基于UPLC-Q-Orbitrap MS/MS技术研究膝痹宁对KOA模型大鼠的软骨保护效应

目的运用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱串联质谱(UPLC-Q-Orbitrap MS/MS)技术分析膝痹宁的药物活性成分,通过干预膝骨关节炎(KOA)模型大鼠代谢因素探讨膝痹宁软骨保护效应的作用机制。方法制备膝痹宁水提物,UPLC-Q-Orbitrap MS/MS技术分析膝痹宁的活性成分。将大鼠分为空白组、KOA组、膝痹宁组,提取大鼠软骨组织,HE染色、番红O-固绿染色观察组织结构形态;qPCR和Western blot法检测过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)、PPARγ辅助激活因子1α(PGC1α)及基质金属蛋白酶(MMP)3、MMP13的mRNA和蛋白表达水平;取各组大鼠血清完成代谢组学分析。结果经鉴定,膝痹宁含活性成分56种;组织学切片提示膝痹宁具有软骨保护作用,并能上调KOA大鼠软骨组织PPARγ、PGC1α的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01),降低MMP3、MMP13的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01);此外,代谢组学研究发现,膝痹宁对13种KOA差异代谢物存在干预作用,涉及10条代谢通路。结论膝痹宁具有多种药物活性成分,其KOA软骨保护效应与药物活性成分对KOA的代谢调控有关。

中药对照软骨保护剂改善膝骨关节炎功能活动的系统评价

[目的]系统评价中药对照软骨保护剂改善膝骨关节炎的功能活动及药物安全性。[方法]检索中国知识资源总库(Chinese National KnowledgeInfrastructure, CNKI)、维普期刊数据库(VIP Journal Database,VIP)、万方数据知识服务平台(Wan-fang Data Knowledge Service Platform,Wan-Fang)、中国生物医学文献数据库(China Biology Medicine, CBM)中有关中药与软骨保护剂的随机和半随机对照临床试验,检索时限至2018年6月30日。由2名研究者依据纳入排除标准独立筛选文献、提取数据、并行文献质量评价,运用RevMan5.3软件进行统计分析。[结果]共纳入9项研究,合计689例膝骨性关节炎患者。6项研究因较大异质性仅采用描述性分析,2项研究Meta分析结果显示口服中药汤剂膝关节功能活动评分与软骨保护剂比较有统计学差异[SMD=-0.33,95%CI(-0.62,-0.33), P<0.05]。[结论]口服中药汤剂在约3个月时对膝关节功能活动的改善优于软骨保护剂,但基于现有研究缺陷,结论尚需高质量的随机对照试验予以证实。

骨关节炎软骨保护治疗的中西医研究进展

通过文献整理,从组织形态学、细胞因子、软骨细胞凋亡等多方面概述了近些年来西药及中药在治疗骨关节炎方面的作用机制及研究进展。

探讨独活寄生汤对兔膝骨性关节炎软骨保护作用机制的研究

观察探讨独活寄生汤对兔膝骨性关节炎的软骨保护作用机制。方法:选择30 只膝骨性关节炎新西兰大耳兔为观察组,予以独活寄生汤处理;观另选择30 只健康新西兰大耳兔为对照组,予以生理盐水处理,对比两组的相关指标水平。结果:处理前观察组的Mankin’s 评分较对照组有显著升高(P<0.05),经治疗后观察组的Mankin’s 评分为(2.95±1.08)分,与对照组比较无明显差异(t=0.86,P>0.05);观察组的关节腔积液IL-1、TNF-α水平分别为(1.25±0.39)pg/L、(1.03±0.27)pg/L,均高于对照组水平,组间差异经统计学分析后意义显著(t=12.74,13.74;P<0.05)。结论:推断独活寄生汤对于兔膝骨性关节炎软骨保护的作用机制,主要是通过抑制IL-1、TNF-α等炎症因子释放实现,对于关节软骨退变有良好抑制作用。

游泳运动对老年膝骨关节炎小鼠软骨的保护效应

背景:游泳运动是膝骨关节炎重要的非药物治疗手段,可以有效缓解膝骨关节炎,但目前游泳运动对老年膝骨关节炎的影响和机制尚不明确。目的:探讨游泳运动对老年膝骨关节炎小鼠关节软骨的影响。方法:将6只3月龄雄性C57BL/6小鼠作为年轻组,将12只18月龄雄性C57BL/6小鼠随机分为老年组和游泳组,每组6只。游泳组小鼠进行1周的适应性游泳和8周的正式游泳运动。干预结束后,对各组小鼠进行步幅分析和取材。通过血常规检测外周血白细胞和淋巴细胞总数;苏木精-伊红染色和番红O-固绿染色法观察软骨形态;软骨细胞计数和改良Mankin’s评分评估关节软骨损伤程度;免疫组织化学染色和RT-qPCR法检测关节软骨中Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖和基质金属蛋白酶13的蛋白和mRNA表达。结果与结论:①与年轻组相比,老年组小鼠步幅明显下降(P<0.05),外周血白细胞和淋巴细胞计数均明显升高(P<0.05),关节软骨表面不平整、软骨细胞异常、蛋白多糖丢失,软骨细胞计数显著下降(P<0.05),改良Mankin’s评分明显升高(P<0.05),Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的蛋白和mRNA表达减少(P<0.05)、基质金属蛋白酶13的表达增加(P<0.05)。②与老年组相比,游泳组小鼠步幅明显上升(P<0.05),外周血的淋巴细胞计数明显下降(P<0.05),关节软骨表面较平整、软骨细胞较正常、蛋白多糖丢失较少,软骨细胞计数显著升高(P<0.05),改良Mankin’s评分明显下降(P<0.05),Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的蛋白和mRNA表达增加(P<0.05)、基质金属蛋白酶13的表达减少(P<0.05)。③结果说明,游泳运动可减少老年小鼠的血中炎性细胞,改善关节软骨细胞、基质成分及软骨组织形态,对老年膝骨关节炎小鼠软骨具有保护效应。

阿仑膦酸钠对骨关节炎关节软骨保护作用的研究进展

目的综述阿仑膦酸钠(alendronate,ALN)对骨关节炎(osteoarthritis,OA)关节软骨保护作用的研究进展。方法广泛查阅近年国内外相关文献,并进行综合分析。结果 ALN能改善OA关节软骨代谢微环境,抑制软骨下骨骨重塑,对关节软骨有潜在保护作用。结论 ALN有望成为一种OA疾病改善药物,但OA治疗尚缺乏统一的基础与临床评价标准,制定统一标准并获取临床数据对ALN的开发和应用有指导性意义。

骨髓间充质干细胞来源外泌体保护软骨细胞延缓骨关节炎的发生发展

背景:骨关节炎是最常见的关节退行性疾病,目前骨髓间充质干细胞已应用于骨关节炎治疗中,但与骨髓间充质干细胞相比,骨髓间充质干细胞来源外泌体移植具有更多优势,例如非免疫原性、非致瘤性以及储存和运输方便。目的:探索骨髓间充质干细胞来源外泌体对骨关节炎的保护作用。方法:①提取SD大鼠骨髓间充质干细胞并通过细胞形态及流式细胞学进行鉴定,利用超速离心法提取细胞上清液中的外泌体并通过透射电镜、粒径及western blot进行鉴定;②提取原代乳鼠肋软骨细胞,与荧光标记外泌体共培养12 h,观察软骨细胞吞噬情况。体外通过白细胞介素1β诱导软骨细胞损伤,加入含有50μg外泌体的PBS溶液100μL干预24 h,采用免疫荧光检测基质金属蛋白酶13及Ⅱ型胶原纤维α1蛋白表达,评估外泌体对于损伤软骨细胞的保护作用;③体内通过碘乙酸诱导大鼠骨关节炎模型,关节腔内注射外泌体,通过苏木精-伊红染色及番红-固绿染色观察骨关节炎关节结构变化,通过免疫组织化学染色检测基质金属蛋白酶13及Ⅱ型胶原纤维α1蛋白表达,评估外泌体对体内软骨损伤的保护作用。结果与结论:①原代骨髓间充质干细胞呈现典型的梭形,放射状排列,表达CD73和CD105而几乎不表达CD45、CD34和CD3;透射电镜显示外泌体呈现典型茶托样形态,粒径小于100 nm,ALIX及HRS蛋白呈阳性表达;②软骨细胞内可观察到典型的红染颗粒证实外泌体可以被软骨细胞摄取,同时外泌体可以促进软骨细胞Ⅱ型胶原纤维α1蛋白表达及抑制基质金属蛋白酶13表达,证实外泌体可以减弱白细胞介素1β对软骨细胞的损伤作用;③外泌体可以促进损伤关节软骨形态恢复及Ⅱ型胶原纤维α1表达,抑制基质金属蛋白酶13表达,同样证实外泌体可以缓解碘乙酸对骨关节软骨的破坏作用;④上述结果表明,骨髓间充质干细胞外泌体通过软骨保护机制延缓骨关节炎的发生与发展。

人参皂苷Rg1对IL-1β诱导的人膝软骨细胞降解保护作用机制研究

目的研究人参皂苷Rg1对IL-1β诱导的人膝软骨降解的保护作用及其分子机制。方法收集OA病人滑膜及软骨组织,培养成纤维滑膜细胞(FLS),采用IL-1β激发FLS细胞并与软骨骨片共培养,设空白对照组,IL-1β组(20ng/mL)为阳性对照组,不同浓度Rg1(0、5、50μmol/L)+IL-1β(20ng/mL)为实验组。用番红O染色观察软骨降解情况,qPCR分析MMPs相关基因表达情况,ELISA法检测上清液中MMP-3表达情况,Western blot分析Rg1对OA-FLS细胞中NF-κB通路中相关蛋白的调控。结果 Rg1可以显著抑制IL-1β诱导的软骨降解,发挥软骨保护作用。Rg1对软骨保护作用主要通过抑制成纤维滑膜细胞中MMPs表达,其中主要抑制MMP-3基因和蛋白表达,且该作用可能与Rg1调控NF-κB通路有关。结论人参皂苷Rg1可以抑制IL-1β诱导的软骨降解,发挥软骨保护作用,主要通过抑制FLS中MMP-3基因和蛋白表达。

治关节炎：没有所谓的“软骨保护剂”

骨性关节炎（即骨关节炎）是滑液关节的一种与增龄有关的全关节退变性疾病，是全身老化在关节的局部表现。目前，治疗骨性关节炎的手段包括非药物治疗、药物治疗以及手术治疗，而在治疗药物中，目前真正能够用于临床的药物只有止痛药物和糖胺聚糖类药物两大类。

软骨和软骨保护剂

骨关节病是老年人十分常见的关节退行性病变，病理上表现为关节软骨面进行性退变，软骨面的磨损、剥脱，裸露的软骨下骨表面硬化、囊腔形成。关节边缘骨增生、骨赘形成，若骨赘部分骨折或剥脱，陷入关节腔内就会形成关节内游离体。

秦七风湿方全方及不同极性部位对碘乙酸钠诱导的软骨细胞损伤的保护作用

目的比较秦七风湿方全方及其不同极性部位的指标性成分变化,以及各部位对碘乙酸钠(MIA)诱导的软骨细胞损伤的保护作用,初步明确秦七风湿方保护软骨的有效部位。方法秦七风湿方经水煎提取得水提液,水提液浓缩后经乙酸乙酯和水饱和正丁醇梯度洗脱,得到乙酸乙酯部位、水饱和正丁醇萃取物部位和水残留部位,以马钱苷酸、莫诺苷、龙胆苦苷、马钱苷、人参皂苷Ro、人参皂苷F1、竹节参皂苷Ⅳa和人参皂苷F2共8个成分作为对照,应用HPLC确定各萃取物中指标性成分的含量;通过MIA诱导人骨肉瘤细胞SW1353细胞构建软骨损伤模型,以MTT法检测秦七风湿方水提液及不同部位对MIA诱导的SW1353细胞活力降低和损伤的保护作用。结果指标性成分检测发现,水饱和正丁醇部位与秦七风湿方全方的各个指标性成分最接近,进一步通过对软骨细胞保护作用分析发现,0.5 mg/mL浓度下水饱正丁醇部位对MIA诱导的软骨损伤保护作用最为显著,可达68.06%。结论水饱和正丁醇部位可能是秦七风湿方治疗风湿性疾病的主要有效部位。

CP-25通过抑制GRK2活性改善小鼠骨关节炎的机制

目的研究芍药苷-6-氧-苯磺酸酯(CP-25)通过抑制GRK2活性对骨关节炎(osteoarthritis,OA)小鼠膝关节软骨的保护作用。方法内侧半月板失稳(destabilization of the medial meniscus,DMM)手术诱导构建小鼠骨关节炎模型,实验分为假手术组、模型组、CP-25给药组和帕罗西汀给药组。术后开始灌胃给药。给药12周处死动物,Micro-CT成像观察膝关节软骨退变、骨重塑异常等情况,番红固绿染色观察小鼠关节组织病理,免疫组化、免疫荧光检测软骨组织相关分子表达水平的影响。Western blot检测CP-25用药后软骨细胞的膜蛋白及总蛋白表达水平。结果模型小鼠关节软骨严重退变。CP-25可显著降低关节软骨骨赘数量及软骨下板厚度,促进软骨基质再生,减少软骨基质降解蛋白表达,对膝关节软骨有明显的保护作用。免疫组化和免疫荧光结果显示,CP-25治疗可显著降低膝关节组织中GRK2、ADAMTS5、MMP13的表达,并且升高膝关节组织中ColⅡ、Aggrecan表达。体外实验结果表明,CP-25给药可以显著降低GRK2的膜蛋白及总蛋白表达水平,升高EP4膜蛋白水平,降低MMP13水平。结论CP-25给药可显著促进OA小鼠关节软骨基质再生,减少软骨基质降解,对OA具有治疗作用,其机制与抑制GRK2介导的软骨基质代谢有关。

TRAF3抑制IL-17引起的软骨破坏作用

目的研究肿瘤坏死因子受体相关因子3(TRAF3)对白介素-17(IL-17)刺激的软骨细胞中丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)和核因子κB(NF-κB)信号通路及其下游产物表达的影响;观察TRAF3转基因小鼠IL-17刺激的关节软骨破坏情况,探讨TRAF3的软骨保护作用。方法 Western blotting检测正常软骨细胞和TRAF3基因过表达软骨细胞中IL-17刺激的MAPK和NF-κB信号通路的变化,Real-Time PCR检测正常软骨细胞和TRAF3基因过表达软骨细胞中IL-17刺激的下游炎症因子IL-6、基质金属蛋白酶-13(MMP13)、含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶-4(ADAMTS-4)和ADAMTS-5 mRNA的表达变化,组织化学技术观察注射IL-17野生型小鼠与TRAF3转基因小鼠关节软骨变化的差异。结果 TRAF3的过表达能显著抑制经IL-17刺激软骨细胞中MAPK和NF-κB信号通路,使下游炎症因子IL-6、MMP13、ADAMTS-4和ADAMTS-5 mRNA的表达显著下调;TRAF3转基因小鼠IL-17引起的关节软骨降解显著较野生型小鼠减轻。结论作为IL-17信号通路的负调控抑制剂,TRAF3可能成为抑制关节炎软骨破坏的新靶点。

调整细胞培养条件提高间充质干细胞外泌体治疗骨关节炎的潜能

背景:间充质干细胞外泌体有望发展成为治疗骨关节炎的无细胞疗法,而通过调整细胞培养条件,可以进一步提高其治疗活性和临床转化潜能。目的:综述分析细胞培养条件对外泌体活性的影响,分析其临床转化潜力。方法:查阅国内外有关骨关节炎/软骨损伤修复与间充质干细胞来源外泌体的文献。检索词分别为“外泌体,间充质干细胞,骨关节炎,软骨修复”和“exosomes,extracellular vesicles,mesenchymal stem cells,osteoarthritis,cartilage repair”,检索数据库分别为PubMed和中国知网数据库,检索时限为2010-2023年,最后纳入100篇文献进行总结和分析。结果与结论:(1)在间充质干细胞的培养过程中,提供有利于软骨细胞生长的物理环境,或添加软骨保护小分子、成软骨诱导因子和炎症因子等刺激细胞,可以进一步提高间充质干细胞外泌体在维持软骨细胞表型、促进软骨再生和免疫抑制等方面的调控活性;因此,其他具有相似特征的物理或化学因素,也有可能提升间充质干细胞外泌体治疗骨关节炎的疗效。(2)低氧诱导、脉冲电磁场刺激、生物反应器及软骨保护分子(如人甲状旁腺素1-34)刺激等细胞培养方案具有安全、可规模化生产等优点,可用于制备临床用途的、疗效好的间充质干细胞外泌体。(3)间充质干细胞外泌体有望实现骨关节炎的修正治疗,通过调整细胞培养方案提升治疗活性,可进一步提高其临床转化的可行性。

原儿茶酸可减轻退变软骨细胞的损伤

背景:已有研究表明多种抗氧化剂由于对炎性因子存在抑制作用而表现出抗关节炎作用,但是原儿茶酸虽具有抗氧化和抗炎作用,但其是否也对骨关节炎有治疗作用,尚无相关报道。目的:探讨原儿茶酸在体外对白细胞介素1β诱导炎症的软骨细胞的生物学包括表型和细胞代谢的影响,为骨关节炎疾病提供一种潜在的药物保护手段。方法:收集乳鼠股骨软骨细胞,以10 mg/L的白细胞介素1β干预建立退变模型,以10,30和50 mg/L原儿茶酸对细胞进行治疗。实验于2017年10月经广西医科大学动物实验伦理委员会批准,批准号201710008。结果与结论:10-50 mg/L原儿茶酸可促进软骨细胞的增殖,其中30 mg/L原儿茶酸对关节软骨细胞的保护作用最强,对退变的关节软骨细胞具有促进增殖的作用,同时原儿茶酸有效促进软骨细胞生长,细胞外基质的合成和聚集蛋白聚糖、Ⅱ型胶原和Sox9的mRNA表达,同时下调炎症相关基因基质金属蛋白酶13的表达。表明原儿茶酸可促进软骨细胞增殖和维持软骨细胞表型,为进一步研究其在体内进行骨关节炎治疗和关节软骨退变损伤修复提供依据。

Kartogenin在软骨再生修复中的应用及价值

背景:骨关节炎等软骨损伤性疾病所导致的软骨缺损,难以自我再生,如何促进软骨再生恢复创面的光滑是近年研究的热点。目的:综述Kartogenin的一般概念、作用机制和效果以及目前所应用的临床模型,为损伤软骨的再生和修复提供新的思路。方法:检索2010年1月至2020年1月万方、知网、Pub Med数据库收录的关于kartogenin与组织工程结合在软骨再生修复领域及研究进展的相关文献,包括综述、基础研究及临床研究。中文检索词为"Kartogenin,软骨再生修复,软骨保护,组织工程",英文检索词为"Kartogenin,cartilage regeneration,chondrogenesis,chondroprotection"。通过阅读文题和摘要进行初步筛选,排除与文章主题相关度低的文献,根据纳入标准和排除标准,最终纳入55篇文献进行结果分析。结果与结论:①Kartogenin作为一种新发现的小分子,具有更好的稳定性、免疫原性低和易于获得性;②此外,Kartogenin与生长因子在软骨再生中具有协同作用,在软骨形成和软骨保护方面具有极大的潜力;③通过体外实验或动物实验,已经证明Kartogenin在软骨生成、骨关节炎治疗、腱骨损伤修复、创伤愈合等方面具有积极的促进作用,并且有助于保护终板软骨及椎间盘的退变及肩袖损伤的愈合;④随着对Kartogenin更多的基础研究及临床试验,软骨再生修复会在不久的将来取得突破。

滋肾补骨法对左氧氟沙星致幼鼠软骨厚度损伤的修复作用

目的：探讨中医滋肾补骨理论对喹诺酮类药物所致幼年机体软骨损伤的保护作用。方法：将健康幼龄（4周龄）wistar大鼠72只随机分为正常对照组、模型对照组、怀牛膝组、山茱萸组、蛇床子组、怀牛膝＋山茱萸、怀牛膝＋蛇床子组、山茱萸＋蛇床子组、怀牛膝＋山茱萸＋蛇床子组9组。建立左氧氟沙星诱导幼龄大鼠软骨损伤模型,采用具有补肾功效的中药牛膝、山茱萸和蛇床子,按L8（27）正交设计灌胃给药,14 d后取膝关节软骨病理切片并测量软骨厚度。结果：正常对照组软骨厚度（190.13±12.43）μm,模型对照组（124.50±12.01）μm,中药治疗组软骨厚度（156.50~180.00）±（10.89~15.09）μm,各中药治疗组软骨厚度变薄程度明显轻于模型对照组,差别有统计学意义（P〈0.05）。光镜下,各中药及配伍组软骨厚度亦处于正常对照组与模型对照组之间。结论：滋肾补骨法对喹诺酮类药物所致幼年机体软骨损伤具有保护作用。

中老年人防治膝骨关节炎探析

膝骨关节炎对中老年人危害巨大,是一种慢性疾病,致使患者饱受病痛折磨,生活质量下降,给日常工作和生活带来巨大困扰,重者致残,由此作者倡导规范依从性治疗,本文从精准诊断,合理治疗,日常运动保健几个方面加以阐述,凭借主要症状,影像学,结合年龄、体型、工作性质、生活习性,膝关节有无劳累、负重、受伤史等得以确认,也分析为病因。机理为软骨退化、损伤。一般采取“分级治疗”,重点介绍药物治疗,提倡合理用药,开展用药指导,用药教育等药学服务,详解五类治疗药物。(1)糖皮质激素类短期用于创伤性关节炎急重期之风险/利益评价,个体化用药建议;(2)非甾体消炎镇痛药类,对症治疗药中药物分类,用法用量,禁忌症,药物选择,与降压药,降糖药间相互作用的分析,比对及减轻不良反应方法及生活习惯上的规劝等;(3)软骨保护剂类的推荐为基础药;(4)关节腔内药及其它骨伤药的介绍。日常运动保健的推荐,如太极拳等,旨在为此类慢病患者搭建一个良好的医患平台,更好地服务,受益于患者,条理清晰,具有指导和启示意义。

骨关节炎中药治疗研究进展

骨关节炎（Osteoarthrifis，OA）是一种以关节软骨的变性、破坏及骨质增生为特征的慢性关节病。本病在中年以后多发，发病率随年龄增长而增加，60岁以上人群中患病率高达50％，而在75岁以上人群中80％患有骨关节炎，且最终致残率为53％。对本病的治疗，西医采用非甾体抗炎药、软骨保护剂、抗氧化药物、局部关节腔内注射药物及外科手术等多种方式，但这些治疗方式副作用大、价格昂贵，且远期疗效不肯定，而中药治疗可标本兼顾，整体局部并治。现就中药治疗骨关节炎研究现状综述如下。