三维培养诱导人脂肪间充质干细胞微球的成软骨分化能力

背景:关节软骨损伤后修复结果不满意,需要新的手段,而脂肪间充质干细胞较适宜做种子细胞诱导软骨,然而怎么能够使诱导的软骨具有功能需要研究。目的:采用三维培养体系诱导人脂肪间充质干细胞微球向软骨分化。方法:无菌切取吸脂术后脂肪组织,分离培养人脂肪间充质干细胞,传至第3代进行流式细胞术分析,成骨成脂肪诱导等鉴定,同时也给予合适的培养条件用三维培养的方式向软骨细胞诱导,并行阿利辛蓝染色鉴定糖胺多糖的合成,苏木精-伊红染色进行组织学分析,免疫荧光检测Ⅱ型胶原表达,称质量测量软骨硬度。结果与结论:分离的人脂肪间充质干细胞CD105,CD44,CD29均高表达,而CD45,CD34低表达,并且成骨成脂诱导后细胞茜素红染色和油红O染色均为阳性。三维培养法诱导的软骨细胞可表达大量糖胺多糖及Ⅱ型胶原。结果证实,三维培养法诱导人脂肪间充质细胞向软骨分化后,具有软骨细胞的特性。

3D软骨细胞微球行冷冻切片及染色的方法介绍

3D软骨细胞微球采用三维培养间充质干细胞诱导软骨细胞成球,是组织工程研究的常用技术手段[1]。由于培养周期较长,需借助病理技术手段监测球体细胞生长情况。通常软骨细胞微球直径<1 mm,行石蜡包埋的样本虽便于保存,但细胞球易出现皱缩、形态改变、样本丢失。本科室采用前固定样本行冷冻切片并染色观察软骨细胞微球状态取得良好效果,现报道如下。