伏立诺他调控组蛋白去乙酰化酶-2促进软骨炎症修复的研究

目的探讨伏立诺他作为组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂应用于促进软骨炎症修复作用及其机制。方法首先进行大鼠体内实验, 设置为对照组和退变组, 造模成功后进行软骨取材, 取大鼠软骨, 进行切片行免疫组织化学HDAC-2染色, 继而提取cDNA和蛋白质分别进行HDAC-2的基因、蛋白检测。然后于体外实验部分, 体外分离培养大鼠软骨细胞, 设置为对照组、白细胞介素-1组、白细胞介素-1+伏立诺他组, 通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测HDAC-2、Ⅱ型胶原(Col2a1)、蛋白多糖(Acan)的基因表达, 使用蛋白质印迹法(Western blot)检测乙酰化及总H3组蛋白表达, 使用免疫荧光法标记HDAC-2蛋白。确定伏立诺他的效应后, 最终使用大鼠退变模型, 设置为退变组和退变+伏立诺他组, 于注射7 d后进行取材, 并做番红O染色及阿利新蓝染色。两组间比较行t检验。结果退变组大鼠软骨的HDAC-2免疫组化蛋白分布高于对照组, 其基因转录活性显著升高(0.96±0.05比1.34±0.12, t=5.83, P<0.01)。体外实验部分, 白细胞介素-1诱导HDAC-2的基因表达显著升高(0.87±0.11比1.88±0.64, t=3.12, P<0.05)且免疫荧光强度增加。伏立诺他处理后, 软骨细胞的H3组蛋白乙酰化比例升高(对照组0.41±0.17比伏立诺他组1.09±0.12, t=5.63, P<0.01)。白细胞介素-1可抑制软骨细胞的Col2a1及Acan转录活性(4.86±0.64比2.28±0.49, t=5.53, P<0.01;2.72±0.75比1.29±0.31, t=3.06, P<0.05), 而加入伏立诺他后, 软骨细胞的Col2a1及Acan转录活性恢复(2.28±0.49比4.05±0.72, t=3.53, P<0.05;1.29±0.31比2.58±0.58, t=3.38, P<0.05)。后续体内实验设置退变组及退变+伏立诺他组, 可见退变+伏立诺他组软骨的缺损、平整度、胶原纤维分布均优于退变组。结论伏立诺他抑制HDAC-2活性, 调控组蛋白去乙酰化, 提高Ⅱ型胶原及蛋白多糖表达, 促进骨炎症损伤修复。

基于HMGB1/NF-κB通路探讨温经通络汤对IL-1β诱导小鼠原代软骨细胞炎症的影响

目的 观察温经通络汤对IL-1β诱导关节软骨细胞炎症的影响并探讨其作用机制。方法 从小鼠膝关节软骨中提取原代软骨细胞,并用甲苯胺蓝染色法鉴定;IL-1β诱导软骨细胞炎症模型,采用慢病毒RNAi-HMGB1转染软骨细胞,干扰HMGB1的表达;后用不同浓度的温经通络汤含药血清干预细胞;Western blot分析各组细胞中HMGB1、NF-κB信号通路蛋白的表达水平;qPCR检测HMGB1、NF-κB1、NF-κB2 mRNA的表达水平;ELISA检测细胞上清中炎症因子IL-6、PGE-2和TNF-α的表达水平。结果 与正常培养的细胞相比,IL-1β诱导软骨细胞炎症模型中HMGB1的表达水平显著上升(P<0.01),且p-IκBα/IκBα和p-P65/P65蛋白的相对表达量与NF-κB1、NF-κB2 mRNA的表达水平均有所提高(P<0.01);与模型组比较,RNAi-HMGB1慢病毒转染可显著下调HMGB1的表达水平(P<0.01),并抑制p-IκBα/IκBα和p-P65/P65蛋白的相对表达量(P<0.01)与NF-κB1、NF-κB2 mRNA的表达水平(P<0.05);与模型组相比,不同浓度的温经通络汤含药血清均表现出对HMGB1和NF-κB信号通路的抑制效应,表现为HMGB1与p-IκBα/IκBα和p-P65/P65的蛋白表达水平下降(P<0.05)。结论 温经通络汤能够改善IL-1β诱导软骨细胞炎症,其作用机制可能与抑制HMGB1介导NF-κB信号通路的活化相关。

膝骨关节炎软骨下炎症面积与关节液中白细胞介素-1含量的相关性研究

目的:探讨膝骨关节炎软骨下炎症面积与关节液中白细胞介素-1含量的相关性。方法:2014年6—12月,对30例膝骨关节炎患者行患肢膝关节矢状面超短回波时间(ultrashort echo time,UTE)脉冲序列MRI检查,测量膝关节软骨下炎症面积,并对其与关节液中白细胞介素-1含量的相关性进行分析。结果:本组30例,患肢膝关节MRI检查UTE序列上均可见软骨下高信号区,其中髌骨软骨下高信号区16例,股骨软骨下高信号区8例,胫骨软骨下高信号区6例。软骨下炎症面积(140.61±61.65)mm2,关节液中白细胞介素-1含量(0.170±0.102)pg·mL-1,两者呈正相关(r=0.472,P=0.008)。结论:膝骨关节炎患者膝关节软骨下炎症面积和关节液中白细胞介素-1含量呈正相关;膝关节软骨下炎症面积越大,关节液中白细胞介素-1含量越高。

骨关节炎软骨退变与炎症的关系

骨关节炎主要的病理改变是软骨退变,软骨退变与炎症关系密切,炎症可以促进软骨的退变,而软骨退变又能刺激炎症的发展。炎症主要是通过细胞因子破坏软骨细胞和细胞外基质,目前发现,细胞因子可以通过介导多条信号通路参与软骨退变的病理过程,其主要有MAPK信号通路、核转录因子信号通路、Wnt/β-catenin信号通路等。文章就炎症细胞因子在软骨细胞和细胞外基质中的作用机制探讨骨关节炎软骨退变与炎症的关系。