刺络拔罐联合骨痹散外敷治疗膝骨关节炎疗效观察及对软骨组织相关信号通路的影响

目的:观察刺络拔罐联合骨痹散外敷治疗膝骨关节炎的疗效及对软骨组织相关信号通路的影响。方法:选取72例膝骨关节炎患者作为研究对象,按随机数字表法分为观察组及对照组各36例。对照组给予骨痹散外敷,观察组给予刺络拔罐联合骨痹散外敷治疗,2组均治疗4周。比较2组临床疗效,比较2组治疗前后疼痛视觉模拟评分法(VAS)评分、“起立-行走”计时测试(TUGT)、中医证候积分、最大主动关节活动度(AROM)、膝关节评分表(KSS)、西安大略和麦克马斯特大学骨关节炎指数(WOMAC)、软骨组织相关信号通路指标值[白细胞介素-1β(IL-1β)、环氧化酶-2(COX-2)]的变化。结果:观察组临床疗效总有效率为97.22%,对照组为83.33%,2组临床疗效比较,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗2周、4周后,2组VAS评分、TUGT指标值均较治疗前下降(P<0.05),观察组VAS评分、TUGT指标值均低于对照组(P<0.05)。治疗后,2组关节疼痛、胫软膝酸、活动不利、动作牵强中医证候积分均较治疗前下降(P<0.05),观察组上述4项中医证候积分均低于对照组(P<0.05)。治疗2周、4周后,2组AROM活动度、KSS指标值均较治疗前升高(P<0.05),观察组AROM活动度、KSS指标值均高于对照组(P<0.05)。治疗后,2组疼痛、僵硬、日常生活难度WOMAC评分均较治疗前下降(P<0.05),观察组上述3项WOMAC评分均低于对照组(P<0.05)。治疗后,2组IL-1β、COX-2指标值均较治疗前升高(P<0.05),观察组IL-1β、COX-2指标值均高于对照组(P<0.05)。结论:刺络拔罐联合骨痹散外敷治疗膝骨关节炎疗效较好,能减退关节肿痛程度,改善膝关节活动度,促进患者自主生活能力的恢复,有效缓解关节疼痛、活动不利等症状。

补肾活血方调控NF-κB信号通路对膝骨关节炎小鼠软骨组织炎症及细胞凋亡的影响

目的观察补肾活血方(BSHXF)对膝骨关节炎(KOA)小鼠软骨组织炎症及细胞凋亡的影响,探讨BSHXF治疗KOA的作用机制。方法将24只雄性BALB/c小鼠按体重随机分为假手术组、KOA模型组、KOA模型+BSHXF组,每组8只。造模、灌胃干预后,小鼠取血,ELISA检测血清IL-6、iNOS、COX2水平;提取小鼠膝关节软骨组织,HE染色及番红O-固绿染色观察软骨组织病理学情况,TUNEL染色检测软骨组织细胞凋亡情况,Western blot检测Cleaved-Caspase-9、Bcl-2、Bax蛋白表达,qRT-PCR检测CollagenⅡ、Aggrecan、ADAMTS-5 mRNA表达,Western blot检测核转录因子-κB(NF-κB)信号通路关键蛋白p-IκBα、IκBα、p-p65、p65的表达。结果与假手术组相比,KOA模型组小鼠膝关节软骨细胞病理改变明显;血清炎症细胞因子IL-6、iNOS和COX2的水平升高,软骨组织细胞凋亡率增加,Cleaved-Caspase-9、Bax蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达降低,CollagenⅡ、Aggrecan的mRNA表达水平降低,ADAMTS-5 mRNA表达升高,p-IκBα/IκBα、p-p65/p65比值升高。与KOA模型组相比,KOA模型+BSHXF组膝关节软骨损伤改善、病理变化减轻,炎症细胞因子IL-6、iNOS和COX2的水平降低,软骨组织细胞凋亡率降低,Cleaved-Caspase-9、Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高,CollagenⅡ、Aggrecan的mRNA表达升高,ADAMTS-5 mRNA表达降低,p-IκBα/IκBα、p-p65/p65比值降低。结论BSHXF可抑制NF-κB信号通路,减少炎性因子释放、抑制软骨细胞凋亡及细胞外基质降解,从而缓解KOA疾病进展。

生理性拉应力通过Nell-1/Ihh信号通路对ATDC5软骨细胞分化的调控作用

目的:探讨生理性拉应力对软骨细胞分化的调控作用,并阐明其相关信号通路机制。方法:体外培养软骨ATDC5细胞,应用四点弯曲细胞力学加载仪对其施加生理性拉应力,首先分为对照组和拉应力组(2 000μstrain/2 h组),另分为不同力值(1 000、2 000和3 000μstrain)加力时间为2 h和力值为2 000μstrain不同加力时间(1、2和4 h)组,同时设未加力的细胞为对照组,采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组细胞中Ⅱ型胶原(Col-Ⅱ)、Ⅹ型胶原(Col-Ⅹ)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)、性别决定区Y框蛋白9 (SOX9)、血管内皮生长因子(VEGF)、增殖细胞核抗原(PCNA)、Nel样1型分子(Nell-1)、Runt相关转录因子2 (Runx2)、印度刺猬因子(Ihh)、补缀同源物1 (Ptch-1)、GLI家族锌指蛋白1 (Gli-1)和刺猬因子相互作用蛋白1 (Hhip-1) mRNA表达水平,采用Western blotting法检测各组细胞中Nell-1、Runx2和Ihh蛋白表达水平。ATDC5细胞分为对照组、环巴胺组、拉应力组和环巴胺+拉应力组,采用RT-qPCR法检测各组细胞中Nell-1、Ihh、Ptch-1、Gli-1和Hhip-1 mRNA表达水平,采用Western blotting法检测各组细胞中Nell-1和Ihh蛋白表达水平。结果:与对照组比较,2 000μstrain/2 h组细胞中Col-Ⅱ、 Col-Ⅹ、 Aggrecan、 SOX9、VEGF和PCNA mRNA表达水平均明显升高(P<0.01)。在对细胞施加2 000μstrain不同加力时间(1、2和4 h)或不同力值(1 000、2 000和3 000μstrain) 2 h的拉应力后,与对照组比较,随时间的延长或力值的增加其他各组细胞中Runx2 mRNA表达水平逐渐升高(P<0.01),Nell-1、Ihh、 Ptch-1、 Gli-1和Hhip-1 mRNA表达水平逐渐升高(P<0.01),且在2 000μstrain/2 h时达到最高,随后出现回落但仍明显高于对照组(P<0.01)。Western blotting检测,各组细胞中Nell-1、Runx2和Ihh蛋白表达水平与mRNA表达水平变化趋势一致。环巴胺预处理后,与对照组比较,环巴胺组细胞中Ihh、Ptch-1、Gli-1和Hhip-1 mRNA表达水平均明显降低(P<0.01),拉应力组和环巴胺+拉应力组细胞中Nell-1、Ihh、Ptch-1、Gli-1和Hhip-1 mRNA表达水平明显升高(P<0.01);与环巴胺组比较,环巴胺+拉应力组细胞中Nell-1、Ihh、Ptch-1、Gli-1和Hhip-1 mRNA表达水平明显升高(P<0.01);与拉应力组比较,环巴胺+拉应力组细胞中Ihh、Ptch-1、Gli-1和Hhip-1 mRNA表达水平明显降低(P<0.01)。与对照组比较,环巴胺组细胞中Ihh蛋白表达水平明显降低(P<0.01),Nell-1蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05),拉应力组和环巴胺+拉应力组细胞中Nell-1和Ihh蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与环巴胺组比较,拉应力组和环巴胺+拉应力组细胞中Nell-1和Ihh蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与拉应力组比较,环巴胺+拉应力组细胞中Nell-1和Ihh蛋白表达水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:在生理性拉应力刺激下,Nell-1可在上游激活Ihh信号通路,进而调控ATDC5软骨细胞的分化。

TGFBR1基因调控Wnt/β-catenin信号通路对结缔组织病相关的肺间质病变中抗纤维化的机制研究

目的:探讨TGF-β受体Ⅰ(TGFBR1)基因调控Wnt/β-catenin信号通路对结缔组织病相关的肺间质病变(CTD-ILD)的抗纤维化作用。方法:以肺癌的癌旁组织作为正常对照组,Western blot检测CTD-ILD患者肺组织TGFBR1的蛋白表达;人胚肺成纤维细胞系MRC-5分为空白对照组、TGF-β1组、阴性对照组和TGFBR1-siRNA组,各组细胞培养48 h,Western blot检测TGFBR1、Ⅰ型胶原、结缔组织生长因子(CTGF)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-Cad)及Wnt/β-catenin信号通路β-连环蛋白(β-catenin)和c-Myc的蛋白表达;CCK8法检测各组细胞的活力。结果:TGFBR1在CTD-ILD肺组织中的表达显著高于正常肺组织(P<0. 05);与空白对照组比较,TGF-β1组细胞活力、TGFBR1、Ⅰ型胶原、CTGF、α-SMA、β-catenin和c-Myc的蛋白表达均显著升高,E-cad蛋白表达显著降低(P<0. 05);TGF-β1组和阴性对照组细胞活力、TGFBR1、Ⅰ型胶原、CTGF、α-SMA、E-cad、β-catenin和c-Myc的蛋白表达差异均无统计学意义(P> 0. 05);与TGF-β1组比较,TGFBR1-siRNA组细胞活力、TGFBR1、Ⅰ型胶原、CTGF、α-SMA、β-catenin和c-Myc的蛋白表达均显著降低,E-cad蛋白表达显著升高(P<0. 05)。结论:TGFBR1基因在CTD-ILD肺组织中表达升高,抑制TGFBR1的表达可通过下调Wnt/β-catenin信号通路降低CTD-ILD纤维化的发生。

胰腺上皮内瘤变和胰腺癌组织中TGF-β/Smad信号通路相关蛋白表达

目的探讨转化生长因子(TGF)β/Smad信号传导通路中Smad相关蛋白、TGFβ1及其Ⅰ、Ⅱ型受体在胰腺上皮内瘤变(PanIN)和胰腺癌组织中表达的意义。方法用免疫组化EnVision法和SP法检测266灶不同级别PanINs和121例胰腺癌组织中Smad相关蛋白、TGFβ1及其Ⅰ、Ⅱ型受体的表达,并联系临床病理学指标进行相关分析。结果高级别PanIN病灶Smad4表达率(60.6%,20/33)低于低级别PanINSmad4表达率(79.8%,186/233)(P<0.05);而高级别PanIN中Smad7,TGFβ1,TGFβRⅡ表达率明显高于低级别PanIN(P<0.05)。胰腺癌组织中,Smad4蛋白表达率在淋巴结转移组和神经受累组低于各自对照组(P<0.05);Smad7、TGFβ1及其Ⅰ、Ⅱ型受体的表达率在淋巴结转移组和神经受累组则分别高于各自对照组(P<0.05)。PanIN和胰腺癌组织中Smad2、4、7蛋白,TGFβ1及其Ⅰ、Ⅱ型受体表达率的差异具有显著性(P<0.01)。结论从低级别PanINs到高级别PanINs再到胰腺癌中,Smad4蛋白表达率逐渐降低,而Smad7、TGFβ1及其Ⅰ、Ⅱ型受体表达率逐渐升高,支持胰腺癌形成的分子模型。

自噬相关信号通路调控骨相关疾病发生发展的作用机制研究进展

自噬是细胞内大分子物质与细胞器被次级溶酶体进行降解与消化的过程,借此维持细胞的自我稳定。自噬在维持骨骼的动态平衡中具有关键性的调控作用,其可通过磷酸酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、核因子κB(NF-κB)、Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)、腺苷单磷酸激活的蛋白激酶(AMPK)等信号通路调控成骨细胞、软骨细胞、骨髓间充质干细胞和破骨细胞的增殖、分化等生物学行为,调控骨相关疾病的发生发展。

骨髓间充质干细胞基于Rho/ROCK信号通路对膝骨性关节炎模型大鼠软骨细胞凋亡的影响

目的分析骨髓间充质干细胞(BMSCs)基于鼠抗Ras同源基因(Rho)/Rho相关螺旋蛋白激酶(ROCK)信号通路对膝骨性关节炎(KOA)模型大鼠软骨细胞凋亡的影响。方法随机选取30只健康大鼠,其中正常组10只,模型组10只、BMSCs组10只,分别进行干预。对比各组软骨组织Mankin评分,检测基质金属蛋白酶(MMP)-1、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-10、凋亡蛋白B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及RhoA、ROCK蛋白表达水平,分析BMSCs对KOA大鼠软骨细胞凋亡的影响。结果BMSCs组Mankin评分高于正常组、低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。BMSCs组血清MMP-1、TNF-α、Bax、RhoA、ROCK表达水平低于模型组、高于正常组,IL-10、Bcl-2表达水平高于模型组、低于正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。BMSCs组软骨细胞凋亡指数低于模型组、高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论基于Rho/ROCK信号通路调控BMSCs可改善KOA大鼠膝关节软骨病理状态、抑制炎症反应蔓延、调控Bax、Bcl-2蛋白表达、抑制软骨细胞凋亡,其机制可能与抑制Rho/ROCK信号通路相关,证实BMSCs具有良好的抗软骨细胞凋亡疗效。

DLL4-Notch1信号通路与肺癌组织新生血管形成的相关性研究

目的探讨Delta样配体4(DLL4)-Notch1信号通路与非小细胞肺癌(NSCLC)组织新生血管形成的相关性。方法选择2009年8月至2017年2月保存于湖北医药学院附属东风医院病理科的NSCLC组织标本(肺癌组,n=56)与癌旁组织标本(癌旁组,n=56),采用免疫组织化学法检测DLL4、Notch1表达情况,记录病理组织的新生血管形成情况,调查患者的一般资料并进行相关性分析。结果肺癌组的DLL4与Notch1阳性表达率分别为57.1%和14.3%,癌旁组分别为7.1%和32.1%,DLL4、Notch1在2组间差异均有统计学意义(P<0.05)。在56例患者中,病理表现为新生血管形成30例,其DLL4与Notch1阳性表达率分别为96.7%和1.3%,与非新生血管形成(1.3%和26.9%)比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。在肺癌组中,Spearman相关分析显示,新生血管形成与DLL4表达呈正相关(r=0.734,P=0.000),与Notch1表达呈负相关(r=-0.795,P=0.000)。多因素非条件Logistic回归分析显示,DLL4表达、Notch1表达、临床分期、淋巴结转移、组织学分化均是影响新生血管形成的因素(P<0.05)。结论 DLL4-Notch1信号通路促进新生血管形成是NSCLC组织发生侵袭、转移的关键事件,可作为评估NSCLC患者临床特征与转移的重要指标。

妊娠期糖尿病并发巨大儿产妇胎盘质量、胎盘组织超微结构及自噬相关信号通路变化

目的:分析妊娠期糖尿病(GDM)并发巨大儿产妇胎盘组织超微结构及自噬相关信号通路变化。方法:收集2018年10月-2021年2月本院诊治的GDM并发巨大儿患者98例(观察组),产前检查为单纯GDM患者98例(对照组),健康产妇98例(健康组)胎盘组织,测定胎盘质量、胎盘容积、胎盘组织超微结构变化及AMPKαRNA表达量,分析胎盘组织超微结构改变情况与AMPKαRNA表达量关系。结果:观察组、对照组、健康组胎盘质量(784.29±12.01g、641.57±12.09g、542.58±12.06g)、胎盘组织超微结构改变率(66.3%、29.6%、2.1%)依次降低,AMPKαRNA表达量(0.31±0.02、0.41±0.08、0.49±0.03)依次升高(均P<0.05),胎盘容积各组无差异(P>0.05)。胎盘质量、胎盘组织超微结构改变率与AMPKαRNA表达量呈负相关(均P<0.05)。结论:GDM并发巨大儿产妇胎盘质量高、胎盘组织超微结构改变异常,自噬相关信号通路减少,这些改变可能影响胎盘的供氧和供血功能。

脉冲磁场与前软骨干细胞向成熟软骨细胞的增殖与分化:与Ihh/PTHrP信号通路活性有关吗?

背景:前期研究证实脉冲电磁场对前软骨干细胞增殖具有促进作用,但其作用机制不明确。目的:进一步探讨脉冲电磁场对前软骨干细胞增殖分化的影响,并观察其对前软骨干细胞Ihh/PTHrP信号通路活性的影响。方法:采用免疫磁珠分选法获取并纯化SD大鼠前软骨干细胞,使用频率为50MHz,电场强度为1mT的脉冲电磁场进行干预,0.5h/次,2次/d,干预2,4,6d后收集细胞,以不给予磁场刺激的为空白对照。通过RT-PCR法检测细胞Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的基因表达水平,再通过Western-blot法测定各组细胞印度刺猬蛋白、甲状旁腺激素相关肽蛋白的表达水平。结果与结论:RT-PCR结果显示,Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的表达随磁场刺激时间延长而增高,且经磁场刺激前软骨干细胞的聚集蛋白聚糖明显高于空白对照组(P<0.05,P<0.01)。Western-blot结果显示,印度豪猪蛋白及甲状旁腺激素相关肽蛋白表达均随磁场刺激时间的延长增加,不同时间磁场刺激组印度刺猬蛋白表达高于空白对照组(P<0.01);甲状旁腺激素相关肽的表达量也随之上升,但当磁场刺激4,6d后的甲状旁腺激素相关肽蛋白表达与空白对照组差异有显著性意义(P<0.05,P<0.01)。提示强度为1mT,频率为50MHz的脉冲电磁场能促进前软骨干细胞向成熟软骨细胞增殖分化,其作用机制可能与改变Ihh/PTHrP信号通路活性有关。

电针延缓骨关节炎软骨退变:基于Ras-Raf-MEK1/2-ERK1/2信号通路的认识

背景:前期研究发现,电针可通过影响骨性关节炎软骨细胞JAK-STAT信号通路,并有效增加转化生长因子β1含量及促进关节软骨中STAT3、Smad3、Lep R mR NA的表达以延缓关节软骨退变,同时电针后血清能有效抑制凋亡调控基因p38、Fas m RNA,并降低MAPK信号通路的表达,从而抑制软骨细胞凋亡。目的:从Ras-Raf-MEK1/2-ERK1/2信号通路探讨电针对骨关节炎大鼠软骨退变的影响。方法:选取2月龄健康雄性SD大鼠120只,随机抽取30只为正常组,其余90只大鼠用4%木瓜蛋白酶法进行双侧关节腔注射造模后再用抽签法随机分为3组,即造模组30只、电针15 min组30只、电针30 min组30只。于造模后2周开始给予电针治疗,电针15 min组与电针30 min组均为5次/周,连续干预12周后,苏木精-伊红染色观察软骨形态,ELISA检测滑膜组织中白细胞介素1β表达,Western Blot检测Ras、Raf、MEK1/2、ERK1/2、C-MYC、C-FOS、C-JUN蛋白含量表达。结果与结论:(1)经苏木精-伊红染色,模型组关节软骨表面局部粗糙不平,软骨层变薄,4层结构缺失,且潮线不完整,电针15 min组和电针30 min组的软骨表层基本完整,软骨层次清晰可辨,潮线相对完整;(2)ELISA结果显示,模型组白细胞介素1β表达含量明显高于正常组(P<0.01),电针15 min组与电针30 min组的白细胞介素1β含量表达均低于模型组(P<0.01);(3)Western Blot结果显示,与正常组比较,模型组的Ras、Raf、MEK1/2、ERK1/2、C-MYC、C-FOS、C-JUN均表达升高。与模型组比较,电针15 min组与电针30 min组的Ras、Raf、MEK1/2、C-MYC、C-FOS、C-JUN蛋白含量表达显著降低(P<0.01,P<0.05),同时亦降低ERK1/2表达;(4)结果提示,电针可通过调控Ras-Raf-MEK1/2-ERK1/2信号通路的相关指标,下调关节软骨Ras、Raf、MEK1/2、ERK1/2、C-MYC、C-FOS、C-JUN蛋白表达,并降低滑膜组织中白细胞介素1β含量表达,从而延缓骨关节炎软骨退变。

Notch信号通路与关节软骨发育及骨关节炎

背景:骨性关节炎时往往伴随软骨细胞间信号转导的异常,提示细胞间信号转导在骨性关节炎发生、发展过程中可能发挥重要作用。目的:综合分析Notch信号通路的最新进展,探讨Notch在调控骨髓间充质干细胞软骨相分化机制、调控软骨发育及软骨发生中的作用,分析Notch信号通路失调与骨关节炎的关系。方法:以Notch signaling pathway,osteoarthritis,chondrocytes,chondrogenesis,bone marrow stem cells为检索词,检索Pubmed数据库(1919-03/2009-02);以Notch信号通路,骨关节炎,软骨细胞,骨髓间充质干细胞为检索词,检索CNKI数据库(2004-02/2008-09)。文献检索语种限制为英文和中文。纳入与Notch信号通路有关的研究、Notch信号通路调控骨髓间充质干细胞软骨相分化机制的研究,以及Notch信号通路失调与骨关节炎的研究。排除重复性研究。以关节软骨的发育调控和软骨细胞的增殖胃评价指标。结果与结论:计算机初检得到632篇文献,根据纳入排除标准,对其中30篇文献进行分析。Notch信号通路是一个在进化过程中高度保守的信号通路,它通过Notch受体与配体的结合、Notch受体的酶切活化、可溶性Notch胞内区转移至细胞核并与CSLDNA结合蛋白相互作用,最终调控靶基因的表达,从而在细胞增殖、分化、凋亡及器官发育中发挥重要的调控作用。目前已证实,Notch信号参与并调控关节软骨的发育、软骨细胞增殖、分化,而Notch信号的失调在骨关节炎的发生、发展中扮演着十分重要的角色。提示深入研究Notch信号在骨性关节炎发病机制中的确切作用将有助于骨性关节炎的靶向治疗,从而为骨性关节炎的治疗开辟更加广阔的前景。

早期骨关节炎软骨下骨趋化因子信号通路的表达

背景:趋化因子广泛存在于炎症反应组织当中,起诱导炎症细胞趋向炎症组织参与免疫应答的作用,大量的实验研究表明,趋化因子在骨关节炎致病过程中起了重要作用。目的:分析早期骨关节炎软骨下骨的趋化因子信号通路表达改变情况,为阐述其在骨关节炎致病机制中的重要作用提供依据。方法:30只SD大鼠随机均分为实验组和对照组。实验组切除右膝内侧半月板及内侧副韧带,对照组仅切开关节囊。于造模后1,2,4周取右膝关节标本,采用全基因表达谱芯片技术研究软骨下骨全基因表达,利用差异基因分析、信号通路分析的方法分析趋化因子信号通路的表达改变情况。结果与结论:①发现一系列与趋化因子信号通路相关的差异表达基因。②实验组与对照组相比较,趋化因子信号通路在造模后1周差异有显著性意义(P<0.05),造模后2,4周差异无显著性意义(P>0.05)。说明趋化因子信号通路在极早期膝关节骨关节炎的软骨下骨改变中起重要作用。

骨髓间充质干细胞向软骨及骨分化：Wnt5a/PCP信号通路作用的研究与进展

背景:Wnt5a具有抑制经典Wnt信号和激活非经典Wnt信号途径的生物学功能。近年来,研究发现Wnt5a介导的Wnt5a/PCP非经典信号通路在骨髓间充质干细胞的增殖和分化过程中发挥着重要作用。但其参与骨髓间充质干细胞向软骨和骨分化形成的机制并不完全清楚。目的:综述Wnt5a/PCP信号通路中的相关下游效应分子,及其在骨髓间充质干细胞向软骨和骨分化形成过程中作用的最新研究进展。方法:以"间充质干细胞、Wnt信号通路、软骨分化、骨分化"为中文捡索词,以"BMSCs、Chondrogenic differentiation、Osteogenic differentiation、Wnt、Fzd、Ror2、Rho A、ROCK、JNK"为英文检索词,在维普、中国知网(CNKI)期刊全文数据库和Pub Med数据库检索2000年1月至2016年2月有关Wnt信号通路参与间充质干细胞向软骨及骨分化的文献。排除陈旧性和重复性研究,重点分析43篇文献进行综述。结果与结论:Wnt5a是非经典Wnt信号途径的代表性Wnt蛋白,主要通过其下游信号分子Fzd、Ror、Rho A、ROCK、JNK等介导,参与细胞骨架、细胞迁移和细胞极化等活动,从而调控其增殖和分化。然而Wnt5a/PCP信号通路在骨髓间充质干细胞向软骨和骨分化过程中具体的作用机制并不清楚,下游效应分子之间是如何协同或独立发挥作用也是未知的,这些问题均需要进一步深入研究。

透骨消痛颗粒对关节软骨细胞wnt/β-连环蛋白信号通路的调控

背景:由巴戟天、杭白芍、肿节风和川芎等组成的透骨消痛颗粒能有效延缓关节宏观形态、软骨基质及软骨细胞退变。目的:观察透骨消痛颗粒对软骨细胞wnt/β-连环蛋白信号通路中Wnt4、糖原合成酶3β及β-连环蛋白的影响。方法:将SD大鼠关节软骨细胞分离培养成功后,人白细胞介素1β诱导软骨细胞退变,取第2代退变软骨细胞,随机分为对照组和透骨消痛颗粒组,后者加入透骨消痛颗粒醇提物,分别培养4,8d后,采用RT-PCR检测2组Wnt4、糖原合成酶3β、β-连环蛋白mRNA表达,采用蛋白印迹法检测Wnt4、糖原合成酶3β及β-连环蛋白表达。结果与结论:采用人白细胞介素1β可诱导软骨细胞退变,软骨细胞退变早期均有Wnt4、糖原合成酶3β及β-连环蛋白表达,但随着时间推移Wnt4、β-连环蛋白表达下降,而糖原合成酶3β表达增高,采用透骨消痛颗粒醇提物干预后均可逆转上述现象。说明透骨消痛颗粒醇提物能诱导软骨细胞转录合成β-连环蛋白和Wnt4蛋白,并抑制糖原合成酶3β表达。

透骨消痛胶囊及其拆方对退变软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响

背景:前期研究表明,透骨消痛胶囊能调控软骨细胞Rho/Rock信号通路、抑制软骨细胞线粒体凋亡通路的信号转导、改变软骨下骨重塑的速率和模式、改善软骨下骨胶原纤维和钙磷结晶的排列等对骨性关节炎发挥治疗作用。目的:进一步观察透骨消痛胶囊及其拆方含药血清对大鼠退变软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响,揭示方中治疗骨性关节炎的主要治法。方法:(1)取SD大鼠40只随机分为透骨消痛胶囊组、补肾柔肝组、活血祛风组和生理盐水组,按照药理试验中动物间和动物与人体间的等效剂量换算,前3组分别灌服等效剂量的透骨消痛胶囊、补肾柔肝药、活血祛风药,生理盐水组灌服生理盐水,制备含药血清用于细胞实验。(2)体外培养SD大鼠软骨细胞并分为5组:空白对照组、模型组、透骨消痛胶囊组、补肾柔肝组和活血祛风组。模型组及各给药组用白细胞介素1β干预软骨细胞24 h后,加入各组血清干预软骨细胞72 h,空白对照组用盐水血清培养,同一时间收集空白对照组软骨细胞。(3)采用实时定量反转录-聚合酶链反应和Western blot法分析Wnt 4、β-catenin、基质金属蛋白酶13的表达。结果与结论:(1)与空白对照组相比,模型组Wnt 4、β-catenin、基质金属蛋白酶13表达均明显增加。(2)与模型组相比,透骨消痛胶囊组、补肾柔肝组和活血祛风组的Wnt 4、β-catenin、基质金属蛋白酶13表达均明显降低,且降低程度为透骨消痛胶囊组>补肾柔肝组>活血祛风组。(3)结果提示透骨消痛胶囊对白细胞介素1β诱导的软骨细胞具有协同保护作用,补肾柔肝为透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的主要治法。

Hedgehog信号通路转录因子Gli1蛋白在结直肠癌组织中的表达

目的探讨Hedgehog信号通路转录因子脑胶质瘤相关癌基因1(Gli1)蛋白在结直肠癌组织中的表达及作用。方法免疫组化法检测Gli1蛋白在147例手术切除结直肠癌组织中的表达;Western blotting法检测Gli1蛋白在19例结直肠癌新鲜组织和2个结肠癌细胞系中的表达;同时用共聚焦激光显微镜观察Gli1转录水平的抑制剂GANT61对8例直肠癌组织中直接分离的肿瘤细胞的影响。结果 147例结直肠癌根治切除标本中,Gli1蛋白在78.2%(115/147)的结直肠癌组织中表达升高,阳性信号表达在肿瘤细胞的细胞核和细胞浆。Gli1蛋白在结直肠癌组织中的表达与结直肠癌浸润前缘肿瘤细胞团数目、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05)。在5例Gli1蛋白阳性的结直肠癌组织中,间质细胞,包括肿瘤相关纤维母细胞和内皮细胞内高表达Gli1蛋白。Gli1蛋白在结直肠癌组织和2个结肠癌细胞系中的表达也升高。对结直肠癌组织中直接分离出的肿瘤细胞,培养以后加入GANT61,可以明显抑制肿瘤细胞内Gli1蛋白的表达,而对肿瘤相关纤维母细胞没有显著影响。结论 Gli1蛋白的活化可能增强肿瘤细胞的侵袭和转移能力,从而促进结直肠癌的进展;GANT61可能为进展期结直肠癌的治疗提供新的契机。

巨噬细胞集落刺激因子过表达对信号通路中破骨相关因子的影响

目的:探讨巨噬细胞集落刺激因子(monocyte colony-stimulating factor,M-CSF)在SD大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)中过表达对破骨细胞分化形成相关细胞因子在信号通路中表达的影响。方法:构建过表达质粒载体上调M-CSF基因表达,使用增强型绿色荧光蛋白确定最佳转染剂量,并将质粒转染至BMSCs。采用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)检测破骨分化特异标志物M-CSF、核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-kappaB ligand,RANKL)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-24(interleukin-24,IL-24)的mRNA表达水平。结果:流式鉴定BMSCs表面标记物CD29、CD44阳性率为91.4%、85.7%;CD45阳性率为2%;每孔5μL LTX为最佳转染效率;RT-PCR检测结果显示,实验组BMSCs中M-CSF mRNA表达显著升高(P<0.001);BMSCs破骨分化特异标志物RANKL、TNF-α、IL-1、IL-24 mRNA表达均显著增高(P<0.001),IL-6 mRNA表达降低(P<0.001),实验组与对照组比较差异有统计学意义。结论:M-CSF过表达增强BMSCs向破骨细胞分化的能力,对破骨细胞形成分化的早中晚期均存在影响。此外,M-CSF高表达质粒将外源基因导入BMSCs,是一种强有力的骨再生的基因治疗工具。

独活寄生汤干预膝骨关节炎模型大鼠软骨PERK/Bip信号通路的表达

背景:前期研究表明独活寄生汤可有效抑制软骨细胞凋亡,但其具体机制尚不明确。目的:观察独活寄生汤对膝骨关节炎大鼠软骨PERK/Bip信号通路关键调节因子PERK、Bip、eI F-2α、ATF-4、GADD153、Caspase-9、Caspase-3的影响,探讨独活寄生汤防治骨关节炎的作用机制。方法:80只SD大鼠适应性喂养1周后,随机分为正常组(20只)和造模组(60只)。造模组应用膝关节注射木瓜蛋白酶法制备膝骨关节炎模型。造模成功后随机分为3组,即模型组(n=20)、治疗组(n=20)和阳性对照组(n=20)。正常组和模型组给予生理盐水;治疗组给予独活寄生汤,按照9.3 g/(kg·d)的药量进行灌胃;阳性对照组给予盐酸氨基葡萄糖胶囊0.15 g/(kg·d)。2周为1个疗程,共4个疗程。分别于2,4个疗程后切取右侧胫骨平台,免疫组化法和RT-PCR法检测PERK、Bip、e IF-2α、ATF-4、GADD153、Caspase-9、Caspase-3蛋白和mRNA表达情况。结果与结论:(1)RT-PCR结果显示,独活寄生汤和盐酸氨基葡萄糖均能抑制PERK、Bip、e IF-2α、ATF-4、GADD153、Caspase-9、Caspase-3 mRNA表达(P<0.05或0.01),干预时间越长,效果越明显,但2组间无显著差异(P>0.05);(2)免疫组化结果与RT-PCR结果趋势一致,即独活寄生汤和盐酸氨基葡萄糖均能抑制PERK、Bip、e IF-2α、ATF-4、GADD153、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达(P<0.05或0.01),干预时间越长,效果越明显,但2组间无显著性差异(P>0.05);(3)结果提示,独活寄生汤可能是通过调控PERK/Bip信号通路,进而抑制因内质网应激反应引起的软骨细胞凋亡。

电针抑制Ras/Raf/MEK1/2/ERK1/2信号通路介导骨关节炎软骨超微结构退变

背景:前期研究发现,电针能有效抑制凋亡调控基因p38及Fas m RNA的表达,并降低MAPK信号通路的表达,从而抑制软骨细胞凋亡,同时电针可影响骨性关节炎软骨细胞JAK-STAT信号通路,并有效增加转化生长因子β1含量及促进关节软骨中STAT3,Smad3及Lep R m RNA的表达以延缓关节软骨退变。目的:观察电针对骨关节炎大鼠关节软骨超微结构及软骨组织中Ras,Raf,MEK1/2,ERK1/2 m RNA表达的影响。方法:建立膝骨关节炎大鼠模型,造模成功后2周随机分为4组,模型组不进行电针干预,电针15,30 min组取双侧膝关节内、外膝眼,分别经电针治疗15,30 min,PD98059组经静脉注射细胞外信号调节激酶抑制剂PD98059,另设正常饲养的大鼠作正常组对照,共干预3个月。结果与结论:(1)透射电镜检测显示,与模型组比,PD98059抑制剂组、电针15,30 min组软骨细胞形态变化较小,细胞核较大,部分内质网池扩张,线粒体结构仍较清晰;(2)ELISA结果显示,与模型组比,PD98059抑制剂组、电针15,30 min组的肿瘤坏死因子α水平降低(P<0.01);(3)RT-PCR结果显示,与模型组相比,PD98059抑制剂组、电针15,30 min组的Ras,Raf,MEK1/2及ERK1/2 m RNA表达显著降低(P<0.05或P<0.01);(4)结果说明,电针干预能够减轻膝骨关节炎模型大鼠软骨细胞损伤,降低膝关节部滑膜组织中肿瘤坏死因子α水平,下调关节软骨Ras,Raf,MEK1/2及ERK1/2 m RNA表达,从而对骨关节炎关节软骨发挥一定的保护作用。