JAK2/STAT3信号通路介导薯蓣皂苷元对骨性关节炎软骨细胞代谢的影响

目的：在小鼠骨性关节炎（OA）模型中观察薯蓣皂苷元（Dgn）通过酪氨酸蛋白激酶2／信号转导子和转录激活子3（JAK2／STAT3）信号通路对软骨细胞代谢和线粒体抗氧化应激能力的影响，以及Dgn在此过程中的作用。方法：15只C57BL／6小鼠随机分为健康对照组、模型对照纽和Dgn组，相应处理4周后取材，采用免疫组织化学法观察各组大体标本形态学变化，电子显微镜下观察软骨组织超微结构变化。将模型对照组培养软骨细胞随机分为四组：①模型对照组；②Dgn组；@Dgn＋阻断剂组；④阻断剂对照组。运用蛋白质印迹法检测各纽软骨细胞中P-JAK2、p-STAT3、Bax、琥珀酸脱氢酶（SDH）和细胞色素C氧化酶（COX）蛋白表达，并用比色法测定线粒体中超氧化物歧化酶（SOD）的含量及活性。结果：软骨组织形态学方面，模型对照组软骨细胞变化最明显，Dgn组细胞形态维持较好，软骨细胞膜完整；电镜下观察发现，模型对照组软骨组织标本表面损伤较为严重，而Dgn组软骨组织标本表面平整。与模型对照组比较，Dgn组p-JAK2、PSTAT3蛋白表达水平上升（均P〈0．05），Bax蛋白表达水平降低（P〈0．05），SDH、COX蛋白表达水平、SOD含量均较模型对照组增加（均P〈0．05）；而与Dgn组比较，Dgn＋阻断剂组P．JAK2和P-STAT3蛋白的表达减少，Bax蛋白表达增加，SDH、COX蛋白表达水平及SOD含量降低（均P〈0．05）。结论：JAK2／STAT3信号通路与OA软骨细胞病理变化密切相关。Dgn可以通过激活JAK2／STAT3通路，有效减轻OA病理过程中软骨细胞的线粒体氧化应激损伤和细胞凋亡，发挥对OA软骨细胞的保护作用。

姜黄素通过调节Wnt/β-catenin信号通路促进软骨细胞增殖的研究

【目的】探讨姜黄素通过Wnt/β-catenin信号通路对软骨细胞增殖的影响。【方法】取4周龄雌雄新西兰大白兔各1只,采用酶消化法构建体外软骨细胞培养体系;应用形态学观察、甲苯胺蓝染色方法进行细胞形态学鉴定;采用细胞计数试剂盒法(CCK-8法)检测不同浓度姜黄素给药24 h后对软骨细胞增殖的影响;将终浓度为5μmol/L、10μmol/L的姜黄素分别作用于软骨细胞12 h、24 h后,采用Western blot法检测Wnt/β-catenin信号通路中Wnt 2、GSK-3β、β-catenin蛋白表达情况。【结果】当姜黄素的浓度为10μmol/L时,姜黄素对软骨细胞的促增殖作用最为明显。姜黄素能够促进Wnt/β-catenin信号通路中Wnt 2及β-catenin蛋白表达量,且10μmol/L组较5μmol/L组、24 h组较12 h组的表达量更高,24 h两浓度组与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),但12 h的两浓度组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),而GSK-3β结果则正好与上述2种蛋白表达结果相反。【结论】姜黄素对软骨细胞具有一定的保护作用,是中药姜黄发挥抗骨关节炎作用的有效成分之一。

成人脂肪来源干细胞定向诱导分化为软骨细胞的实验研究

【目的】诱导脂肪组织来源干细胞（ADSCs）定向分化为软骨细胞并进行鉴定，为软骨组织工程获取大量种子细胞做准备。【方法】对患者抽脂术的脂质部分进行分离培养及传代，采用四氮唑复合物（MTT）法测定细胞活性并描绘细胞增殖曲线，通过流式细胞仪将培养的细胞行干细胞鉴定，将第4代的ADSCs向软骨细胞定向诱导分化并行阿新蓝染色鉴定；免疫组化检测成软骨方向诱导后的ADSCsⅡ型胶原的表达。【结果】ADSCs体外增殖速度快，并且保持稳定的倍增率直至13—15代；流式细胞仪分析提示该细胞具有干细胞特性；通过定向分化技术，ADSCs可向软骨细胞分化，阿新蓝染色及Ⅱ型胶原表达均呈阳性，说明定向分化后的细胞具备正常软骨细胞的功能。【结论】成功诱导ADSCs向软骨细胞定向分化，为软骨组织工程提供了可靠的种子细胞。