鹿茸的软骨内骨化及其调控机理的研究进展

对鹿茸软骨内骨化过程的组织学基础及调控机理进行了综述。鹿茸的骨化是在睾酮等一系列因素的影响下发生的软骨内骨化过程。这种骨化方式由膜内骨化转变而来,标志是角柄顶端软骨膜下出现连续的骨小梁。在整个生茸期内,软骨膜持续存在,通过附加增生来实现鹿茸的生长。发育到一定程度的肥大软骨细胞向细胞间质中分泌X型胶原纤维等,引起间质的钙化,进而骨组织替换软骨组织。

表皮生长因子受体对小鼠初级软骨内骨化、破骨细胞的募集及生成的影响

目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)信号转导在软骨内骨化中的作用。方法:以EGFR敲除鼠(EGFR-/-)、EGFR正常野生鼠(EGFR+/+)和(或)杂合子鼠(EGFR+/-)为实验动物模型,通过马森三色染色(Trichrome Masson)、原位杂交及抗九石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察各组小鼠四肢长骨软骨内骨化及破骨细胞募集情况的变化;体外分离培养破骨细胞,加入EGFR酪氨酸激酶的抑制因子AG1478,通过对破骨细胞生成实验的观察,明确EGFR信号转导在破骨细胞中的作用。结果:EGFR+/+鼠与EGFR+/-鼠有相同的表型,因此在实验中将它们皆看做EGFR+/+鼠。形态学观察EGFR-/-鼠肥大细胞区域较EGFR+/+鼠增大,其区域大小约为EGFR+/+鼠的5倍;EGFR-/-鼠破骨细胞向中心生长板的募集速度较EGFR+/+鼠亦明显延迟;在胚胎16.5 d(E16.5)dEGFR-/-和EGFR+/+鼠金属蛋白酶-9(MMP-9)分布上有一定差别,但单个破骨细胞上MMP-9的表达数量二者无明显差别;加入EGFR抑制因子AG1478的实验组与加入DMSO的对照组比较,破骨细胞的形成明显减少(P<0.01)。结论:EGFR信号转导机制可能通过调节破骨细胞的生成,影响其向中心生长板的募集,从而影响小鼠初级软骨内骨化的进展。

斑马鱼软骨内骨化过程中骨骼的转录组测序分析

为研究斑马鱼(Danio rerio)骨骼发育时期关键调控基因及复杂的调控网络,采用阿尔辛蓝-茜素红双重染色方法对受精后50 d(day post fertilization,dpf)和65 dpf野生型斑马鱼骨骼进行染色,提取50 dpf和65 dpf斑马鱼骨骼的总RNA进行转录组测序,对差异表达基因进行筛选并进行GO功能注释和KEGG富集分析。结果表明:50 dpf斑马鱼头骨正在经历软骨内骨化,而65 dpf斑马鱼软骨内骨化过程基本完成;对50 dpf与65 dpf斑马鱼骨骼进行转录组测序,共产生41.44×109个有效数据,存在610个差异表达基因,相比50 dpf斑马鱼,65 dpf斑马鱼骨骼中软骨发育相关基因(dlx2a、foxd3和sec23b)、骨矿化调节基因(ptk2bb)、骨骼细胞分化正调控基因(dlx2a)均下调,表明其骨骼发育已较为成熟,骨细胞分化过程减少,与阿尔辛蓝-茜素红双重染色结果相一致;进一步对这些差异表达基因进行GO功能注释和KEGG富集分析,发现大部分差异表达基因与代谢网络、生殖信号通路相关;随机选取了6个差异表达基因进行实时荧光定量qRT-PCR验证,发现这些基因表达趋势与测序结果一致,这表明转录组测序结果真实可信。研究表明,鱼类与哺乳动物一样,其代谢、骨骼和生殖功能三者间存在密切联系,其内在机制为研究斑马鱼骨骼发育与疾病治疗提供了一个新的思路。

形态原在软骨内骨化中的作用

软骨内骨化发生于肢体芽及生长板的形态形成中,也发生于骨折后的骨痂形成中。骨形态形成蛋白(BMPs)及维甲酸(RA)是涉及在肢体发育中的两类可扩散的形态原样分子(morphogen-like molecules)。它们是模型形成的有力调节者,也涉及组织的增殖与分化。骨折过程中有软骨内骨化,这提示形态原样分子在骨折中也有作用。本文复习有关骨形成中的形态原样分子的文献,并探讨它们在骨折愈合中的作用。

骨关节炎软骨内骨化病理研究进展

目的综述骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨内骨化的病理表现和机制研究进展。方法查阅有关OA软骨内骨化、骨-软骨重塑及关节发育的相关文献,并进行分析总结。结果软骨细胞的肥大、凋亡,血管的侵入,潮线的复制,软骨钙化层不断增厚和软骨表层的相对变薄是OA软骨退变的重要特征。关节软骨与生长板在结构上类似,OA的软骨退变是一种类似于生长板的软骨内骨化过程。结论关节软骨失去稳定表征,从静息代谢平衡状态转为临时软骨的高转换状态,继而发生软骨不断钙化和钙化软骨不断骨化重塑,可能是导致OA发生发展的中心环节。

固骼生对体外培养鼠鼻中隔软骨细胞增殖及骨化的初步研究

目的探讨固骼生(45S5)对体外培养鼠鼻中隔软骨细胞增殖及向成骨细胞分化的促进作用。方法利用体外细胞培养技术建立孕21 d SD大鼠鼻中隔软骨细胞培养体系,根据培养基的不同分为实验组(培养基中放入45S51mg/ml)和空白对照组。在倒置相差显微镜下观察细胞生长状态;采用MTT染色法检测软骨细胞增殖变化;第8、12、15、18d取材分光比色检测碱性磷酸酶(ALP);第13d透射电镜下观察45S5周围软骨细胞基质的钙化等成骨指标变化。结果实验组软骨细胞增殖明显高于对照组;第12、15d ALP的分泌明显高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05);第13d透射电镜下可观察测45S5周围软骨细胞基质的钙化结节致密电子层。结论45S5可促进体外培养鼠鼻中隔软骨细胞增殖及向成骨细胞分化。

45S5对体外培养的鼠鼻中隔软骨细胞骨化基因表达的影响

目的探讨45S5对体外培养的鼠鼻中隔软骨细胞成骨分化的目的基因活化诱导作用。方法利用体外细胞培养技术建立孕21 d SD大鼠鼻中隔软骨细胞培养体系,根据培养基的不同分为实验组(培养基中放入45S5 1 mg/mL)和空白对照组。第2代软骨细胞培养至5、9、15、20 d取材,RT-PCR检测Run X2和CollagenX的mRNA的表达;8、12、15、18 d取材分光比色检测碱性磷酸酶(ALP)。结果45S5诱导培养下第9天的Run X2及第20天的type X collagen mRNA的表达明显增强,第10、15天ALP的分泌明显高于对照组(P<0.05)。结论45S5可促进体外培养的鼠鼻中隔软骨细胞增值及向成骨细胞分化。

兔下颌持续前导后髁突软骨中核心结合因子α1的表达及意义

目的:探讨兔下颌持续功能前导后髁突软骨中核心结合因子α1(corebindingfactorα1,Cbfα1)蛋白的表达及与髁突改建的关系。方法:60只8周龄日本大耳白兔,随机分为实验组和对照组,实验组动物每天24h戴用咬合前导矫正器。实验组与对照组动物分别在3天、1周、2周、4周、8周及12周时处死并取材,用免疫组化方法检测髁突组织内Cbfα1的分布和表达变化,并对其表达进行灰度测定,采用t检验和单因素方差分析对灰度值进行统计学分析。结果:Cbfα1主要在髁突软骨过渡层和肥大层软骨细胞的胞核和胞质中表达,钙化层的软骨细胞和成骨细胞中也可见Cbfα1的表达。实验组兔髁突软骨各层Cbfα1的表达强度均显著高于同期对照组(P<0.05),其中治疗后4周过渡层、肥大层和钙化层的表达均最为明显,分别是71.00±1.52,50.00±0.75和82.00±0.39。结论:下颌持续前导后,Cbfα1的动态变化与下颌髁突适应性生长改建关系密切。

P-15肽促进间充质干细胞向软骨细胞分化的实验研究

目的本研究探讨P-15肽能否有效激活、促进软骨细胞向增殖分化。方法在不同的培养基培养鼠间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),培养细胞采用阿辛蓝染色和碱性磷酸酶染色,并行碱性磷酸酶定量;免疫组织化学及蛋白免疫印迹检测软骨形成特异性标记。结果 (1)与对照组相比,P-15肽组呈现大量的碱性磷酸酶阳性细胞,蛋白聚糖的合成明显增加;(2)免疫组织化学检测提示P-15肽组collagen X(COLX)、Runt-related transcription factor 2(RUNX2)、matrix metallopeptidase 13(MMP13)明显高于对照组;(3)蛋白免疫印迹检测提示P-15肽组在RUNX2、MMP-13、Vascular endothelial growth factor(VEGF)、COLX几个因子表达明显升高(P<0.05)。结论 P-15肽能有效激活、促进间充质干细胞增殖和向软骨细胞分化。

P-15肽促进间充质干细胞向软骨细胞分化的分子机制及体内成骨作用研究

目的通过细胞实验研究发现P-15肽能有效激活、促进间充质干细胞增殖和向软骨细胞分化,但是否在体内仍有类似作用尚不明确。因此,本研究旨在探讨P-15肽可能如何激活、促进干细胞向软骨细胞增殖分化,同时在体内功能状态。方法培养鼠间充质干细胞在含有和不含有P-15肽的培养基中,培养6小时后,两组细胞均用α5整合素抗体和pFAK抗体染色,进行免疫荧光染色,同时进行蛋白免疫印迹分析;在维斯塔小白鼠腹部皮下注射250μl含有P-15+rhBMP-2或单纯rhBMP-2的基质胶建立小鼠皮下异位骨化模型,术后12天处死小鼠,分离取下腹部基质胶行Micro CT及组织学检查。结果 (1)与对照组相比,P-15肽培养组pFAK和α5整联蛋白的表达较对照组均有显著性增高(P<0.05);(2)Micro CT扫描、组织切片染色及免疫组织化学均提示P-15肽组基质胶周边软骨沉积,发现肥大软骨细胞沉积在外围区域。结论 (1)P-15肽可能通过激活pFAK通路并上调α5整联蛋白的表达促进MSCs向软骨细胞分化;(2)P-15肽能促进局部组织软骨沉积,进而出现组织骨化。

黄韧带骨化症的组织病理学与诊治

黄韧带骨化症为多见于亚洲地区的老年性疾病,发病率随年龄增长而增高。黄韧带骨化可发生于脊柱各部位,胸椎和胸腰椎多见,尤其是下胸椎,常并发其他脊柱韧带骨化。本文综述了黄韧带骨化症的组织病理学、影像学表现和手术治疗方面的进展。

羊软骨症疾病的诊断治疗

软骨病也叫佝偻病，在医学上的全称为维生素D缺乏性佝偻病，是一种生长较快的幼羔羊维生素D缺乏及钙、磷代谢障碍所致和成年反刍兽软骨内骨化完成后，由于饲料中磷缺乏或钙、磷比例不当，导致骨质的进行性脱钙，呈现骨质疏松并形成过剩的未钙化骨基质的关节软骨和骺软骨内骨化障碍的非炎性疾病。本病主要发病时间多在冬季或早春，草料单一是诱发疾病的主要因素之一。

颈椎后纵韧带骨化：钙化及骨化灶表面组织病理学发现

本文作者对颈椎骨化的后纵韧带，特别是钙化及骨化灶表面，进行了组织学及免疫组织化学研究。作者对31例患者整个后纵韧带骨化灶标本进行一系列检测，包括HE染色，Ⅰ、Ⅱ型胶原、血管内皮生长因子（VEGF）、转移生长因子-β（TGF—β）、骨形态发生蛋白-2（BMP-2）免疫组化，及TUNEL法检测细胞凋亡。结果在韧带表面与韧带深层间软骨内骨化较明显，

软骨发育不全所致的椎管狭窄

在软骨发育不全的病人中椎管狭窄很常见,它继发于软骨内骨化异常及骨组织变性,前者对于椎体结构的形成至关重要。颈椎管狭窄更常见(绝大多数涉及第一颈椎及颅脊柱关节)。

科学合理饲喂 严防猪软骨病

猪软骨病是因为钙磷缺乏或钙磷比例失调，而发生于软骨内骨化作用已经完成的成年动物的一种骨营养不良病。日粮磷含量绝对或相对缺乏是发生软骨病的主要原因：钙磷比例不当也是软骨病的病因之一，当磷不足时，高钙H粮可加重缺磷性软骨病的发生：维生素D缺乏可促进软骨病的发生。

髓内针固定小鼠闭合性股骨骨折模型的建立

目的建立髓内针固定小鼠闭合性股骨骨折模型。方法解剖20例C57BL/6小鼠股骨,了解小鼠股骨形态结构特点。12～16周龄的C57BL/6小鼠50只,采用髓内针手术技术,在股骨髓腔内插入直径0.2mm导针后,通过制作的骨折造模架,造成闭合性股骨中段骨折,经导针插入26G(直径0.45mm)不锈钢针,通过X线及番红O-固绿染色观察骨折愈合过程。结果术后通过X线证实横行骨折32例,短斜行骨折16例,粉碎性骨折2例,X线及组织学检查表明,其骨折愈合过程为典型的软骨内骨化,建模成功率为96%,可重复性高。结论髓内针手术技术建立的小鼠闭合性股骨骨折模型,方法安全、快捷、简单;其骨折愈合为典型的软骨内骨化,可重复性高,能较好地用于骨折愈合和骨代谢的分子机制研究。

足舟状骨缺血性坏死

足舟状骨缺血性坏死在临床上较少见。在儿童又称Kohler病．在成年人出现则被命名为Müller-Weiss病。常常是由于创伤、发育障碍或其他疾病等原因破坏营养舟状骨的血运，导致软骨内骨化（软骨形成与成骨作用）异常或骨细胞死亡而出现。由于该病发病率低．且与发育障碍或其他疾病难以鉴别．故在临床诊断治疗中易产生混淆。

交锁髓内钉固定股骨干骨折术后骨不连原因分析

目的探讨股骨干骨折应用交锁髓内钉固定术骨不连的原因,并提出防治措施。方法对南昌大学第三附属医院2009～2010年34例采用交锁髓内钉治疗股骨干骨折患者进行回顾性分析,其中对6例骨延迟愈合及3例骨不连者采取骨折端动力化,对1例骨不连者行取钉、更换内固定并植骨。结果骨延迟愈合6例骨延迟愈合及4例骨不连者,经过上述治疗,随访10个月以上,骨折愈合良好。结论静力交锁髓内钉固定的股骨骨折愈合主要通过膜内骨化,术中应避免损伤骨膜,适时采取骨折端动力化,促进软骨内骨化,减少术后骨不连。

小鼠胫骨骨折愈合中FGFR3基因表达的原位定位

目的 观察成纤维细胞生长因子受体3 (FGFR3 )基因在小鼠胫骨骨折愈合中的时空表达模式,分析FGFR3在骨折愈合中可能的作用。方法 选用标准的小鼠胫骨骨折模型,常规石蜡切片,观察FGFR3mRNA在骨折愈合过程中不同时期的基因表达情况。结果 骨折后软骨痂中前软骨细胞中出现微弱的FGFR3mRNA信号。至7d ,骨痂肥大前软骨细胞和肥大软骨细胞中均可见FGFR3mRNA强阳性表达。到14d和2 8d ,骨痂软骨细胞被成骨细胞取代,FGFR3阳性表达信号消失。结论 FGFR3在小鼠胫骨骨折愈合中的肥大前软骨细胞和肥大软骨细胞中表达,提示参与调节胚胎骨骼发育中软骨细胞增殖的FGFR3基因,可能在成年骨折愈合中参与调节了软骨细胞的分化而影响骨折愈合。