细胞-支架复合体构建及其异体移植修复关节软骨缺损的形态学观察

目的 探讨应用组织工程技术进行异体移植修复关节软骨缺损的有效性和可行性。方法 采用动态倒置显微镜与扫描显微镜观察及大体、组织学和免疫组织化学观察方法 ,以优化获取的单层传代培养幼兔关节软骨细胞及结构与性能优化的CPPf(Calciumpolyphosphatefibers ,CPPf) /PLLA (poly L lacticacid ,PLLA)自制支架复合材料 ,进行细胞 支架复合体体外构建与培养及其异体移植修复关节软骨缺损的病理形态学实验研究。结果 将适宜密度培养细胞种植于支架材料中 ,细胞密集 ,分布均匀 ;经一定时间体外培养 ,其种植细胞与支架材料粘附、生长繁殖并分泌细胞外基质 ;支架材料保持培养前的外形与内部微结构。其细胞 支架复合体异体移植修复关节软骨缺损的病理形态学特征为 :①修复后的关节面光滑 ,与周围组织整合良好 ;②软骨细胞呈柱状排列 ;③Ⅱ型胶原及硫化糖胺多糖在空间上分布均匀 ;④软骨下板得以重建 ;⑤修复组织与其下方骨质紧密结合 ;⑥支架材料逐渐降解吸收。结论 应用细胞 支架复合体异体移植进行关节软骨缺损修复 ,具有种植细胞来源广泛、可根据缺损大小和形状设计支架外形、使缺损完全生物学再生修复的优点。这一组织工程技术为关节软骨缺损完全再生修复提供了一条新的有效途径。

羟基丁酸-羟基辛酸共聚物/脱细胞软骨基质复合支架的制备与体外降解

背景:羟基丁酸-羟基辛酸共聚物具有高生物相容性和降解性,但单一材料无法满足组织工程支架的要求。脱细胞软骨基质是制备复合支架的常用材料,具有良好的生物相容性和无抗原性等优点。目的:将羟基丁酸-羟基辛酸共聚物、脱细胞软骨基质以不同比例混合制备复合支架,观察其体外降解速率。方法:取新鲜猪关节软骨,用含有双抗的PBS液浸泡,放入含有苯甲基磺酰氟的tri-HCl缓冲液,加入DNase酶和RNase酶,用D-Hank’s液冲洗等步骤制备脱细胞软骨基质。采用溶剂浇注-颗粒沥滤的方法与羟基丁酸-羟基辛酸共聚物按不同浓度混合,制备出不同比例的复合支架。结果与结论:脱细胞软骨基质的比例不同,复合材料的完全降解时间也不同,8%含量的脱细胞软骨基质最符合软骨组织工程支架的要求。

兔骨髓间充质干细胞/壳聚糖-胶原支架复合体构建软骨组织工程支架

背景:软骨组织工程的核心是利用少量的细胞经体外培养、扩增后,在一定环境下附着在三维多孔支架上,再将细胞/支架复合体移植到体内形成新的组织。目的:拟构建兔骨髓间充质干细胞/壳聚糖-胶原支架复合体,探讨该支架作为软骨组织工程支架的可行性。设计、时间及地点:细胞-支架学体外观察,于2008-03/2009-02在武警医学院生物化学教研室完成。材料:日本大耳白兔6只用于分离培养骨髓间充质干细胞。医用壳聚糖粉末为山东奥康生物科技有限公司产品。Ⅰ型胶原为Sigma公司产品。方法:取3%的壳聚糖和2%的胶原混合的醋酸溶液,倒入72孔板内,-20℃预冷冻10h,冻干机冷冻抽干24h制作成壳聚糖-胶原支架。取第3代兔骨髓间充质干细胞,以1×109L-1密度接种于支架内,构建细胞/支架复合体。主要观察指标:傅里叶红外光谱、扫描电镜、液体置换法测定支架的理化性质,观察三维培养后细胞在支架上的生长情况。结果:壳聚糖-胶原支架孔径为160～380μm,平均为270μm,孔相通性好,支架孔隙率为(86.00±5.12)%。傅里叶红外光谱仪测定数据表明复合支架组成物有典型的壳聚糖、胶原峰,未发现有聚乙二醇峰。细胞/支架共培养24,48,72h后,骨髓间充质干细胞可渗入支架多孔结构内,并黏附在支架上成簇生长,部分细胞已与支架融合。结论:壳聚糖-胶原支架基本符合软骨组织工程支架要求,能够作为种子细胞的承载体。

耳内镜下耳屏软骨-软骨膜复合体修补鼓膜大穿孔的疗效观察

目的分析耳内镜下耳屏软骨-软骨膜复合体修补鼓膜大穿孔的疗效。方法选取60例(60耳)实施耳内镜手术修补鼓膜大穿孔的患者,随机分为对照组和实验组各30例,其中对照组采用耳屏软骨膜修补,实验组采用耳屏软骨-软骨膜复合体修补。所有患者术后1、3、6个月复查,对比分析两组患者鼓膜愈合情况及听力改善情况,听力观察指标主要0.5、1、2、4 kHz的气导、骨导听力。结果(1)实验组鼓膜愈合率96.7%(29/30),对照组86.7%(26/30),实验组鼓膜愈合率高于对照组,但差异并无统计学意义(χ^(2)=0.873,P=0.350);(2)两组患者比较术前与术后6个月平均气导听阈及气骨导差,差异有统计学意义(P<0.05)。结论经外耳道入路的耳内镜手术符合微创治疗理念,耳屏软骨-软骨膜复合体是可靠的自体修补材料,术后能达到较好的鼓膜愈合状态,并获得良好的听力提高,是一种可靠的鼓膜大穿孔修补手术的方法选择,值得临床应用推广。

羟基丁酸-羟基辛酸共聚体/脱细胞软骨基质支架的细胞黏附性

背景:羟基丁酸-羟基辛酸共聚体[poly(hydroxybutyrate-co-hydroxyoctanoate),PHBHOx]是一种新型的多聚羟基烷酸类材料,具有优良的可塑性、生物相容性、生物可降解性等性能,但同其他酯类材料相似,PHBHOx亲水性能较差,单纯PHBHOx材料支架细胞黏附性能明显不足。目的:观察羟基丁酸-羟基辛酸共聚体/脱细胞软骨基质支架的细胞黏附性。方法:取新鲜猪膝关节表面透明软骨,采用非离子型去污剂TritonX-100、低渗Tris-HCl以及Dna酶和Rna酶等进行脱细胞处理。低温粉碎后与PHBHOx以不同比例复合,采用溶剂浇铸-颗粒沥滤技术制备支架。分离培养猪关节软骨细胞,进行细胞-支架黏附实验并通过MTT比色法和扫描电镜观察软骨细胞在支架上的黏附存活情况。结果与结论:PHBHOx/脱细胞软骨基质支架的细胞黏附率较对照组显著提高,软骨细胞在支架上黏附紧密,生长良好。提示复合脱细胞软骨基质可以明显提高单纯PHBHOx支架的细胞黏附性能。

骺板软骨细胞复合三维支架体外构建组织工程软骨的研究

目的 探讨将骺板软骨细胞复合三维支架经体外培养 ,构建组织工程软骨的效果及其生物学特点。 方法 将 3周龄幼兔第 1代骺板软骨细胞与液态的生物凝胶混合 ,接种于聚磷酸钙纤维 /L -聚乳酸 (CPPF/PL L A)三维支架材料 ,构建组织工程软骨组织块 ,连续培养 4周。行大体、倒置显微镜及组织学、 型和 型胶原免疫组织化学光镜观察 ,定量检测硫酸糖胺多糖 (GAG)含量。 结果 构建的组织工程软骨块在培养过程中能保持其初始外形 ,种子细胞呈稳定的三维均相分布 ,外观逐渐呈乳白色、半透明 ,硬度亦不断增加。培养 1周有软骨细胞陷窝形成 ,2周后形成富含 型胶原和蛋白聚糖、具有典型软骨组织结构的工程化软骨 ,且 型胶原逐渐转为阴性。 4周时构建软骨的组织结构与天然骺板软骨相类似 ,硫酸 GAG含量平均为天然骺板软骨的 34%以上。 结论 骺板软骨细胞复合三维支架体外培养可生成典型软骨 ,且可形成类似天然骺板软骨的组织结构 ,能满足修复骺板缺损的基本要求。体外培养 1～ 2周可能是植入体内修复骺板缺损的较佳时机。

纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架与诱导骨髓间充质干细胞体外构建软骨支架复合体

背景:国内外许多研究通过不同的构建方法构建组织工程化软骨支架复合体修复骨软骨联合缺损,且取得了一定的进展,但目前各种方法存在的问题突出表现为组织工程化的软骨和骨组织之间的界面、移植体和宿主骨和软骨之间的界面耦合不够理想。目的:将体外提纯、扩增的骨髓间充质干细胞诱导成软骨细胞,将其接种于穿"靴"的纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架的底部上联合培养,探索其用于组织工程软骨复合体的可行性。设计、时间及地点:细胞和材料复合的体外观察实验,于2008-03/07在暨南大学附属第一医院中心实验室和暨南大学理工学院材料系实验室完成。材料:通过原位复合和冷冻干燥结合的方法制备纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架。健康新西兰兔10只由广东省医学实验动物中心提供。方法:密度梯度离心法提取分离骨髓间充质干细胞,软骨诱导液诱导骨髓间充质干细胞2周后甲苯胺蓝染色检测。把诱导得到的软骨细胞接种于穿"靴"的纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架的底部,将细胞-支架复合物置入成软骨条件培养液中培养2周。主要观察指标:倒置相差显微镜下观察细胞形态特征,鉴定CD29,CD44,CD34和CD45抗原的表达,观察细胞生长特性,测定细胞活力和生长周期,扫描电镜观察纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架结构和细胞与支架的复合情况。结果:骨髓间充质干细胞可在体外分离扩增,表达CD29和CD44,不表达CD34和CD45,细胞活力为95.27%,G0～G1期细胞占94.68%。经软骨诱导液诱导后骨髓间充质干细胞转化成软骨细胞;制备的纳米羟基磷灰石/壳聚糖多孔支架孔隙率为90%,平均孔径为150μm,与软骨细胞有较好的黏附性。结论:初步证实纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架与骨髓间充质干细胞诱导成的软骨细胞复合可以在体外构建组织工程软骨复合体。

同种异体脂肪源性间充质干细胞复合β-磷酸三钙支架修复兔桡骨大段骨缺损

目的探讨以β-磷酸三钙(β-tricalcium phosphate,β-TCP)陶瓷为支架材料复合兔脂肪源性间充质干细胞(rabbit adipose-derived mesenchymal stem cells,rADSCs)构建组织工程骨修复骨缺损的可行性。方法将体外培养的rADSCs接种于β-TCP支架上,构建rADSCs/β-TCP骨组织工程复合体,并进行体外培养。将24只新西兰大白兔在双侧桡骨中下段造成2cm长度的节段性骨缺损模型,随机平均分为3组,A组:空白对照组,不植入任何材料;B组:单β-TCP人工骨对照组;C组:rADSCs/β-TCP复合体实验组。在手术后2周、4周、6周和8周时进行X线检查,然后每组各选2只兔处死后取出标本,对标本进行大体观察以及常规HE染色,光镜下观察骨修复情况,并观察是否发生免疫排斥反应。结果 rADSCs在适当的诱导条件下具有成骨细胞分化潜能,复合β-TCP后对其生长分化无影响。X线检查结果发现,A组有稍多的骨组织形成,未见髓腔及正常骨影像学表现;B组虽然骨连接性基本恢复,但骨髓腔尚未完全再通;C组骨连接性完全恢复,骨缺损基本修复,骨髓腔再通。术后4周,C组可观察到骨缺损周围开始形成新生骨,并随着时间的延长新生骨量逐渐增多。术后6周,材料逐渐降解,材料孔隙内有新生骨长入。术后8周,C组材料降解明显,材料孔隙基本消失,髓腔已基本再通;B组部分骨髓腔再通,而A组未发现骨髓腔再通。新生骨组织面积比较,各时间点C组的面积最大,且其差异有统计学意义。组织学检测未见免疫排斥现象。结论 rADSCs在适当的诱导条件下具有成骨细胞分化潜能。ADSCs有望成为理想的修复骨缺损、促进骨折愈合的组织工程骨所需要的种子细胞,为大段骨缺损组织工程的修复提供可行的技术方案,为临床治疗大段骨缺损提供新的方法。

负载TGF-β_1微球的壳聚糖-丝素支架复合骨髓间充质干细胞修复兔关节软骨缺损的实验研究

目的研制负载转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)壳聚糖微球的壳聚糖-丝素支架复合骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)体外构建组织工程软骨,观察将其移植修复兔膝关节软骨缺损的效果。方法通过密度梯度离心法及贴壁培养法分离纯化MSCs,以抗兔CD14、CD44等单抗采用流式细胞仪进行MSCs表面抗原鉴定,获得纯化的MSCs。采用乳化交联法获得包裹TGF-β1壳聚糖缓释微球,并将该微球负载在冷冻干燥获得的壳聚糖-丝素支架上。将培养的MSCs种植到支架上,体外构建组织工程软骨,移植到兔关节软骨缺损处。移植空白支架的为实验对照组,移植体外构建的组织工程软骨为实验组。主要观察指标,流式检测的MSCs细胞表面标记情况,微球的形态,支架与细胞共培养后电镜下情况,支架移植后的兔关节修复情况及组织学检查。结果流式检测MSCs第4代及第9代细胞的CD14及CD44表面抗原的表达情况发现两代MSCs CD14表达基本呈阴性,CD44表达呈阳性,符合间充质干细胞的特性。扫描电镜观察所制备的微球基本呈球形,表面光滑,直径约为1μm,大小较均一,分散度好。细胞在壳聚糖-丝素三维支架上生长状态良好,电镜观察,可见支架孔隙内有细胞黏附生长。移植治疗后发现实验组修复明显好于对照组,实验组术后3个月实验组已经有较硬的类软骨组织填充修复,切片显示有软骨细胞规则排列,甲苯胺蓝染色为阳性,而对照组仅为纤维组织修复,切片显示为纤维组织或纤维软骨组织修复,软骨细胞排列紊乱,甲苯胺蓝染色阴性或弱阳性。结论负载TGF-β1壳聚糖微球的壳聚糖-丝素支架复合骨髓间充质干细胞体外复合培养后移植治疗修复兔膝关节软骨缺损,具有较好的疗效。

nHA-PLGA支架材料与兔软骨细胞体外培养的生物相容性研究

目的研究新型多孔复合支架材料纳米羟基磷灰石(nHA)-聚乳酸羟基乙酸共聚物(PLGA)的生物相容性,探讨其作为骨组织工程支架的可行性。方法将胎兔膝关节软骨细胞接种于制备的nHA-PLGA复合支架上,体外共同培养后采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测软骨细胞增殖活性,倒置荧光显微镜、扫描电镜观察支架材料表面和孔隙内软骨细胞黏附情况,流式细胞术检测软骨细胞周期情况。结果实验组(A组)复合支架材料上细胞增殖活性与空白对照组(B组)相比,无统计学差异(P>0.05);倒置荧光镜、扫描电镜观察显示A组细胞在复合支架材料表面和孔隙内大量黏附、生长,其数量随着共培养时间增加呈几何级增长;流式细胞仪检测显示A组与B组细胞周期差异无统计学意义(P>0.05)。结论 nHA-PLGA多孔复合支架生物相容性好,是一种性能良好的骨组织工程支架材料。

血清长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18、微小RNA-185-5p水平与老年2型糖尿病周围神经病变的关系

目的探究血清长链非编码RNA(LncRNA)人类白细胞抗原复合体18(HCG18)及微小RNA-185-5p水平与老年2型糖尿病(T2DM)周围神经病变(DPN)的关系及其预测价值评估。方法以2020年3月至2021年8月保定市第一中心医院收治的老年T2DM患者为研究对象,选择其中发生周围神经病变的75例患者为DPN组,选择未发生周围神经病变的82例患者为非DPN组。血清LncRNA HCG18、miR-185-5p的水平通过实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)进行检测;相关性通过Pearson法进行分析;T2DM合并DPN的影响因素通过多因素logistic回归进行分析;受试者操作特征曲线分析血清LncRNA HCG18、miR-185-5p对T2DM患者发生DPN的诊断价值。结果DPN组患者血清LncRNA HCG18水平高于非DPN组,血清miR-185-5p水平低于非DPN组,组间差异有统计学意义(P<0.05)。DPN组患者血清LncRNA HCG18与miR-185-5p水平呈显著负相关(r=-0.407,P<0.001)。多因素logistic回归分析显示,LncRNA HCG18、miR-185-5p为T2DM合并DPN发生的影响因素(P<0.05)。血清LncRNA HCG18、miR-185-5p对T2DM患者发生DPN预测的曲线下面积分别为0.841(95%CI 0.775~0.906)、0.857(95%CI 0.793~0.922)。结论老年DPN患者血清LncRNA HCG18水平升高,miR-185-5p水平降低,对老年T2DM患者发生DPN有一定的诊断价值。

胶原-壳聚糖复合支架体外三维培养神经干细胞

采用冷冻干燥法制备了胶原-壳聚糖复合支架并通过层粘连蛋白（LN）进行结构修饰，测定其物理性能特征，建立了胎鼠海马神经干细胞（NSCs）的三维培养体系，同时考察了NSCs与胶原-壳聚糖复合支架的生物相容性．孔径、孔隙率、吸水率、降解率等参数的比较表明，体积比为7：3的复合支架更适合于体外细胞培养的要求，并且NSCs在经LN修饰后支架材料上的接种率得到明显提高；激光共聚焦显微镜及扫描电镜观察表明，NSCs能够在胶原-壳聚糖复合支架内良好地生长、增殖及分化．这些结果为NSCs的进一步临床移植应用，以及治疗神经系统疾病的新药筛选和机理研究等奠定了坚实的实验基础．

自体释氧纳米仿生支架复合软骨细胞构建颞颌关节

背景:将自体释氧纳米仿生支架复合软骨细胞在模拟微重力下复合培养构建的活性组织工程骨,不仅具有优良成骨的潜在特性,而且具有自体释氧功能,能有效防止早期血管化不足缺氧导致的移植失败。目的:观察自体释氧纳米仿生支架复合软骨细胞修复不同类型颞颌关节髁状突骨折的效果。方法:将30只SD大鼠随机分为3组,每组10只,其中1组为正常对照,实验1组建立颞颌关节髁状突纵行骨折模型,植入自体释氧纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架与软骨细胞;实验2组建立颞颌关节髁状突横断骨折模型,植入自体释氧纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架与软骨细胞。植入后1,3,6周,采用免疫荧光法检测增殖细胞核抗原阳性细胞数,使用TUNEL法检测软骨细胞凋亡情况,采用RT-PCR方法检查软骨内成骨标志物Ⅱ型胶原、促软骨形成基因、血管内皮生长因子的表达。结果与结论:(1)实验1组、实验2组不同时间点的增殖细胞核抗原阳性细胞数高于正常对照组(P<0.05),植入后3,6周的软骨细胞凋亡数低于正常对照组(P<0.05),植入后3,6周的Ⅱ型胶原、促软骨形成基因、血管内皮生长因子表达高于正常对照组(P<0.05);(2)实验1组植入后3,6周的增殖细胞核抗原阳性细胞数低于实验2组(P<0.05),植入后3周的软骨细胞凋亡数低于实验2组(P<0.05),植入后3,6周的Ⅱ型胶原、促软骨形成基因、血管内皮生长因子表达高于实验2组(P<0.05);(3)结果表明:自体释氧纳米仿生支架复合软骨细胞修复不同类型颞颌关节髁状突骨折有着一定的差异性。

兔骨髓间充质干细胞与异体脱细胞耳软骨支架的体外复合(英文)

背景:耳软骨作为脱细胞基质可选择的支架,进行脱细胞处理可去除了软骨细胞的抗原性,从而与种子细胞具有良好的相容性。目的:体外提取、培养兔骨髓基质干细胞,并与异体脱细胞耳软骨支架复合,观察其生物相容性。方法:提取兔骨髓间充质干细胞行体外培养,诱导为软骨细胞,以胰蛋白酶-曲拉通联合法获得脱细胞软骨支架,将两者于体外复合,10d后复合支架固定行组织学染色及扫描电镜观察。结果与结论:兔骨髓间充质干细胞体外诱导14d可形成软骨细胞,Ⅱ型胶原免疫细胞化学示胞浆呈棕黄色;兔耳软骨脱细胞基质呈乳白色,组织学染色及扫描电镜观察示经脱细胞后支架孔隙均匀,结构完整,仍保存大量酸性黏多糖及胶原成分。其孔径长度(33.70±4.33)μm,孔隙率(65.23±7.35)%。复合支架组织学染色及扫描电镜示两者黏附良好,并伴有多量基质分泌。说明兔骨髓间充质干细胞诱导为软骨细胞与异体脱细胞耳软骨有良好的生物相容性。

核分裂周期蛋白80复合体通过上皮-间充质转化对乳腺癌细胞侵袭和转移的作用

目的探究核分裂周期80(NDC80)复合体通过上皮-间充质转化(EMT)对乳腺癌细胞侵袭和转移的作用。方法集取100例乳腺癌的癌旁组织及癌组织,分析癌组织组及癌旁组织组的NDC80、E-cadherin表达,且培养乳腺癌MDA-MB-231细胞,并转染分别为si-NC、si-NDC80、si-E-cadherin;通过RT-PCR法检测mRNA表达,通过Western Blot法对相关蛋白的表达进行测定,通过MTT法、流式细胞仪、划痕实验、Transwell试验对细胞的凋亡、增殖、侵袭及转移予以测定。结果癌组织组的NDC80、E-cadherin表达高于癌旁组织组,差异有统计学意义(P<0.05)。si-NDC80组的NDC80及24、48、72 h细胞增殖率、细胞侵袭数、细胞迁移数低于si-NC组,凋亡率高于si-NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。si-E-cadherin组的凋亡率高于si-NC组,细胞迁移数、细胞侵袭数、E-cadherin表达及24、48、72 h细胞增殖率低于si-NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论NDC80复合体通过调控EMT表达,可有效改善乳腺癌细胞的侵袭、增殖、转移及凋亡,以减缓病情的发展。

自体肋软骨移植构建鼻尖支架复合体的鼻尖成形术

目的探究自体肋软骨移植构建鼻尖支架复合体鼻整形术对鼻尖肥大患者鼻部创口愈合及鼻尖部外形的影响。方法选择我院2022年1月-2023年6月收治的鼻尖肥大患者30例作为研究对象。均采用自体肋软骨移植构建鼻尖支架复合体鼻整形术治疗。分析术后相关指标,对比手术前后鼻尖部外形,分析并发症发生情况。结果患者手术时间为(62.97±4.92)min,创口愈合时间为(8.34±1.28)d。术后鼻长、鼻尖高度大于术前,鼻尖两顶间距离小于术前(P<0.05)。30例患者出现肿胀及感染各1例,发生率为6.67%(2/30)。结论自体肋软骨移植构建鼻尖支架复合体鼻整形术均可有效治疗鼻尖肥大,且均获得理想的鼻尖部外形,预后情况良好,安全可靠,值得推广应用。

耳内镜下耳屏软骨-双面软骨膜复合体在鼓膜大穿孔修复中的应用

目的 探讨耳内镜下采用耳屏软骨-双面软骨膜复合体修复鼓膜大穿孔中的应用价值。方法 纳入2021年1月至2023年1月鼓膜大穿孔患者79例(79耳),随机分为观察组(采用耳屏软骨-双面软骨膜复合体行鼓膜修复)40例和对照组(采用颞肌筋膜行鼓膜修复)39例,所有患者均采用内植法Ⅰ期完成手术,术后3个月复查纯音听阈及耳内镜,比较两组患者鼓膜愈合率、愈合形态及听力改善情况。结果术后3个月复查耳内镜,观察组鼓膜愈合率100%,对照组愈合率92.31%。观察组鼓膜形态比对照组更好。术后3个月复查听力学检查,观察组治疗前后气骨导差分别为(22.09±3.71)dB HL、(10.06±2.68)dB HL,差异有统计学意义(P<0.05);对照组治疗前后气骨导差分别为(21.79±5.83)dB HL、(10.58±3.37)dB HL,差异有统计学意义(P<0.05),两组患者治疗后气骨导差比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 耳内镜下采用耳屏软骨-双面软骨膜复合体修复鼓膜大穿孔能降低术中取材难度、提高术后听力,是一种可靠的修复材料,值得在临床推广应用。

长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18通过微RNA-497-5p/细胞周期蛋白E1轴调节弥漫性大B细胞淋巴瘤的增殖、凋亡和侵袭

目的 探讨长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18(lncRNA HCG18)调控微RNA-497-5p(miR-497-5p)/细胞周期蛋白E1(CCNE1)轴对弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白质印迹法分别检测2018年5月至2021年5月收集的恩施土家族苗族自治州中心医院DLBCL病人淋巴组织、良性淋巴结增生病人的淋巴组织、人正常B细胞永生化细胞HMy2.CIR、DLBCL细胞系SU-DHL-1、OCI-LY8、U2932中HCG18、miR-497-5p表达及CCNE1蛋白表达,将OCI-LY8细胞分为Ct组(正常培养的OCI-LY8细胞)、pcDNA组(细胞转染过表达物阴性对照)、pcDNA-HCG18组(细胞转染HCG18过表达物)、si-NC组(细胞转染小干扰RNA阴性对照)、si-HCG18组(细胞转染HCG18小干扰RNA)、si-HCG18+inhibitorNC组(细胞转染HCG18小干扰RNA和抑制物阴性对照)、si-HCG18+miR-497-5p inhibitor组(细胞转染HCG18小干扰RNA和miR-497-5p抑制物),CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell检测细胞侵袭,蛋白质印迹法检测CCNE1、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达,双萤光素酶验证HCG18与miR-497-5p、miR-497-5p与CCNE1的关系。结果 在DLBCL淋巴组织和细胞中,HCG18、CCNE1蛋白高表达,miR-497-5p低表达,且在OCI-LY8细胞中HCG18、CCNE1蛋白表达上调最高,miR-497-5p表达下调最多(P<0.05),因此,以OCI-LY8细胞进行后续研究,与si-NC组比较,si-HCG18组HCG18(0.26±0.03比1.01±0.01)、CCNE1蛋白(0.45±0.03比1.44±0.19)表达降低,miR-497-5p(1.95±0.14比1.03±0.02)表达升高(P<0.05),与pcDNA组比较,pcDNA-HCG18组HCG18(1.96±0.23比1.02±0.01)、CCNE1蛋白(2.33±0.21比1.42±0.18)表达升高,miR-497-5p(0.28±0.02比1.02±0.02)表达降低(P<0.05),与siHCG18组、si-HCG18+inhibitor NC组比较,miR-497-5p表达降低(1.21±0.09比1.95±0.14、1.94±0.13),CCNE1蛋白(0.87±0.08比0.45±0.03、0.44±0.04)表达上调(P<0.05),沉默HCG18可抑制OCI-LY8细胞增殖、侵袭行为及PCNA、MMP-9蛋白表达,诱导细胞凋亡及Bax蛋白表达,而上调HCG18则呈相反趋势,下调miR-497-5p逆转了沉默HCG18对OCI-LY8细胞增殖、侵袭、凋亡的影响,HCG18靶向调控miR-497-5p/CCNE1。结论 沉默HCG18可能通过调控miR-497-5p/CCNE1抑制OCI-LY8细胞增殖、侵袭,诱导细胞凋亡。

改性聚乳酸-羟基乙酸/Ⅰ型胶原复合支架与兔耳软骨细胞的细胞相容性

背景:聚乳酸-羟基乙酸是一种应用前景较好的细胞支架材料,其亲水性和细胞亲和性较差,因此对其改性很有必要。目的:观察改性聚乳酸-羟基乙酸/I型胶原复合支架的亲水性及与兔耳软骨细胞的细胞相容性。方法:利用多聚赖氨酸对聚乳酸-羟基乙酸改性后与I型胶原构成改性复合支架,倒置显微镜下观察支架的大体结构。将改性复合支架(实验组)与聚乳酸-羟基乙酸支架(对照组)分别浸泡在双蒸水中,间隔0.5,1,2,4,8,12,24h后计算吸水率。用酶消化法培养兔耳软骨细胞并传代,取第2代软骨细胞,浓度为1×1011L-1接种在两种支架上并培养,倒置显微镜下观察细胞的形态和生长情况,采用细胞计数法计算细胞接种24h后支架对细胞的吸附率;以及采用细胞增殖法(MTT比色试验)分别于1,2,4,6d测细胞吸光度值。结果与结论:改性复合支架具有高孔隙率,表面粗糙度较对照组增加。两种支架吸水率在相同时间点比较差异有显著性意义(P<0.01),说明改性复合支架具有较好的亲水性。第2代软骨细胞接种后24h,实验组对细胞的吸附率为0.9080±0.0192,对照组为0.7332±0.0475,两组比较差异有显著性意义(P<0.05),说明改性复合支架具有较好的细胞亲和性。软骨细胞在实验组和对照组支架上接种培养后1,2,4,6d吸光度值比较,差异均有显著性意义(P<0.05),说明改性复合支架对细胞增殖有显著的促进作用。

搭载淫羊藿苷聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA-ICA)复合支架对兔软骨细胞的影响

目的 本课题探究搭载不同浓度淫羊藿苷的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA-ICA)复合支架对兔软骨细胞的影响,阐明了其作为骨关节炎潜在治疗手段的可能性。方法 本研究将淫羊藿苷和PLGA以不同比例混合,利用静电纺丝技术构建PLGA-ICA复合支架。利用扫描电镜(SEM)观察PLGA-ICA复合支架的表面形貌,测量支架及复合支架直径和接触角;与兔软骨细胞共培养,将细胞分为:空白对照组、0.01%ICA组、0.1%ICA组、1%ICA组、PLGA组、0.01%ICA+PLGA组、0.1%ICA+PLGA组、1%ICA+PLGA组,MTT法检测支架对兔软骨细胞的细胞相容性,并在培养24h后,荧光显微镜下观察兔软骨细胞的细胞黏附与扩散区域面积。结果 扫描电镜表明PLGA支架平均直径为1.58±0.16μm;复合纤维支架的平均直径分别为1.01μm±0.59μm、1.75μm±0.32μm、1.89μm±0.43μm。纯PLGA组的水接触角为88.32±4.57°,随着ICA的浓度增加,其接触角变化范围为82.58°±8.03°-71.25°±0.51°。MTT法检测表明与空白对照组相比,随着ICA的浓度自0.01%-1.00%上升,兔软骨细胞增殖的效果差异有统计学意义(P<0.05),与未进行任何处理的空白PLGA支架组相比,搭载了ICA的复合支架的兔软骨细胞随ICA浓度增加(0.01%-1%)兔软骨细胞增殖的效果差异有统计学意义(P<0.05)。24h后荧光显微镜观察发现与空白对照组相比,随着ICA的浓度自0.01%-1%上升,兔软骨细胞粘附数量明显增加(P<0.05);随着ICA的浓度自0.01%-1%上升,兔软骨细胞复合支架中培养的细胞其扩散区域比单纯PLGA支架的细胞扩散区域增加(P<0.05)。结论 PLGA-ICA复合支架能够促进兔软骨细胞的增殖,在骨关节炎的治疗中有潜在应用价值。