兔髁状突软骨细胞藻酸盐凝胶三维培养体系的建立

目的 :建立兔髁状突软骨细胞的藻酸盐凝胶三维培养体系。方法 :利用机械与酶消化的方法获得均一性的兔髁状突软骨细胞 ,在二维贴壁培养条件下增殖至P2代 ;将P2代细胞高密度条件下转入藻酸盐凝胶培养介质 ,进行三维培养 ;分别对培养细胞凝胶微球行石蜡包埋与树脂包埋切片 ,对三维培养条件下的软骨细胞行组织化学、免疫组织化学检测和超微结构观察。藻酸盐凝胶三维体系培养 6周后 ,以EDTA分解凝胶 ,收获培养的软骨细胞 ,免疫组化法检测三维体系中收获的软骨细胞的蛋白合成能力。结果 :藻酸盐凝胶三维培养体系中的髁状突软骨细胞生长状态良好 ;培养 6周后从凝胶体系中收获细胞的软骨特异性功能蛋白表达水平较转入三维体系前未见降低 ,培养细胞保持了良好的分化表型。结论 :成功地建立了髁状突软骨细胞的藻酸盐凝胶三维培养体系 ,在该体系中 ,软骨细胞生长状态与功能蛋白分泌能力良好。