软骨仿生基质体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞样细胞

目的探讨含2型胶原蛋白(Col2)、硫酸软骨素(CS)和(或)透明质酸(HA)的软骨仿生基质材料,在体外条件下对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)分化为软骨细胞样细胞的影响。方法体外培养BMSC,分别接种于对照材料、含Col2、Col2-CS、Col2-HA、Col2-CS-HA的软骨仿生基质材料。诱导7、14、21、28 d后,采用CCK-8法检测各复合基质对BMSC增殖、分化活性的影响;采用反转录PCR技术检测软骨细胞标志物Col2、Y染色体性别决定区相关高迁移率组基因9(SOX9)及聚集蛋白聚糖(aggrecan)的mRNA水平,免疫荧光技术检测Col2、SOX9及aggrecan的蛋白水平。结果 CCK-8法检测结果显示,以Col2为基础的基质材料都能作为BMSC生长的良好细胞外基质,CS和HA使BMSC的增殖活性逐渐增加;各复合基质材料均能在体外有效诱导BMSC向软骨细胞样细胞分化;Col2-CS-HA包被能够最大程度上调Col2、SOX9及aggrecan mRNA及蛋白的水平。结论以Col2为基础的仿生基质材料可在体外有效诱导大鼠BMSC分化为软骨细胞样细胞,其中以复合Col2-CS-HA基质材料效率最高。

绿原酸对缺氧环境下干细胞来源软骨样细胞凋亡的影响

目的探讨缺氧环境下绿原酸对骨髓间充质细胞来源软骨样细胞(Chondrogenic MSCs)影响及机制。方法采用体外培养大鼠间充质干细胞,以含0.2 mg.L-1 BMP-2诱导液培养12 d使其成为软骨样细胞后进行实验。分为(A)正常对照组、(B)绿原酸组、(C)0.1%O2缺氧环境组、(D)绿原酸+0.1%O2缺氧环境组。检测各组Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡、细胞内活性氧水平;RT-PCR检测不同组软骨细胞Caspase-3和Bcl-2基因的表达。结果与正常对照组比较,0.1%O2缺氧环境12 h能明显造成干细胞来源软骨样细胞的凋亡(P<0.05),绿原酸可降低0.1%O2缺氧引起的软骨样细胞凋亡率(P<0.05),活性氧水平下降,Bcl-2表达增强,Caspase-3表达减弱。结论绿原酸可抑制0.1%O2缺氧引起的软骨样细胞凋亡,其作用机制可能与降低细胞内的活性氧水平,稳定细胞的氧化还原状态来保护线粒体膜电位,促进凋亡抑制基因Bcl-2的表达及抑制Caspase-3的表达有关。

山羊颞下颌关节盘细胞类型及分布表征在组织构建中的设计意义：

背景:颞下颌关节盘的细胞分型分布尚无定论,对细胞的描述使用的名称也不统一。目的:表征山羊颞下颌关节盘中细胞的分型及分布。设计、时间及地点:单一样本观察,于2007-03/05在兰州大学细胞与分子生物学实验中心、电镜中心完成。材料:颞下颌关节盘取自两只新鲜屠宰的1月龄健康山羊。方法:完整切取山羊双侧颞下颌关节盘,按长轴(内外侧向)及短轴(前后向)分别等分为3部分和两部分,将关节盘分为6份。标记后用体积分数为10%中性甲醛固定24h,石蜡包埋。主要观察指标:苏木精-伊红染色观察关节盘各带细胞类型及数目的不同,甲苯胺蓝染色,Ⅰ型胶原免疫组织化学检测胶原的分布,透射电镜观察细胞超微结构。结果:颞下颌关节盘由不均分布的细胞和胶原纤维组成。胶原几乎都为Ⅰ型,胶原纤维一般表现为波浪形或卷曲状,纤维大致平行,而细胞散在胶原纤维基质中。细胞有成纤维细胞样细胞和软骨细胞样细胞两种,其中前者占优势,两者比例约为2.05∶1。细胞类型和分布在各区没有显著性差异。电镜超微结构显示成纤维细胞样细胞核大,梭形或不规则形,细胞器很少。软骨细胞样细胞胞核圆形或椭圆形,周围有电子透射区,细胞囊不明显,伪足少见。结论:1月龄山羊颞下颌关节盘内各个区域的细胞类型、数目与排列差异没有显著性意义。其中成纤维细胞样细胞较软骨细胞样略占优势。

山羊颞下颌关节盘细胞透射电镜观察

目的用透射电镜的方法对两只1月龄健康山羊四只颞下颌关节盘的细胞及胶原结构进行了观察。方法切取山羊双侧颞下颌关节盘,经组织学处理后行透射电镜观察细胞和胶原超微结构特征。结果颞下颌关节盘由不均分布的细胞和胶原纤维组成,细胞有成纤维细胞样细胞和软骨细胞样细胞两种,其中成纤维细胞样细胞较软骨细胞样细胞占优势。成纤维细胞样细胞表现有细长的突起,核大,梭形或不规则形,细胞器较少。软骨细胞样细胞胞核呈圆形或椭圆形,周围少有电子透射区,细胞膜不明显,胞突少见。胶原纤维由平行排列的有周期性横纹特征的胶原原纤维组成。结论颞下颌关节盘细胞有成纤维细胞样和软骨细胞样细胞两种,前者占优势,胶原原纤维表现有周期性横纹特征。这为颞下颌关节盘组织工程研究中细胞来源及表型分析奠定了一定基础。

细胞移植修复椎间盘的新视角与新进展

背景:目前对椎间盘退变的治疗仅限于姑息治疗或积极的外科干预,但均不能减缓或逆转其进程,远期疗效也不满意。近年来随着组织工程与再生医学的不断发展,运用细胞疗法修复退变椎间盘得到了越来越多的研究者关注。目的:总结目前临床上细胞移植治疗椎间盘退变的现状,为以后的研究提供一些理论基础和实验依据。方法:通过计算机在CNKI、万方数据库、PubMed数据库中检索相关文献,检索时限为2001年1月至2019年1月。检索的中文主题词为“椎间盘退变,细胞治疗,干细胞,细胞移植”;英文主题词为“stem cell,intervertebral disk degeneration”,筛选内容与干细胞治疗椎间盘退变相关的文献,着重选取最新的实验及临床研究成果。结果与结论:椎间盘退变主要以髓核细胞的活力和数量减少、蛋白多糖合成减少、髓核脱水以及代谢废物增多引起的。不断深入了解探索细胞移植促进髓核再生的治疗机制,不仅能够对椎间盘的发病及修复机制有更为详尽的认识,更能够对其他相关疾病的预防与细胞治疗提供新的思路与策略。