4个细菌菌株,分别定名为M1、M2、M3和M4。烟草过敏性反应和致病性测定表明M2和M4不具致病性,而M1和M3在烟草上能引起典型的过敏性坏死反应,接种甜瓜24h内即导致果实的明显腐烂,所引起的腐烂症状与田间发病果实一致。对M1和M3进行培养性状、革兰氏染色、形态学和鞭毛观察、马铃薯薯块腐烂试验,以及16SrRNA基因测序和比较,结果证明该病害是由软腐欧氏杆菌软腐亚种Erwiniacarotovorasubsp.carotovora引起。

岚皋魔芋软腐病病原细菌生物多样性研究

【目的】研究岚皋魔芋软腐病病原细菌生物多样性。【方法】采用组织分离法分离纯化魔芋软腐病球茎及叶柄中的致病菌,通过魔芋球茎、胡萝卜及马铃薯块的侵染试验初步确定其致病性,再利用魔芋球茎侵染致病及盆栽致病性试验确认其致病性;经菌落与细胞形态、生理生化特性及16SrRNA序列测定确定病原菌的类型。【结果】从魔芋软腐病球茎及叶柄中共分离获得16株细菌,侵染试验表明,其中CDS1-B1、CDS1-B2、CDS2-B1、CDS2-B2、CZS-B4和CZS-B6共6株细菌可使魔芋球茎表现软腐症状,并导致盆栽魔芋发病;6株细菌的菌落与细胞形态均存在差异;在魔芋、胡萝卜及马铃薯块上的侵染能力不同;16SrRNA序列分析表明,菌株CDS1-B1、CDS1-B2、CDS2-B1及CDS2-B2均与菊欧氏杆菌(Erwinia chrysanthemi)亲缘关系最近,菌株CZS-B4与菊欧文氏菌(Dickeya dadantii)亲缘关系最近,相似度为98.8%,菌株CZS-B6与菊果胶杆菌(Pectobacterium chrysanthemi)的相似度达99.9%。【结论】导致岚皋县魔芋软腐病的致病细菌存在生物多样性,其致病性也存在差异,其中新发现的魔芋软腐病原菌菊果胶杆菌(Pecto-bacterium chrysanthemi)致病性最强,菊欧氏杆菌(Erwinia chrysanthemi)和菊欧文氏菌(Dickeya dadantii)致病性较弱。

云南马铃薯细菌性软腐病原菌的分离鉴定

从云南省马铃薯产区取样 ,用厌气技术分离纯化了 42个软腐欧文氏杆菌菌株。根据品种差异代表性地选出2 0个菌株进行主要细菌学性状鉴定 ,并在此基础上进行分类。结果表明 :13个菌株 (占 6 5 % )是Erwiniacarotovo ravar.carotovora ,3个菌株 (15 % )是Erwiniachrysanthemi ,其它 4个菌株根据其生理生化特性划归为中间型 ,介于Erwiniacarotovoravar.carotovora和Erwiniachrysanthemi之间。

春羽细菌性软腐病病原鉴定

春、夏雨水季节,在中山市横栏镇等地花本场发现春羽(Philodendron selloum)小苗叶片发生软腐症状,株发病率达70%～80%,损失严重。经分离培养、致病性测定、形态学观察、生理生化测定以及16S rDNA序列分析,将该病的病原菌鉴定为菊欧氏杆菌(Erwinia chrysanthemi),此病在国内首次报道;室内药剂筛选显示硫酸链霉素可作为有效防治农药。

云南香蕉细菌性软腐病病原鉴定

为了明确引起云南香蕉细菌性软腐病的病原菌,为该病害防控提供基础,在植蕉区采集香蕉细菌性软腐病病害标样,对病原菌进行分离、致病性测定、寄主范围测定、形态学观察、生理生化反应及16S r DNA序列分析。结果表明:分离获得的菌株均有致病性,病原菌形态特征、寄主范围、生理生化测定结果与Erwinia chrysanthemi相符。16S r DNA序列分析表明:代表性菌株的测序结果与E.chrysanthemi(序列登录号:GU811708)的同源性达到99%以上,系统发育树分析结果与之一致,表明引起云南香蕉细菌性软腐病的病原菌为菊欧氏杆菌(E.chrysanthemi),该病害是近年来发生在云南植蕉区的一种新病害。

魔芋软腐病病原菌的分离及致病性研究

自贮藏期腐烂的魔芋球茎和有典型软腐病害症状特性的植株分离出的菌株 ,通过形态特征、生理生化特性及致病性研究 ,结果表明 :3号、4号菌株为魔芋软腐病病原菌 -胡萝卜软腐欧氏杆菌 (Erwiniacarotovorasubsp .carotovora) 。

不同施肥量对魔芋软腐病的影响研究

魔芋是多年生草本植物,含有大量的葡甘聚糖,并含有多种人体不能合成的氨基酸及钙、锌、铜等矿物质,是一种低脂、低糖、低热、无胆固醇的优质食品,同时还是多种行业所需的重要原料。随着集约化规模栽培的发展，魔芋病害种类越来越多，目前在生产上常见的病害是软腐病，由胡萝卜软腐欧氏杆菌胡萝卜致病变种侵染所致，从种植到贮藏都易发病，是一种毁灭性的病害，被称为魔芋的“癌症”。

不同种类的细菌对大白菜软腐欧氏杆菌根表吸附的竞争作用

用吸附竞争试验,测定了8种细菌共10个菌株对大白菜软腐欧氏杆菌(Erwinia carotovorasubsp.carotovora)菌株 RL4在大白菜根表吸附的竞争作用。竞争菌的吸附竞争作用与它们对大白菜根表的吸附能力相一致,在等量混合接种时,只有能对大白菜根表发生吸附的7个菌株表现出程度不同的吸附竞争能力,其中以菌株 BCE 4(RL 4是从它筛选出的抗利福平菌株)竞争最强,它也是对寄主根表吸附能力最强的菌株,其吸附竞争作用最高可达98%,不表现1∶1的数量关系。RL4和 BCE4的热杀死菌体不发生吸附竞争。发生吸附竞争的有效时间为竞争菌对根表预吸附15分钟以后,或病菌(RL4)吸附15分钟以前。