去分化软骨肉瘤11例临床病理分析

目的探讨去分化软骨肉瘤的临床、影像学及病理学特点。方法收集11例去分化软骨肉瘤患者的临床及影像资料,对组织进行病理分析。结果患者以男性多见(7/11),平均年龄57.1岁,肿瘤多位于长管状骨及骨盆。影像学显示广泛的骨质破坏,病灶内可有钙化或骨化,病理性骨折3例。眼观:病理软骨成分常位于骨内,去分化肉瘤成分主要位于骨外。镜下包括高分化软骨肉瘤和低分化间叶源性肉瘤两种成分。随访材料中6例死亡,平均存活14个月。结论去分化软骨肉瘤检:呈少见的的软骨肉瘤亚型,去分化类型多样,只有加深对其的认识,才能提高诊断的准确率。

miR-181a及miR-138对软骨肉瘤细胞增殖的影响

【目的】探讨miR-181a及miR-138对软骨肉瘤细胞增殖的影响。【方法】收集20例软骨瘤及20例软骨肉瘤组织标本,采用qRT-PCR检测miR-181a及miR-138表达水平,采用miRNA模拟物促进软骨肉瘤细胞SW1353中miR-181a及miR-138的表达,通过细胞计数法检测miR-181a或miR-138单独过表达及联合过表达对SW1353细胞的生长能力的影响。通过TargetScan数据库预测miR-181a、miR-138与RAS家族关联结构域蛋白8(RASSF8)的结合位点,并采用双荧光素酶报告基因实验进行验证。【结果】与软骨瘤组织相比,miR-181a及miR-138在软骨肉瘤组织中的表达均显著上调(P<0.05);与阴性对照相比,miR-181a及miR-138单独过表达组的细胞生长能力均显著上调(P<0.05),且miR-181a及miR-138联合过表达组细胞生长能力上调最为显著;经预测,miR-181a及miR-138与RASSF8均存在结合位点;与共转染野生型RASSF8+scramble组相比,共转染野生型RASSF8+miR-181a组以及野生型RASSF8+miR-138组的荧光素酶活性均显著降低(P<0.05);与共转染突变型RASSF8+scramble组相比,共转染突变型RASSF8+miR-181a组及突变型RASSF8+miR-138组的荧光素酶活性无显著变化(P>0.05)。【结论】miR-181a及miR-138可能通过抑制RASSF8而促进软骨肉瘤细胞的生长。

熟地寄生壮骨方对膝骨关节炎模型大鼠关节软骨形态的影响

【目的】观察熟地寄生壮骨方对膝骨关节炎模型大鼠关节软骨形态的影响。【方法】选用SD大鼠,随机分为7组,即空白对照组,模型对照组,必理通片组(剂量为0.270 g/kg),壮骨关节丸组(剂量为1.08 g/kg),熟地寄生壮骨方高、中、低剂量组(剂量分别为27.450、13.725、6.863 g/kg);采用关节腔注射木瓜蛋白酶法复制右膝骨关节炎模型,测量给药前后各组大鼠膝骨关节厚度,观察各组对右膝骨关节炎模型的影响;取右膝关节软骨及软骨下骨,制成组织切片后进行苏木精—伊红(HE)染色,采用Mankin软骨组织学评分法进行评分。【结果】与空白对照组比较,模型组膝骨关节肿胀度显著增大(P<0.01),Mankin评分值显著增加(P<0.01);与模型对照组比较,熟地寄生壮骨方各剂量组大鼠膝骨关节肿胀度显著减小(P<0.05或P<0.01),Mankin评分值均显著降低(P<0.01),膝关节软骨病理变化均减轻。【结论】熟地寄生壮骨方能改善膝骨关节炎模型大鼠膝关节软骨形态,达到改善软骨退变、保护软骨的目的。

补肾活血方对骨关节炎软骨细胞低氧诱导因子-1α mRNA的影响

【目的】观察补肾活血方对骨关节炎软骨细胞中低氧诱导因子(HIF)-1αmRNA表达的影响。【方法】32只SD大鼠随机分为正常组、模型组、中药组、塞来昔布组(西药组),每组8只,按照Hulth法复制膝骨关节炎模型,取关节软骨,对关节软骨病理切片采用Safranin O染色,光镜下观察,进行Mankin评分,并采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组HIF-1αmRNA的表达。【结果】模型组Safranin O染色的Mankin评分较正常组显著升高(P<0.05);中药组Safranin O染色减少或缺失程度较西药组、模型组轻,差异有显著性意义(均P<0.05)。模型组HIF-1αmRNA表达较正常组升高,差异有显著性意义(P<0.01);中药组HIF-1αmRNA表达低于西药组、模型组,差异有显著性意义(均P<0.05)。【结论】补肾活血方可能通过抑制HIF-lαmRNA上调,从而延缓骨关节炎的发展。

缺氧条件下鼠胚软骨c-Fos和巢蛋白表达及当归的保护作用

目的:探讨宫内缺氧对胚胎大鼠软骨组织内c-Fos和巢蛋白表达的影响,以及中药当归注射液对缺氧状态下其表达的调节。方法:于2004-06/12在四川省泸州医学院动物科将成年发情期雌性Wis-tar大鼠(220～250g)12只,分别与1只雄鼠合笼饲养,于次日上午8:00发现阴栓记孕鼠怀孕0d,饲养雌鼠至孕15d。将12只孕鼠随机分为对照组、缺氧组和当归组各4只(每只孕鼠产胎鼠5～8只)。当归组孕鼠经尾静脉注入当归注射液,然后用低张性缺氧模型致鼠胚宫内缺氧;缺氧组用生理盐水代替当归注射液,其余同当归组;对照组不缺氧,其余同缺氧组。然后麻醉状态下处死孕鼠,快速剖腹取胎,每组中随机选取20个鼠胚,将各组胎鼠头部软骨组织作c-Fos和巢蛋白免疫组化双标染色后,进行观察分析。结果分析与判断:每张切片用DP12数码相机在400倍下照相,并随机选择1个软骨组织视野观察计数。c-Fos免疫组化反应阳性细胞为胞核着蓝色,巢蛋白免疫组化反应阳性细胞胞质染红色。将凡是胞质染红色的细胞根据红色深浅分为3个等级:深红色计为、红色计为、淡红色计为+,分别对其记数,然后将同一组内20个鼠胚3个等级的阳性细胞数分别相加,得出该组的巢蛋白免疫组化结果。既有胞核染蓝色,又有胞质染红色的为c-Fos/巢蛋白免疫组化双染阳性细胞,计数每例鼠胚软骨组织双染阳性细胞的数量。结果:60个鼠胚头部软骨组织进入结果分析。①对照组软骨组织c-Fos和巢蛋白有弱表达;与对照组相比,缺氧组软骨组织c-Fos和巢蛋白表达增强[c-Fos:(5.35±1.42),(14.55±3.37)个/视野,q=16.48,P<0.05;巢蛋白:193,427个/20个鼠胚,RA-RB=66.78,P<0.05]。②与缺氧组相比,当归组软骨组织c-Fos和巢蛋白表达减弱[c-Fos:(8.00±2.31)个/视野,q=11.73,P<0.05;巢蛋白:250个/20个鼠胚,RA-RB=51.83,P<0.05]。结论:①缺氧可刺激鼠胚软骨组织巢蛋白的表达,c-Fos可能是缺氧刺激巢蛋白表达的机制之一。②当归注射液对缺氧鼠胚软骨组织可能有保护作用。

通痹合剂对佐剂性关节炎模型大鼠软骨保护作用的机制研究

【目的】观察通痹合剂对佐剂性关节炎模型(AA)大鼠软骨的保护作用及机制。【方法】选用Wistar大鼠,随机分为正常组、模型组、消炎痛组(剂量为2.6 mg.kg-1.d-1)、柳氮磺胺吡啶组(剂量为825 mg.kg-1.d-1)、通痹合剂组(剂量为30 g.kg-1.d-1)。除正常组外,其他组大鼠均采用弗氏完全佐剂(剂量为0.2 mg/只)尾根部注射复制AA模型。灌胃给药2周后,观测各组大鼠踝关节软骨组织病理形态变化及病理积分,采用免疫组化法检测各组大鼠软骨组织中金属蛋白酶-3(MMP-3)和组织金属蛋白酶抑制剂-3(TIMP-3)的表达。【结果】AA模型组大鼠因关节炎症及软骨破坏致病理积分显著升高(P<0.01),关节及软骨出现重度病理损伤,软骨组织MMP-3表达显著升高,TIMP-3表达显著降低(均P<0.01)。通痹合剂组大鼠关节软骨组织病理积分显著降低(P<0.01),关节及软骨出现轻度病理损伤,软骨组织MMP-3表达显著降低,TIMP-3表达显著升高(均P<0.01),其作用与阳性对照药消炎痛相仿(P>0.05),但毒副作用小。【结论】通痹合剂治疗强直性脊柱炎(AS)的作用可能与其能调节MMP-3/TIMP-3平衡有关。

兔椎间失稳软骨终板Ⅱ型胶原变化的相关实验研究

目的：通过研究兔软骨终板Ⅱ型胶原在椎间失稳环境下的退变过程及机制，加深对椎间盘退变的认识。方法：选取48只6月龄日本大耳白兔雌雄不限，体重为（2．5±0．2）kg，均在相同条件下饲养，随机进行分组，分为正常对照组21只兔、实验失稳组27只兔；先将实验失稳组27只兔进行L6～7椎间手术失稳；均分别在术后2、4、6个月取材。对椎间盘软骨终板的Ⅱ型胶原用免疫组化的方法进行检测，用JD801图像分析系统进行图像分析，结果用SPSS11．5统计软件统计分析；以综合判断软骨终板的退变过程及机制。结果：（1）在自然增龄短期过程中，软骨终板的Ⅱ型胶原无明显变化；（2）椎间失稳可导致椎间软骨终板Ⅱ型胶原含量明显减少。结论：（1）在自然增龄过程中，软骨终板Ⅱ型胶原的无明显退变；（2）椎间失稳能明显导致椎间软骨终板Ⅱ型胶原的退变。

姜黄素通过调节Wnt/β-catenin信号通路促进软骨细胞增殖的研究

【目的】探讨姜黄素通过Wnt/β-catenin信号通路对软骨细胞增殖的影响。【方法】取4周龄雌雄新西兰大白兔各1只,采用酶消化法构建体外软骨细胞培养体系;应用形态学观察、甲苯胺蓝染色方法进行细胞形态学鉴定;采用细胞计数试剂盒法(CCK-8法)检测不同浓度姜黄素给药24 h后对软骨细胞增殖的影响;将终浓度为5μmol/L、10μmol/L的姜黄素分别作用于软骨细胞12 h、24 h后,采用Western blot法检测Wnt/β-catenin信号通路中Wnt 2、GSK-3β、β-catenin蛋白表达情况。【结果】当姜黄素的浓度为10μmol/L时,姜黄素对软骨细胞的促增殖作用最为明显。姜黄素能够促进Wnt/β-catenin信号通路中Wnt 2及β-catenin蛋白表达量,且10μmol/L组较5μmol/L组、24 h组较12 h组的表达量更高,24 h两浓度组与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),但12 h的两浓度组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),而GSK-3β结果则正好与上述2种蛋白表达结果相反。【结论】姜黄素对软骨细胞具有一定的保护作用,是中药姜黄发挥抗骨关节炎作用的有效成分之一。

骨外黏液样软骨肉瘤研究进展

骨外黏液样软骨肉瘤(ex-traske-letal myxoid chondrosarcoma,EMC)是一类罕见的软组织恶性肿瘤,主要发生于四肢深部。其组织病理学为分叶状结构,肿瘤细胞排列成丝带状由小叶周边向中心放射状分布;电镜下部分肿瘤细胞质内可见神经内分泌颗粒;免疫组化显示肿瘤细胞表达波形蛋白(vi mentin),部分表达NSE、Syn、CgA及S-100,CK和EMA可灶性表达于上皮样分化区。其粘液样基质奥新兰染色阳性,并抗透明质酸酶。由于该肿瘤生长缓慢,局部复发率高,使肿瘤细胞发生退变或间变,从而形成复杂的病理组织学图像,极易造成病理诊断错误,须与骨黏液样软骨肉瘤、脊索瘤及软组织多种黏液性肿瘤鉴别。由于该肿瘤有特异性的细胞遗传学改变,因此,目前主要研究方向为筛选出最为特异性的肿瘤融合基因作为病理诊断指标,并找出基因治疗的有效途径。

补肾活血方对膝骨关节炎大鼠关节软骨HIRA、ASF1a表达的影响

【目的】探讨补肾活血方对膝骨关节炎大鼠关节软骨衰老信号分子HIRA、ASF1a表达的影响。【方法】选用雌性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组和中药组;采用切除双侧卵巢并切断右侧膝交叉韧带法复制骨关节炎动物模型,术后第4周开始灌服补肾活血中药,模型组、假手术组灌服等量的生理盐水,分别于术后8、12、16周取材,采用骨关节炎软骨病理变化评价系统(OARSI)评价关节软骨的病变,运用western blot法检测HIRA、ASF1a表达水平。【结果】术后8、12、16周,模型组OARSI评分较假手术组显著升高,差异有显著性意义(P<0.01),中药组OARSI评分较模型组显著降低,差异有显著意义(P<0.05);HIRA、ASF1a在模型组中表达明显增强,补肾活血中药能下调HIRA、ASF1a的表达。【结论】补肾活血方可通过下调HIRA、ASF1a表达保护关节软骨。

成人脂肪来源干细胞定向诱导分化为软骨细胞的实验研究

【目的】诱导脂肪组织来源干细胞（ADSCs）定向分化为软骨细胞并进行鉴定，为软骨组织工程获取大量种子细胞做准备。【方法】对患者抽脂术的脂质部分进行分离培养及传代，采用四氮唑复合物（MTT）法测定细胞活性并描绘细胞增殖曲线，通过流式细胞仪将培养的细胞行干细胞鉴定，将第4代的ADSCs向软骨细胞定向诱导分化并行阿新蓝染色鉴定；免疫组化检测成软骨方向诱导后的ADSCsⅡ型胶原的表达。【结果】ADSCs体外增殖速度快，并且保持稳定的倍增率直至13—15代；流式细胞仪分析提示该细胞具有干细胞特性；通过定向分化技术，ADSCs可向软骨细胞分化，阿新蓝染色及Ⅱ型胶原表达均呈阳性，说明定向分化后的细胞具备正常软骨细胞的功能。【结论】成功诱导ADSCs向软骨细胞定向分化，为软骨组织工程提供了可靠的种子细胞。

Ⅱ型胶原在兔股骨头软骨炎中的变化及机制研究

目的:观察Perthes病模型股骨头骺软骨Ⅱ型胶原及血清抗体的变化,探讨Perthes病的发病机制。方法:选择经X线拍片证实双侧股骨头骺板完整无损且未闭合骨化的健康新西兰长耳白兔30只,雌雄各半,随机分为对照组(10只),实验组(20只)。分别于造模后4,6,8,10,12周行右侧髋关节屈曲位X线检查,随后取右侧股骨头用免疫组化法观察Ⅱ型胶原和收集血清检测Ⅱ型胶原抗体浓度。结果:实验组软骨内型胶原结构排列紊乱,数量明显减少,第6～12周实验组与对照组有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。Ⅱ型胶原血清抗体浓度测定发现在第6～12周时实验组与对照组之间均有极显著性差异(P<0.01)。结论:骨骺型胶原在Perthes病程中出现先增多后降低的变化过程;且型胶原刺激产生相应抗体发生特异性免疫反应,导致自身免疫攻击,参与Perthes病的发病过程。

髌骨软骨退变与全膝关节置换术后膝前痛关系的研究进展

随着科技的发展，外科技术的不断成熟，人工全膝关节置换术已成为治疗严重类风湿性关节炎和膝关节骨性关节炎的一种临床常用手术。该手术的主要目的是解决患者的关节疼痛，其次才是改善关节功能Ⅲ。但还是有很多患者术后出现关节疼痛，这已经成为患者对手术效果不满意的一个重要原因。