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构建兔软骨脱落细胞三维支架及与干细胞相容性评价的实验研究
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作者 徐菊菊 谢燕燕 +6 位作者 郭志义 马雨凯 王霖虹 杨美荣 邓昭玲 华宝来 闫振宇 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期1012-1022,共11页
目的制备不同浓度的兔软骨脱落细胞支架,并评估其理化性能和干细胞的相容性,为软骨修复提供实验依据。方法Percoll密度分离法培养骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),并进行流式细胞学鉴定和成骨、成软骨分化... 目的制备不同浓度的兔软骨脱落细胞支架,并评估其理化性能和干细胞的相容性,为软骨修复提供实验依据。方法Percoll密度分离法培养骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),并进行流式细胞学鉴定和成骨、成软骨分化能力检测。从兔膝、股关节中切取软骨片,进行物理粉碎、反复冻融以及各种酶混合消化脱细胞。为比较并观察不同浓度脱细胞支架的理化性能差异,设计3组支架,浓度分别为100%(A组)、50%(B组)、30%(C组),每组3只。将第3代PKH26示踪的BMSCs接种于最适浓度支架上培养1周,观察细胞生长情况。结果流式技术检测BMSCs表面抗原,CD44、CD90呈阳性表达,CD45阴性表达;成骨诱导茜素红染色可见红色钙结节;软骨诱导阿利新蓝染色见软骨结节呈蓝色;3组支架经苏木素-伊红(HE)、甲苯胺蓝染色后未观察到明显细胞形态。样本脱细胞后的DNA浓度与未脱支架的指标均值差异具有显著性(P<0.05)。糖胺聚糖含量较正常值稍偏低。3组支架两两比较孔径、吸水膨胀率、孔隙率、支架断裂强度、杨氏模量差异具有显著性(P<0.05);干细胞与支架共培养后细胞附着良好。结论Percoll密度分离法可获取高纯度的兔BMSCs;应用混合脱细胞方法脱细胞较彻底。B组支架可作为构建组织工程软骨修复的最适方案。体外培养的BMSCs在B组支架生长良好。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 组织工程 软骨细胞支架 共培养
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新型生物玻璃作为软骨细胞支架的实验研究
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作者 吴俊 孙俊英 +1 位作者 郝思春 顾卫民 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期251-251,共1页
关键词 新型生物玻璃 软骨细胞支架 实验研究 体外培养
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脱细胞软骨生物支架材料的生物学特性 被引量:2
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作者 何君仁 杨自权 +3 位作者 李刚 李鹏翠 丁娟 卫小春 《生物骨科材料与临床研究》 CAS 2008年第4期1-6,共6页
目的探讨脱细胞软骨生物支架材料(ACM)在细胞毒性、溶血试验、急性全身毒性等方面的生物学特性;方法①ACM的制备:猪膝关节软骨冻干加工为粉末,胰酶消化,曲拉通洗脱,蒸馏水洗净冻干,紫外线照射(UVI)后成型;②细胞毒性测定:材料浸提液培... 目的探讨脱细胞软骨生物支架材料(ACM)在细胞毒性、溶血试验、急性全身毒性等方面的生物学特性;方法①ACM的制备:猪膝关节软骨冻干加工为粉末,胰酶消化,曲拉通洗脱,蒸馏水洗净冻干,紫外线照射(UVI)后成型;②细胞毒性测定:材料浸提液培养细胞进行细胞形态大体观察,MTT法观察细胞活性;③急性全身毒性反应:材料浸提液注射入SD大鼠腹腔观察材料对动物表现及体重变化的影响;④溶血试验:材料浸提液与稀释动物鲜血混合观察红细胞溶解情况,492nm下检测OD值计算相对溶血率;结果①细胞毒性试验:24h、48h、72h各时间段内三组细胞OD值两两比较(>0.05),无显著差异,ACM细胞毒性为0级;②动物急性毒性实验:Ⅰ生物材料处理组和Ⅱ生理盐水处理组对动物体重影响没有差异(>0.05),Ⅰ生物材料处理组和Ⅲ苯酚处理组对动物体重有显著差异(<0.05);③溶血试验:材料相对溶血率为2.92%,低于5%的标准,无明显溶血现象;结论ACM在细胞毒性、溶血实验、动物急性毒性反应方面符合软骨组织工程中对于支架材料的要求,提示支架材料有良好的生物相容性和安全性。 展开更多
关键词 细胞软骨支架材料 细胞毒性试验 全身毒性试验 溶血试验
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脱细胞骨软骨支架的细胞相容性测定及与软骨细胞体外的复合
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作者 刘建华 王国海 徐栋梁 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1980-1982,共3页
目的测定脱细胞和脱钙处理的脱细胞骨软骨支架的细胞相容性及该支架与软骨细胞体外复合培养的生物学特性和黏附关系,以探讨脱细胞骨软骨支架作为软骨组织工程支架的可行性。方法采用自制脱细胞骨软骨支架与软骨细胞体外复合培养,用细胞... 目的测定脱细胞和脱钙处理的脱细胞骨软骨支架的细胞相容性及该支架与软骨细胞体外复合培养的生物学特性和黏附关系,以探讨脱细胞骨软骨支架作为软骨组织工程支架的可行性。方法采用自制脱细胞骨软骨支架与软骨细胞体外复合培养,用细胞增殖度法测定脱细胞骨软骨支架的细胞相容性,并行电镜观察其相互黏附关系。结果脱细胞骨软骨支架的细胞相容性良好;体外复合实验中,软骨细胞可贴附于材料上生长增殖,并分泌细胞外基质。结论细胞增殖实验显示脱细胞骨软骨支架的细胞相容性良好;体外复合实验显示脱细胞骨软骨支架可与软骨细胞良好复合,适于软骨细胞贴附生长。 展开更多
关键词 细胞软骨支架 关节软骨 软骨细胞 组织工程
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脱细胞骨软骨支架的制备及形态学观察
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作者 刘建华 王国海 徐栋梁 《实用医学杂志》 CAS 2008年第22期3827-3829,共3页
目的:探讨脱细胞骨软骨支架制备的可行性,为关节软骨组织工程提供新的支架材料。方法:3月龄雄性新西兰大白兔,取膝关节髌股关节面的股骨侧,切取4mm×4mm×3mm大小(长×宽×深)骨软骨块,用去垢剂-酶法对骨软骨组织块进... 目的:探讨脱细胞骨软骨支架制备的可行性,为关节软骨组织工程提供新的支架材料。方法:3月龄雄性新西兰大白兔,取膝关节髌股关节面的股骨侧,切取4mm×4mm×3mm大小(长×宽×深)骨软骨块,用去垢剂-酶法对骨软骨组织块进行脱细胞脱钙处理,冻干机冻干,制备脱细胞骨软骨支架,并对其进行形态学观察。结果:脱细胞骨软骨支架呈半透明状,弹性良好,组织学评价提示细胞成分已完全祛去,保留了纤维支架。结论:去垢剂-酶法可以祛去骨软骨块中的细胞成分,成为带有空隙的支架材料。 展开更多
关键词 软骨 关节 细胞软骨支架 软骨细胞 组织工程
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自体释氧纳米仿生支架复合软骨细胞构建颞颌关节
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作者 王鸿 廖天安 +3 位作者 王涛 符良斌 胡广伟 邓伟 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2016年第30期4469-4475,共7页
背景:将自体释氧纳米仿生支架复合软骨细胞在模拟微重力下复合培养构建的活性组织工程骨,不仅具有优良成骨的潜在特性,而且具有自体释氧功能,能有效防止早期血管化不足缺氧导致的移植失败。目的:观察自体释氧纳米仿生支架复合软骨细胞... 背景:将自体释氧纳米仿生支架复合软骨细胞在模拟微重力下复合培养构建的活性组织工程骨,不仅具有优良成骨的潜在特性,而且具有自体释氧功能,能有效防止早期血管化不足缺氧导致的移植失败。目的:观察自体释氧纳米仿生支架复合软骨细胞修复不同类型颞颌关节髁状突骨折的效果。方法:将30只SD大鼠随机分为3组,每组10只,其中1组为正常对照,实验1组建立颞颌关节髁状突纵行骨折模型,植入自体释氧纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架与软骨细胞;实验2组建立颞颌关节髁状突横断骨折模型,植入自体释氧纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架与软骨细胞。植入后1,3,6周,采用免疫荧光法检测增殖细胞核抗原阳性细胞数,使用TUNEL法检测软骨细胞凋亡情况,采用RT-PCR方法检查软骨内成骨标志物Ⅱ型胶原、促软骨形成基因、血管内皮生长因子的表达。结果与结论:(1)实验1组、实验2组不同时间点的增殖细胞核抗原阳性细胞数高于正常对照组(P<0.05),植入后3,6周的软骨细胞凋亡数低于正常对照组(P<0.05),植入后3,6周的Ⅱ型胶原、促软骨形成基因、血管内皮生长因子表达高于正常对照组(P<0.05);(2)实验1组植入后3,6周的增殖细胞核抗原阳性细胞数低于实验2组(P<0.05),植入后3周的软骨细胞凋亡数低于实验2组(P<0.05),植入后3,6周的Ⅱ型胶原、促软骨形成基因、血管内皮生长因子表达高于实验2组(P<0.05);(3)结果表明:自体释氧纳米仿生支架复合软骨细胞修复不同类型颞颌关节髁状突骨折有着一定的差异性。 展开更多
关键词 纳米复合物 软骨细胞 下颌骨髁状突 组织工程 生物材料 纳米材料 自体释氧纳米仿生支架复合软骨细胞 颞颌关节髁状突骨折 不同类型骨折 增殖 凋亡 软骨内成骨
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聚乳酸/聚乙醇酸与脱细胞软骨粒支架及聚乳酸/聚乙醇酸-脱细胞软骨粒支架体外构建组织工程软骨的比较
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作者 张军武 张永红 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2009年第34期6629-6632,共4页
背景:聚乳酸/聚乙醇酸具有良好的生物力学性能,但是细胞黏附性较差,而脱细胞软骨基质具有较好的细胞黏附性和亲水性,能介导细胞间信号传导及相互作用,但是生物力学性能不好。课题组制备的聚乳酸/聚乙醇酸-脱细胞软骨基质支架材料,弥补了... 背景:聚乳酸/聚乙醇酸具有良好的生物力学性能,但是细胞黏附性较差,而脱细胞软骨基质具有较好的细胞黏附性和亲水性,能介导细胞间信号传导及相互作用,但是生物力学性能不好。课题组制备的聚乳酸/聚乙醇酸-脱细胞软骨基质支架材料,弥补了2种材料各自的缺点,有望成为一种新型支架材料。目的:比较聚乳酸/聚乙醇酸、脱细胞软骨基质、聚乳酸/聚乙醇酸-脱细胞软骨基质3种支架体外构建组织工程软骨的生长情况。设计、时间及地点:对比观察实验,于2008-03/09在山西医科大学实验室完成。材料:聚乳酸/聚乙醇酸平均孔径为100~200μm,孔隙率为94%左右,脱细胞软骨基质支架平均孔径为70~100μm,孔隙率为85%左右,聚乳酸/聚乙醇酸-脱细胞软骨基质平均孔径为100~300μm,孔隙率为90%左右。方法:根据支架材料的不同,实验分为3组,分别为聚乳酸/聚乙醇酸支架组,脱细胞软骨粒支架组,聚乳酸/聚乙醇酸-脱细胞软骨粒支架组,将猪软骨细胞分离、培养、扩增、接种于3种支架,体外联合培养8周。主要观察指标:免疫组化染色检测Ⅱ型胶原表达;反转录-聚合酶链反应检测组织工程软骨细胞内Ⅱ型胶原mRNA含量;Hoechst33258荧光法测定DNA含量。结果:软骨细胞在聚乳酸/聚乙醇酸-脱细胞软骨粒支架组生长良好,8周后仍能维持软骨细胞表型,其分泌Ⅱ型胶原的能力优于其他两组。聚乳酸/聚乙醇酸-脱细胞软骨粒支架组DNA含量、Ⅱ型胶原mRNA含量最高,脱细胞软骨基质组次之,聚乳酸/聚乙醇酸组最低,单因素方差分析显示差异有显著性意义(P<0.01)。结论:聚乳酸/聚乙醇酸-脱细胞软骨粒支架更适于细胞生长、黏附,更有利于维持细胞表型和促进软骨细胞分泌Ⅱ型胶原。 展开更多
关键词 聚乳酸 聚乙醇酸 细胞软骨支架 聚乳酸 聚乙醇酸-脱细胞软骨支架 组织工程
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组织工程化软骨形成的细胞浓度选择 被引量:6
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作者 张瑛 范卫民 陈哲峰 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期762-764,共3页
目的探讨兔组织工程化软骨形成的合适细胞浓度。方法分离培养兔关节软骨细胞,体外扩增后以1,2,4,6,8,10×107/ml 6种不同浓度种植到PLGA支架上。在体外培养软骨细胞支架复合物,4周终止培养,进行HE、Masson组织学染色、Ⅱ型胶原免疫... 目的探讨兔组织工程化软骨形成的合适细胞浓度。方法分离培养兔关节软骨细胞,体外扩增后以1,2,4,6,8,10×107/ml 6种不同浓度种植到PLGA支架上。在体外培养软骨细胞支架复合物,4周终止培养,进行HE、Masson组织学染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色。结果体外培养的软骨组织,与正常软骨组织有相似的组织学特性,形成软骨组织适宜细胞浓度为4×107/ml。结论体外形成兔软骨组织的适宜细胞接种浓度为4×107/ml。 展开更多
关键词 软骨细胞 组织工程 细胞浓度 组织工程化 软骨形成 免疫组织化学染色 软骨组织 关节软骨细胞 PLGA支架 软骨细胞支架
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小鼠骨髓基质干细胞与人耳脱细胞软骨复合培养的研究 被引量:7
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作者 杨宏梅 柏树令 +1 位作者 王志军 高景恒 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 2004年第3期214-216,共3页
目的 探讨以小鼠骨髓基质干细胞 (MSCs)作为组织工程软骨的种子细胞 ,在人耳脱细胞软骨支架上生长的可行性。 方法 将人耳软骨经脱细胞处理 ,得到脱细胞软骨支架。抽取鼠的骨髓 ,经离心得到单个核细胞 ,进行体外分离培养得到 MSCs。... 目的 探讨以小鼠骨髓基质干细胞 (MSCs)作为组织工程软骨的种子细胞 ,在人耳脱细胞软骨支架上生长的可行性。 方法 将人耳软骨经脱细胞处理 ,得到脱细胞软骨支架。抽取鼠的骨髓 ,经离心得到单个核细胞 ,进行体外分离培养得到 MSCs。将鼠的第 2代 MSCs种植于脱细胞软骨支架上 ,体外立体培养 10天 ,在光镜及电镜下观察细胞生长及胶原纤维排列情况。 结果 MSCs在人耳脱细胞软骨支架上能立体培养成活 ,细胞分布不均 ,靠近培养液的一面细胞分布较多 ,其中大部分细胞进入已脱细胞的软骨陷窝内 ,每个陷窝内的细胞数为 1~ 2个。 结论 以鼠 MSCs为种子细胞 ,可在人耳脱细胞软骨支架上良好生长 ,构建组织工程软骨。 展开更多
关键词 小鼠 骨髓基质干细胞 人耳脱细胞软骨 复合培养 细胞软骨支架
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应用旋转式生物反应器体外构建组织工程软骨具优越性 被引量:2
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作者 高峰 范卫民 +2 位作者 崔维顶 马益民 朱长仁 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期350-353,共4页
目的:应用HFB-40型旋转式生物反应器体外培养一定形状的人工软骨组织,为组织工程软骨应用于更广泛的领域打下基础。方法:将第3代兔软骨细胞接种于2mm×4mm×4mm的长方体聚乳酸聚羟基乙酸聚合物(PLGA)上,随机分为A、B两组。A组... 目的:应用HFB-40型旋转式生物反应器体外培养一定形状的人工软骨组织,为组织工程软骨应用于更广泛的领域打下基础。方法:将第3代兔软骨细胞接种于2mm×4mm×4mm的长方体聚乳酸聚羟基乙酸聚合物(PLGA)上,随机分为A、B两组。A组为实验组,培养于生物反应器内;B组为对照组,培养于普通培养瓶内。4周后定量检测支架中氨基糖胺聚糖(GAG)、DNA含量,分析Ⅱ型胶原免疫组织化学染色面积百分比差异。结果:实验组支架-细胞复合体体积较大,较厚,表面光滑,有弹性,有光泽,其GAG、DNA含量以及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色面积百分比明显高于对照组(P<0.01)。结论:生物反应器相对于普通的培养瓶,能够提供更加有利于软骨细胞在PLGA中生长的外部环境,更有利于组织工程软骨的形成。 展开更多
关键词 组织工程 生物反应器 软骨细胞-支架复合体
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ACM复合rBMSC修复兔股骨内髁关节软骨缺损的价值 被引量:1
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作者 刘拴 张明勇 胡冰 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2018年第13期3216-3219,共4页
目的探讨脱细胞软骨支架材料(ACM)复合兔骨髓间充质干细胞(r BMSC)修复兔股骨内髁关节软骨缺损的价值。方法选取48只健康新西兰白兔(3月龄),随机分为3组,ACM-BMSC组,ACM组,空白对照组。各个组再分为6 w和12 w 2个时间段。6 w、12 w时观... 目的探讨脱细胞软骨支架材料(ACM)复合兔骨髓间充质干细胞(r BMSC)修复兔股骨内髁关节软骨缺损的价值。方法选取48只健康新西兰白兔(3月龄),随机分为3组,ACM-BMSC组,ACM组,空白对照组。各个组再分为6 w和12 w 2个时间段。6 w、12 w时观察修复组织,进行Wakitani组织学评分。结果各个关节腔没有看到感染积液,没有发生关节腔粘连情况。手术后6 w,ACM-BMSC组修复组织多数和周围组织接合较好,ACM组修复组织厚度约2/3,没有看到潮线,空白对照组缺损区没有明显的类软骨组织修复。手术后12 w,ACM-BMSC组修复组织多数是透明软骨样组织,ACM组修复组织表面欠光滑,空白对照组能够看到少量肉芽组织修复。在同一时间段内,不同组间细胞形态、基质染色、表面平整、软骨厚度、接合、总分比较,ACM-BMSC组和空白对照组、ACM组和空白对照组,差异显著(P<0.05);ACM-BMSC组和ACM组无显著差异(P>0.05)。结论经传代后复合脱细胞关节软骨支架材料可以较好地修复兔关节软骨缺损,修复组织中细胞形状、分布和排列与正常软骨组织接近,是关节软骨缺损修复的可选方法。 展开更多
关键词 细胞软骨支架材料 骨髓间充质干细胞 兔股骨内髁关节 软骨缺损
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脱细胞软骨细胞外基质取向支架复合软骨细胞构建组织工程软骨的实验研究 被引量:9
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作者 鹿亮 刘彬 +7 位作者 尚希福 张雨 陈伟健 刘舒云 黄靖香 汪爱媛 郭全义 卢世璧 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期291-297,共7页
目的探讨脱细胞软骨细胞外基质(acellular cartilage extracellular matrix,ACECM)取向支架复合软骨细胞构建组织工程软骨的可行性。方法取市售猪关节软骨组织,分离培养关节软骨细胞并传代。取第3代软骨细胞行PKH26荧光标记,MTT检测标... 目的探讨脱细胞软骨细胞外基质(acellular cartilage extracellular matrix,ACECM)取向支架复合软骨细胞构建组织工程软骨的可行性。方法取市售猪关节软骨组织,分离培养关节软骨细胞并传代。取第3代软骨细胞行PKH26荧光标记,MTT检测标记对细胞增殖无影响后,分别取标记及未标记的软骨细胞复合ACECM取向支架并体外培养后,大体观察支架形态,倒置显微镜、荧光显微镜观察软骨细胞在支架中的黏附、生长和分布情况,扫描电镜观察支架中细胞形态,Ⅱ型胶原免疫荧光染色观察软骨细胞外基质分泌情况。将PKH26标记的软骨细胞-支架复合物植入裸鼠背部皮下腔隙,术后观察裸鼠一般情况,4周后分子荧光活体成像系统无创伤性评估细胞-支架复合物生长情况,取材行大体观察以及番红O、甲苯胺蓝、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色观察,评价形成软骨组织的能力。结果细胞-支架复合物体外培养7 d,大体观察呈半透明并具有一定硬度;倒置显微镜和荧光显微镜观察软骨细胞在支架上能良好黏附生长,并沿支架管道方向生长,分泌Ⅱ型胶原。细胞-支架复合物植入裸鼠皮下后,分子荧光活体成像系统观察示细胞均存活;术后4周,大体观察见复合物呈类软骨样组织,组织学染色及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色示细胞周围软骨细胞外基质分泌,可见"陷窝"样结构形成。结论 ACECM取向支架有利于软骨细胞的黏附、增殖及取向性分布类似于正常软骨结构,并在裸鼠皮下成功异位构建组织工程软骨。 展开更多
关键词 软骨组织工程 细胞软骨细胞外基质取向支架 软骨细胞 支架材料
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医用聚氨酯/脱细胞软骨支架的研制 被引量:1
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作者 崔小平 张永红 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期385-385,共1页
我们将医用聚氨酯(PU)材料与脱细胞软骨基质生成一种新的PU/脱细胞软骨基质材料,评价该材料是否适合作为软骨组织工程支架。
关键词 细胞软骨支架 医用聚氨酯 骨基质材料 细胞软骨基质 骨组织工程支架 研制
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Whole meniscus regeneration using polymer scaffolds oaded with fibrochondrocytes
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作者 LU Hua-ding CAI Dao-zhang +2 位作者 WU Gang WANG Kun SHI De-hai 《Chinese Journal of Traumatology》 CAS 2011年第4期195-204,共10页
Objective: To study the feasibility of regenerating a whole menisci using poly-(3- hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate) (PHBV) scaffolds loaded with meniscal cells in rabbits undergoing total meniscectomy, and t... Objective: To study the feasibility of regenerating a whole menisci using poly-(3- hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate) (PHBV) scaffolds loaded with meniscal cells in rabbits undergoing total meniscectomy, and to explore its protective effect on carti- lage degeneration. Methods: A solvent casting and particulate leaching technique was employed to fabricate biodegradable PHBV scaffolds into a meniscal shape. The proliferated meniscal cells were seeded onto the polymer scaffolds, transplanted into rabbit knee joints whose lateral menisci had been removed. Eight to 18 weeks after transplantation, the rege- nerated neomenisci were evaluated by gross and histologi- cal observations. Cartilage Mankin score. degeneration was assessed by Results: Eighteen weeks after transplantation, the implants formed neomenisci. Hematoxylin and eosin (HE) staining of the neomenisci sections revealed regeneration of fibrocartilage. Type I collagen in the neomenisci was also proved similar to normal meniscal tissue by immunohis-tochemical analysis and Sirius scarlet trinitrophenol staining. Articular cartilage degeneration was observed 8 weeks af- ter implantation. It was less severe as compared with that in total meniscectomy controls and no further degeneration was observed at 18 weeks. At that time, the regenerated neomenisci strongly resembled normal meniscal fibrocarti- lage in gross and histological appearance, and its mechani- cal property was also close to that of normal meniscus. Conclusions: The present study demonstrates the feasibility of tissue-engineering a whole meniscal structure in total meniscectomy rabbit models using biodegradable PHBV scaffolds together with cultured allogeneic meniscal cells. Cartilage degeneration is decreased. But long-term in vivo investigations on the histological structure and cartilage degeneration of the neomenisci regenerated by this method are still necessary to determine the clinical potential of this tissue engineering avenue. 展开更多
关键词 Menisci tibial Polyesters Tissue engineering
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