不同损伤时间对骺板软骨生长的影响

用机械的方法对40只幼年家兔右前肢远端反复挤压撞击,观察不同损伤时间(2、4、6、8、12周)对骺板软骨生长的影响。结果表明,短时间损伤(2～4周)生长加速,长时问损伤(6周以后)生长减慢甚至停止。不同的损伤时问可以引起骺板发生不同形状的裂隙或镜下骨折,其发生与损伤的外力和持续时间有关。损伤时间越长,对骺板软骨的生长越明显。

促进关节软骨生长的方法

普遍认为关节软骨的再生能力有限，故临床一般采用手术或激光来治疗软骨损伤，或使用关节镜对膝关节软骨软化处的粗糙面进行精细的手术削平，以达到治疗目的。由此得出结论，软骨损伤可手术治疗。但这种做法与实验结果相矛盾，且手术的长期疗效不肯定。截止到目前有关关节...

软骨生长板的调控系统研究进展

软骨生长板是骨纵向生长的主要分化区,在骨生长过程中,有多种调节因子通过不同的机制对其分化、生长进行调节。其中,系统调节因子包括生长激素、胰岛素样生长因子、甲状腺素、性激素、糖皮质激素等,局部调节因子包括印第安刺猬蛋白(Ihh,Indian hedgehog)及甲状旁腺素相关肽、骨形成发生蛋白、成纤维细胞生长因子、血管内皮生长因子等,其对于软骨生长板调控机制各不相同。本文对系统和局部调节因子相关研究进展进行综述。

中药对体外培养软骨生长作用的研究进展

软骨包括透明软骨、弹性软骨、纤维软骨三种。在骨科临床及实验研究中经常作为研究对象的关节软骨属于透明软骨．其具有耐摩擦、传导关节负荷、吸收震动和润滑关节的作用,也是三类软骨中最易发生退变的关节。随着社会的发展，年龄、肥胖、机械创伤等原因造成的关节软骨退变、缺损或变性坏死在临床上很常见，软骨缺损后自身修复能力很差。

下颌髁突软骨生长改建基因调控的研究进展

下颌髁突软骨是一种继发性软骨,它的生长改建方式有别于长骨软骨、肋骨软骨等原发性软骨。作为口颌系统的重要组成部分之一,下颌髁突软骨对口腔颌面部的生长发育、功能发挥及美观均有关键作用。随着近年来软骨组织工程学的发展及对颞下颌关节疾病的多方面研究,从基因水平、分子水平探讨下颌髁突软骨生长改建影响因子的研究越来越全面、深入。其中,基因水平对髁突软骨的影响备受研究者的关注,它可能是引发颌面部发育畸形、关节功能障碍的关键因素之一。因此,髁突软骨的生理、病理变化与基因调控相结合将是今后正畸矫形及组织工程软骨的重要研究方向。

黄芪注射液对培养中鸡胚软骨生长的促进作用

通过鸡胚软骨培养的方法,研究了膜荚黄芪[Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.]及其变种蒙古黄芪[A.membranaceus Bge.var.mongho（?）cus（Bge.）Hsiao]两种注射液对鸡胚软骨生长的促进作用。结果表明,用药组鸡胚股骨的长度、干重、氨基己糖的含量以及35S的掺入强度均较对照组明显增加,分别为对照组的112±4（110±3）%、114±6（111±4）%、114±4（113±4）%以及132±7（131±8）%（括号内为蒙古黄芪数据）,p<0.01。

参与生长板软骨生长和发育信号通路的研究进展

生长板是一种动态的高度分化的软骨结构,在软骨内骨化和骨的形成中发挥着极其重要的作用。目前已发现多种信号通路参与调控生长板软骨的生长和发育,如转化生长因子β(TGF-β)/骨形态发生蛋白(BMP)信号通路、WNT/β连环蛋白(β-catenin)信号通路、成纤维细胞生长因子(FGF)信号通路、刺猬因子(HH)信号通路、Notch信号通路、甲状旁腺激素相关蛋白信号通路、视黄酸信号通路、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路和胰岛素样生长因子(IGF)信号通路等。现结合近几年国内外最新研究进展,回顾生长板软骨生长发育中涉及的关键信号通路以及信号通路转导过程中涉及的信号分子,阐述信号通路转导异常导致相关的软骨疾病发生的分子机制,旨在为临床生长板软骨遗传性疾病的诊断和治疗提供理论依据。

5种淫羊藿对软骨组织生长和软骨细胞增殖影响的对比研究

目的：对比研究心叶淫羊藿、箭叶淫羊藿、朝鲜淫羊藿、巫山淫羊藿和川西淫羊藿对软骨生长和软骨细胞增殖活性的影响。方法：以鸡胚股骨组织为研究对象,采用配对试验设计,把同一鸡胚的两个股骨组织分别分入对照组或实验组,每组共10个股骨组织。对照组股骨组织在不含中药的培养液中培养,实验组股骨组织在含3%淫羊藿提取物的培养液中培养。以软骨长度、软骨重量、软骨细胞增殖(MTT法)为指标观察5个品种淫羊藿的软骨生物活性。结果：心叶淫羊藿和箭叶淫羊藿实验组的股骨长度、股骨湿重、股骨干重及细胞增殖量指标均高于对照组(P＜0．01),而朝鲜淫羊藿、巫山淫羊藿和川西淫羊藿实验组的股骨长度、股骨湿重、股骨干重及细胞增殖指标与对照组结果相近,差异无显著性。结论：心叶淫羊藿和箭叶淫羊藿具有明确的促进体外软骨生长和软骨细胞增殖的作用,而朝鲜淫羊藿、巫山淫羊藿和川西淫羊藿品种没有表现出这种生物活性。

淫羊藿提取物对体外软骨器官生长的促进作用

背景:结合课题组前期的研究工作,考虑到中药中含有的多种软骨活性成分可能会对软骨细胞起到多靶点调节的作用,尝试用中药代替细胞因子,以促进软骨生长。目的:观察中药淫羊藿提取物对软骨生长和软骨细胞增殖活性的影响。设计、时间及地点:以组织为观察对象的随机配对实验,于2003-04/2007-12在河南省正骨研究院完成。材料:心叶淫羊藿Epimedium.brevicornum药材由河南省洛阳市医药公司提供;罗曼鸡胚由河南省洛阳市峪口禽业有限公司提供。方法:采用体外转管培养技术培养鸡胚股骨,实验分为2组,对照组:在培养管加入含RPMIMedium1640和体积分数为10%胎牛血清的培养液;实验组:在培养管加入含淫羊藿提取物的培养液。实验组培养液中加入不同质量浓度(0.02,0.05,0.10,0.50,1.00,5.00,10.00,20.00mg/L)的淫羊藿,观察软骨生长情况;选上述实验中的最适宜生长质量浓度1.00mg/L及质量在(4.0±0.1)mg的标本,相同培养条件下培养20d,称量每个取样时间点的样本质量;用1.00mg/L最适宜生长质量浓度按上述培养条件培养7d,进行股骨生长长度、质量测定,同时四甲基偶氮唑盐检测细胞增殖。主要观察指标:①不同质量浓度淫羊藿提取物对软骨器官生长质量的影响。②1.00mg/L淫羊藿提取物不同培养时间对鸡胚股骨生长的影响。③1.00mg/L淫羊藿提取物培养7d对鸡胚股骨生长和细胞增殖的影响。结果:①在0.02～20.00mg/L质量浓度范围内,实验组股骨标本质量均高于对照组,但仅0.05～10.00mg/L质量浓度区间内两组差异有显著性意义(P<0.05～0.01),表明淫羊藿提取物在此质量浓度范围内能够表现出明确的促进股骨生长的生物学效应。②两组的股骨质量在1.00mg/L淫羊藿提取物培养20d内均表现平稳的生长趋势,实验组股骨质量从第2天起即高于对照组(P<0.05)。③1.00mg/L质量浓度培养7d后,实验组的股骨长度、股骨湿质量、股骨干质量及细胞增殖量均高于对照组(P<0.05～0.01)。结论:淫羊藿提取物能够在体外促进软骨器官生长和细胞增殖。

软骨生长因子对兔软骨细胞作用的实验研究

目的 探讨软骨生长因子 (CDGF)对体外培养兔软骨细胞的作用 ,研究了CDGF、胰岛素样生长因子 Ⅰ (IGF Ⅰ )及软骨细胞生长代谢三者之间的关系。 方法 体外单层培养兔软骨细胞 ,取生长良好的第二代细胞实验 ,分别或共同加入不同浓度CDGF和IGF Ⅰ ,利用氯胺T法和MTT法分别观察比较细胞培养液中羟脯氨酸与能量的合成及细胞的增殖情况。 结果 CDGF与IGF Ⅰ均能剂量依赖性的促进细胞外基质中羟脯氨酸的合成以及细胞的增殖与能量合成 ;对两种作用的最佳刺激浓度 ,CDGF分别为 16ng/ml和 32ng/ml,IGF Ⅰ为 30ng/ml;二者联合应用能明显增强对软骨细胞的作用。 结论 CDGF可以刺激软骨细胞的增殖与胶原合成 ,并与IGF

葡萄籽提取物抑制大鼠生长板软骨细胞凋亡及促进胫骨的生长

背景:已有文献报道,葡萄籽提取物在抑制雄激素依赖型肿瘤的生长(如乳腺癌等)方面具有一定的作用,因此理论上葡萄籽提取物可以抑制青少年后期由于雌激素产生的骨骺闭合现象。目的:观察葡萄籽提取物对大鼠生长板软骨细胞凋亡及骨骺闭合的影响。方法:①体外实验:取对数生长期的大鼠胫骨及股骨生长板软骨细胞,分组培养:正常对照组、模型对照组(加入17β雌二醇诱导细胞凋亡)、阳性对照组(加入来曲唑与17β雌二醇)、葡萄籽提取物组(加入17β雌二醇和10μg/mL葡萄籽提取物)、Caspase-9抑制剂组(加入17β雌二醇和Caspase-9抑制剂)、Caspase-9激动剂组(加入17β雌二醇和Caspase-9激动剂),培养48 h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡。②体内实验:将30只3月龄SD大鼠随机分为模型对照组、阳性对照组及药物低、中、高剂量组,每组5只,均皮下注射17β雌二醇(3次/周)建立骨骺闭合模型,阳性对照组灌胃给予来曲唑,药物低、中、高剂量组分别灌胃给予0.05,0.2,0.8 g/kg的葡萄籽提取物,1次/d,直至模型对照组大鼠胫骨平台骨骺闭合2/3以上停药,观察各组大鼠胫骨长度。将18只SD大鼠随机分为模型对照组、阳性对照组、药物中剂量组,每组6只,按照如上方法处理,连续给药1.5个月后,Western blot检测大鼠胫骨生长板软骨Caspase-9蛋白表达。结果与结论:①体外实验:17β雌二醇可诱发生长板软骨细胞的凋亡,而来曲唑、葡萄籽提取物与Caspase-9抑制剂均可抑制生长板软骨细胞的凋亡;②体内实验:当模型对照组大鼠胫骨平台骨骺闭合2/3以上时,阳性对照组、药物中剂量组骨骺闭合数量少于模型对照组(P<0.05),且胫骨长度大于模型对照组(P<0.05),胫骨生长板软骨Caspase-9蛋白表达低于模型对照组(P<0.05);③结果表明:适宜浓度的葡萄籽提取物可有效抑制生长板软骨细胞的凋亡并延迟骨骺闭合,具有促进骨骼生长的潜能。

葡萄籽提取物抑制大鼠生长板软骨细胞凋亡促进胫骨生长

背景:葡萄籽提取物具有抑制软骨细胞凋亡和衰老、改善骨关节炎作用,但是有关葡萄籽提取物对生长板软骨细胞凋亡及胫骨生长的影响尚不清楚。目的:探讨葡萄籽提取物对白细胞介素1β诱导大鼠生长板软细胞凋亡的作用及对胫骨生长的影响。方法:①细胞实验:体外分离、培养及鉴定SD大鼠生长板软骨细胞,实验分为对照组、模型组、葡萄籽提取物组、miR-138-5p NC组、miR-138-5p inhibitor组。对照组细胞常规培养;模型组细胞以20 ng/mL白细胞介素1β诱导生长板软骨细胞凋亡模型;葡萄籽提取物组加入20 ng/mL白细胞介素1β,同时加入10μmol/L葡萄籽提取物溶液共培养48 h;miR-138-5p NC组细胞转染5 nmol/L miR-138-5p NC 12 h后,其余操作同模型组;miR-138-5p inhibitor组细胞转染5 nmol/L miR-138-5p inhibitor 12 h后,其余操作同模型组。qRT-PCR检测miR-138-5p和caspase-3表达;荧光素酶报告实验分析miR-138-5p和caspase-3靶向关系;CCK-8检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测caspase-3、Bcl-2蛋白表达。②动物实验:实验分为正常对照组、葡萄籽提取物组和miR-138-5p inhibitor组,观察葡萄籽提取物对大鼠胫骨平台骨骺闭合及胫骨生长的影响。结果与结论:①miR-138-5p与caspase-3存在靶向关系。②与对照组相比,模型组细胞增殖能力显著降低,凋亡显著增加(P<0.01),miR-138-5p和Bcl-2表达降低(P<0.01),caspase-3表达增加(P<0.01);与模型组相比,葡萄籽提取物组细胞增殖能力显著增加,凋亡显著降低(P<0.01),miR-138-5p和Bcl-2表达升高(P<0.01),caspase-3表达降低(P<0.01);与葡萄籽提取物组相比,miR-138-5p inhibitor组细胞增殖能力显著降低,凋亡显著增加(P<0.01),miR-138-5p和Bcl-2表达降低(P<0.05或P<0.01),caspase-3表达增加(P<0.05)。③大鼠给予葡萄籽提取物灌胃处理后能够延缓胫骨平台骨骺闭合,促进胫骨生长,而给予miR-138-5p inhibitor干预后能够抑制葡萄籽提取物对大鼠胫骨生长的作用。④结果说明,葡萄籽提取物能够通过调控miR-138-5p/caspase-3通路抑制大鼠生长板软骨细胞凋亡,改善大鼠胫骨平台骨骺闭合,促进胫骨生长。

软骨生长因子的提取、纯化及生物活性测定

目的 通过从鸡软骨中提取具有生物活性的软骨生长因子 (CDGF) ,为进一步进行体内研究成软骨效应及临床应用打下基础。 方法 采用氯化钠抽提法分离、制备软骨粗提物 ;用肝素 琼脂糖亲合色谱反复层析提纯软骨生长因子 ;以聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染色分析软骨生长因子 ;采用MTT法对CDGF在培养的软骨细胞上进行活性测定。 结果 软骨生长因子能与肝素 琼脂糖紧密结合 ,亲合层析中 ,在 1 4～ 1 8mol/LNaCl缓冲液中洗脱出。通过SDS PAGE凝胶电泳和银染色检测 ,得到分子量为 185 0 0的单一条带 ,高度纯化的CDGF ,其生物活性约 1～ 2ng/ml。 结论 肝素 琼脂糖亲合色谱反复层析 ,可以从鸡软骨中得到活性较高 ,电泳显示单一条带的CDGF。

培养软骨细胞再形成生长板样软骨组织的研究

分离的家兔肋软骨的生长板软骨细胞在含10%的胎牛血清的IMDM培养液中进行高密度培养。培养的软骨细胞经过增殖、分化重新构建形成了生长板样软骨组织;在组织学上,细胞的排列呈现明显的方向性,肥大细胞位于上侧、增殖细胞位于下面从而形成明显的细胞分化区带,即增殖、成熟区和肥大区,并且细胞纵向排列成柱状;在生化代谢方面,软骨细胞DNA,蛋白多糖和碱性磷酸酶的合成具有动态的严格的时间规律性,与在体生长板软骨细胞分化的进程相一致,完整地模拟了在体软骨细胞分化及其代谢的全部过程。

缺锌对增殖期大鼠生长板软骨细胞凋亡的影响

目的探讨锌缺乏对增殖期大鼠肋生长板软骨细胞(RGC)凋亡的影响,为阐明锌对骨骼生长发育影响的机制提供科学依据。方法体外培养Wistar大鼠RGC,用0,5,10及20μmol/L的锌螯合剂N-N-N′-N′-4(2-吡啶甲基)乙二胺(TPEN)分别处理细胞12h。采用流式双染试剂盒研究早期凋亡和晚期凋亡细胞百分比。以5μmol/LTPEN作用6,12,24h,利用免疫组化技术检测细胞中凋亡诱导因子(AIF)的定位表达,并利用Western blot和实时定量PCR(real-time PCR)检测其表达水平的变化。结果随着TPEN浓度的增高,RGC细胞凋亡率也逐渐增加,各组早期凋亡和晚期凋亡细胞百分比增大,AIF的表达水平也逐渐升高。免疫组化染色结果显示在TPEN作用6h后,AIF已从线粒体迁出,12h及24h后,大部分AIF已从线粒体迁至细胞核。结论锌缺乏可以诱导RGC细胞凋亡,在凋亡的过程中AIF发挥着关键作用。

对培养的软骨细胞形成生长板样软骨组织的研究

用家兔肋软骨生长板软骨细胞，进行高密度培养，快速增殖，大量合成细胞外基质，重新构建成了在形态和代谢方面高度分化的、与生长板软骨极为相似的生长板样软骨组织。

一氧化氮在兔生长板软骨细胞终末分化中的生物学作用

原代分离及培养兔肋软骨生长板软骨细胞,添加不同浓度的全反式维甲酸(AT-RA)诱导软骨细胞的终末分化。酶动力学法检测碱性磷酸酶(AKP)及细胞培养上清液中一氧化氮合酶(NOS)活性;硝酸还原酶法检测所培养软骨细胞上清液中一氧化氮(NO)浓度;AT-RA分别联合NOS抑制剂L-硝基精氨酸甲酯(L-NAME)及可以产生NO的S-亚硝基谷胱甘肽(SNOG)作用于原代培养的生长板软骨细胞,分别检测AKP活性。结果发现随着AT-RA浓度的递增,AKP、NOS活性及NO浓度明显增加(P<0.05);L-NAME明显抑制所培养的生长板软骨细胞AKP的活性(P<0.05),SNOG可以提高所培养的生长板软骨细胞AKP的活性(P<0.05)。认为NO可以促进兔肋软骨生长板软骨细胞的终末分化。

染料木黄酮对生长板软骨细胞胶原合成的影响及其机制

目的探讨染料木黄酮(5,7,4′三羟基异黄酮)对大鼠肋生长板软骨细胞(ratcostochondralgrowthplatechondrocyte,RGC)胶原和Sox9表达的影响。方法原代培养RGC,3Hproline参入、RTPCR和Westernblot分别检测染料木黄酮对第1代RGC胶原合成、col2a1基因转录和Sox9表达的影响。结果染料木黄酮抑制RGC的胶原合成(P<0.05),col2a1的转录和Sox9的表达,其抑制作用随着浓度的升高而增强。结论染料木黄酮抑制培养RGC胶原合成的作用至少部分是通过下调Sox9的表达实现的。