人腰椎黄韧带Ⅰ和Ⅱ型胶原基因表达随增龄发生软骨骨化的验证:特异性与客观性

目的:运用特异性探针观察不同年龄组黄韧带Ⅰ和Ⅱ型胶原基因表达分布、强度及随增龄而发生的变化,采用客观图像分析验证黄韧带退行性变和骨化增龄性变假说。方法:实验于2003-08/2004-08在第二军医大学长征医院中心实验室完成。21块腰椎黄韧带标本取自椎间盘突出症和椎管狭窄行后路椎板减压术患者,对照组标本取自4例青少年腰椎骨折行后路椎板减压术患者。提供标本患者均知情同意。椎间盘突出症和椎管狭窄患者的腰椎黄韧带标本按年龄分为4组:<20岁组、20～40岁组、41～60岁组和>60岁组。用Ⅰ和Ⅱ胶原cDNA探针,对不同年龄组的黄韧带冰冻切片进行原位杂交和图像分析,观察其Ⅰ型胶原表达(成纤维细胞基因表型)和Ⅱ型胶原表达(软骨细胞基因表型)。结果:①原位杂交组织切片观察:<20岁组黄韧带附着点处和体部纤维细胞排列规则,细胞呈梭形细胞数目较多,有明显的Ⅰ胶原表达,无Ⅱ型胶原表达信号;20～40岁组黄韧带细胞排列尚规则,细胞的数量相对减少,出现轻度纤维化,在黄韧带的附着点处有少量的Ⅰ和Ⅱ型胶原阳性表达信号;41～60岁组黄韧带体部细胞排列不规则,细胞的数量相对减少,出现明显纤维化,黄韧带体部无明显的阳性表达,黄韧带的附着点处有较弱的的Ⅰ型胶原阳性表达,阳性表达细胞分布不均匀,但Ⅱ型胶原的表达较41岁以下组表达增强;>60岁组黄韧带出现纤维化,未见Ⅰ型胶原阳性表达信号,黄韧带的附着点处Ⅱ型胶原阳性表达信号增强。②Ⅰ型胶原基因表达:<20岁组、20～40岁组、41～60岁组和>60岁组均显著高于对照组(1.53±0.18,1.34±0.16,0.86±0.13,0.71±0.21,0.51±0.11,P<0.01),随年龄增长表达逐渐减弱(P<0.05),但41～60岁组和>60岁组无显著差异(P>0.05)。Ⅱ型胶原基因表达:<20岁组、20～40岁组、41～60岁组和>60岁组均显著高于对照组(0.73±0.16,1.14±0.14,1.46±0.13,1.65±0.16,0.53±0.12,P<0.01),随年龄增长表达逐渐增强(P<0.05)。结论:Ⅰ和Ⅱ型胶原cDNA探针具有高度的特异性,随着年龄的增长,ⅠI型胶原表达逐渐减弱,在附着点处出现Ⅱ型胶原的表达增强,提示成纤维细胞基因表达逐渐减弱,而软骨细胞的基因表达逐渐活跃,为黄韧带退行性变和骨化提供了分子生物学依据。

大鼠功能性下颌前伸后髁突软骨骨化前后PLC-γ1的变化研究

目的探讨磷脂酶C-γ1(phospholipase C-γ1,PLC-γ1)在功能性下颌前伸后大鼠髁突后部软骨骨化过程中的作用机制。方法60只4周龄健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,适应性饲养1周,建立SD大鼠下颌前伸模型,随机等量分为2组,实验组24 h/d佩戴自制下颌前伸斜面导板矫治器,对照组不作处理。2组大鼠分别于戴用矫治器第1、3、7、14、21、28天时采用断颈法处死5只,取双侧髁突,常规固定、脱钙、脱水、包埋。石蜡切片采用HE染色观察其组织形态学变化,采用免疫组织化学方法结合图像分析检测PLC-γ1在髁突软骨后部的表达。结果第7、14、21、28天时实验组髁突软骨后部PLC-γ1表达的强度-色调-饱和度(intensity-hue-saturation,IHS)值高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);2组不同时间点PLC-γ1表达的IHS值差异无统计学意义(P>0.05)。结论PLC-γ1可能参与了功能性下颌前伸大鼠髁突软骨骨化的过程,检测其水平对髁突部软骨骨化的研究具有重要参考价值。

甲状软骨骨化3例观测研究

1 材料与测量 在收集 35套骨骼标本过程中,我们收集了 3例甲状软骨完全骨化的标本.骨化的甲状软骨表面为骨密质,内部为骨松质,并有骨小梁,用天平称量及游离卡标测量.

正常成人喉软骨骨化的X线观察(附676例分析)

研究正常喉软骨骨化，特别是关于性别和年龄方面的差异，对正常X线解剖学和X线诊断具有重要意义，关于喉软骨骨化的X线观察国外文献曾有报告（1－3），但国内尚无报道，本文就我国喉软骨骨情况进行了研究，着重观察了骨化形态及其在性别和年龄上的差异，同时研究其在临床应用上的意义。

斑马鱼软骨内骨化过程中骨骼的转录组测序分析

为研究斑马鱼(Danio rerio)骨骼发育时期关键调控基因及复杂的调控网络,采用阿尔辛蓝-茜素红双重染色方法对受精后50 d(day post fertilization,dpf)和65 dpf野生型斑马鱼骨骼进行染色,提取50 dpf和65 dpf斑马鱼骨骼的总RNA进行转录组测序,对差异表达基因进行筛选并进行GO功能注释和KEGG富集分析。结果表明:50 dpf斑马鱼头骨正在经历软骨内骨化,而65 dpf斑马鱼软骨内骨化过程基本完成;对50 dpf与65 dpf斑马鱼骨骼进行转录组测序,共产生41.44×109个有效数据,存在610个差异表达基因,相比50 dpf斑马鱼,65 dpf斑马鱼骨骼中软骨发育相关基因(dlx2a、foxd3和sec23b)、骨矿化调节基因(ptk2bb)、骨骼细胞分化正调控基因(dlx2a)均下调,表明其骨骼发育已较为成熟,骨细胞分化过程减少,与阿尔辛蓝-茜素红双重染色结果相一致;进一步对这些差异表达基因进行GO功能注释和KEGG富集分析,发现大部分差异表达基因与代谢网络、生殖信号通路相关;随机选取了6个差异表达基因进行实时荧光定量qRT-PCR验证,发现这些基因表达趋势与测序结果一致,这表明转录组测序结果真实可信。研究表明,鱼类与哺乳动物一样,其代谢、骨骼和生殖功能三者间存在密切联系,其内在机制为研究斑马鱼骨骼发育与疾病治疗提供了一个新的思路。

耳廓软骨骨化一例

患者男，25岁，因双耳廓逐渐僵硬8个月于2017年2月9日来我科就诊。患者8个月前发现双耳廓触之僵硬，失去正常耳廓柔韧性，无明显自觉症状，否认外伤、昆虫叮咬及冻伤史。既往体健，否认糖尿病、肾脏病及甲状腺疾病，无家族性遗传病及相似疾病史。

鹿茸的软骨内骨化及其调控机理的研究进展

对鹿茸软骨内骨化过程的组织学基础及调控机理进行了综述。鹿茸的骨化是在睾酮等一系列因素的影响下发生的软骨内骨化过程。这种骨化方式由膜内骨化转变而来,标志是角柄顶端软骨膜下出现连续的骨小梁。在整个生茸期内,软骨膜持续存在,通过附加增生来实现鹿茸的生长。发育到一定程度的肥大软骨细胞向细胞间质中分泌X型胶原纤维等,引起间质的钙化,进而骨组织替换软骨组织。

固骼生对体外培养鼠鼻中隔软骨细胞增殖及骨化的初步研究

目的探讨固骼生(45S5)对体外培养鼠鼻中隔软骨细胞增殖及向成骨细胞分化的促进作用。方法利用体外细胞培养技术建立孕21 d SD大鼠鼻中隔软骨细胞培养体系,根据培养基的不同分为实验组(培养基中放入45S51mg/ml)和空白对照组。在倒置相差显微镜下观察细胞生长状态;采用MTT染色法检测软骨细胞增殖变化;第8、12、15、18d取材分光比色检测碱性磷酸酶(ALP);第13d透射电镜下观察45S5周围软骨细胞基质的钙化等成骨指标变化。结果实验组软骨细胞增殖明显高于对照组;第12、15d ALP的分泌明显高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05);第13d透射电镜下可观察测45S5周围软骨细胞基质的钙化结节致密电子层。结论45S5可促进体外培养鼠鼻中隔软骨细胞增殖及向成骨细胞分化。

表皮生长因子受体对小鼠初级软骨内骨化、破骨细胞的募集及生成的影响

目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)信号转导在软骨内骨化中的作用。方法:以EGFR敲除鼠(EGFR-/-)、EGFR正常野生鼠(EGFR+/+)和(或)杂合子鼠(EGFR+/-)为实验动物模型,通过马森三色染色(Trichrome Masson)、原位杂交及抗九石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察各组小鼠四肢长骨软骨内骨化及破骨细胞募集情况的变化;体外分离培养破骨细胞,加入EGFR酪氨酸激酶的抑制因子AG1478,通过对破骨细胞生成实验的观察,明确EGFR信号转导在破骨细胞中的作用。结果:EGFR+/+鼠与EGFR+/-鼠有相同的表型,因此在实验中将它们皆看做EGFR+/+鼠。形态学观察EGFR-/-鼠肥大细胞区域较EGFR+/+鼠增大,其区域大小约为EGFR+/+鼠的5倍;EGFR-/-鼠破骨细胞向中心生长板的募集速度较EGFR+/+鼠亦明显延迟;在胚胎16.5 d(E16.5)dEGFR-/-和EGFR+/+鼠金属蛋白酶-9(MMP-9)分布上有一定差别,但单个破骨细胞上MMP-9的表达数量二者无明显差别;加入EGFR抑制因子AG1478的实验组与加入DMSO的对照组比较,破骨细胞的形成明显减少(P<0.01)。结论:EGFR信号转导机制可能通过调节破骨细胞的生成,影响其向中心生长板的募集,从而影响小鼠初级软骨内骨化的进展。

45S5对体外培养的鼠鼻中隔软骨细胞骨化基因表达的影响

目的探讨45S5对体外培养的鼠鼻中隔软骨细胞成骨分化的目的基因活化诱导作用。方法利用体外细胞培养技术建立孕21 d SD大鼠鼻中隔软骨细胞培养体系,根据培养基的不同分为实验组(培养基中放入45S5 1 mg/mL)和空白对照组。第2代软骨细胞培养至5、9、15、20 d取材,RT-PCR检测Run X2和CollagenX的mRNA的表达;8、12、15、18 d取材分光比色检测碱性磷酸酶(ALP)。结果45S5诱导培养下第9天的Run X2及第20天的type X collagen mRNA的表达明显增强,第10、15天ALP的分泌明显高于对照组(P<0.05)。结论45S5可促进体外培养的鼠鼻中隔软骨细胞增值及向成骨细胞分化。

双侧耳郭软骨骨化1例并文献复习

目的探讨耳郭软骨骨化的发病机制、临床表现、诊断依据、鉴别诊断、治疗方法。方法回顾性分析1例耳郭软骨骨化患者的临床资料并复习相关文献进行总结。结果耳郭软骨骨化的发病机制暂不明确,通常无明显不适症状,少数患者可伴有局部疼痛、听力下降等症状。颞骨CT可辅助诊断,最终确诊依赖于组织病理检查。症状不明显时可暂予观察,若症状严重影响了生活和工作,可予手术治疗。结论耳郭软骨骨化在临床上较为少见,目前尚无有效逆转耳郭骨化的办法。积极寻找病因,及早干预,有利于避免病情进一步发展。

多层螺旋CT重建技术对未骨化肋软骨骨折的诊断价值

目的:探讨多层螺旋CT扫描检查对未骨化肋软骨骨折的诊断价值。方法:对12例临床怀疑未骨化肋软骨骨折患者(其中肋骨骨折7例)进行螺旋CT容积扫描,将所有原始数据进行薄层重建后导入Vitrea工作站进行(MPR、MIP、SSD、VR)方法重建,并比较各种重建图像对未骨化肋软骨显示的能力。结果:12例受检者经螺旋CT扫描重建处理后发现未骨化肋软骨骨折3例。重建以MIP、VR技术显示效果为佳,其他技术相互补充。结论:螺旋CT重建图像能很好地显示未骨化肋软骨,是诊断其骨折的一种无创伤性最佳影像学技术。

形态原在软骨内骨化中的作用

软骨内骨化发生于肢体芽及生长板的形态形成中,也发生于骨折后的骨痂形成中。骨形态形成蛋白(BMPs)及维甲酸(RA)是涉及在肢体发育中的两类可扩散的形态原样分子(morphogen-like molecules)。它们是模型形成的有力调节者,也涉及组织的增殖与分化。骨折过程中有软骨内骨化,这提示形态原样分子在骨折中也有作用。本文复习有关骨形成中的形态原样分子的文献,并探讨它们在骨折愈合中的作用。

颞下颌关节滑膜软骨瘤病

滑膜软骨瘤病（synovial chondromatosis，简称SC）又称为滑膜骨软骨瘤病，原发性滑膜软骨瘤病及滑膜软骨骨化等。根据WHO（2002）分类定义，滑膜软骨瘤病为关节、滑膜囊或腱鞘的滑膜内发生的良性、结节性软骨化生。1558年由Ambroise Paré首先报告大关节滑膜软骨瘤，1846年Brodie把SC归类于肿瘤性病变，但多数研究者认为是滑膜的化生改变。1958年Jaffé首次对其进行组织形态学描述，奠定了滑膜软骨瘤病组织病理学诊断的基础。1933年Georg Axhausen首次对发生于颞下颌关节的滑膜软骨瘤病进行准确的描述。

兔下颌持续前导后髁突软骨中核心结合因子α1的表达及意义

目的:探讨兔下颌持续功能前导后髁突软骨中核心结合因子α1(corebindingfactorα1,Cbfα1)蛋白的表达及与髁突改建的关系。方法:60只8周龄日本大耳白兔,随机分为实验组和对照组,实验组动物每天24h戴用咬合前导矫正器。实验组与对照组动物分别在3天、1周、2周、4周、8周及12周时处死并取材,用免疫组化方法检测髁突组织内Cbfα1的分布和表达变化,并对其表达进行灰度测定,采用t检验和单因素方差分析对灰度值进行统计学分析。结果:Cbfα1主要在髁突软骨过渡层和肥大层软骨细胞的胞核和胞质中表达,钙化层的软骨细胞和成骨细胞中也可见Cbfα1的表达。实验组兔髁突软骨各层Cbfα1的表达强度均显著高于同期对照组(P<0.05),其中治疗后4周过渡层、肥大层和钙化层的表达均最为明显,分别是71.00±1.52,50.00±0.75和82.00±0.39。结论:下颌持续前导后,Cbfα1的动态变化与下颌髁突适应性生长改建关系密切。

P-15肽促进间充质干细胞向软骨细胞分化的实验研究

目的本研究探讨P-15肽能否有效激活、促进软骨细胞向增殖分化。方法在不同的培养基培养鼠间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),培养细胞采用阿辛蓝染色和碱性磷酸酶染色,并行碱性磷酸酶定量;免疫组织化学及蛋白免疫印迹检测软骨形成特异性标记。结果 (1)与对照组相比,P-15肽组呈现大量的碱性磷酸酶阳性细胞,蛋白聚糖的合成明显增加;(2)免疫组织化学检测提示P-15肽组collagen X(COLX)、Runt-related transcription factor 2(RUNX2)、matrix metallopeptidase 13(MMP13)明显高于对照组;(3)蛋白免疫印迹检测提示P-15肽组在RUNX2、MMP-13、Vascular endothelial growth factor(VEGF)、COLX几个因子表达明显升高(P<0.05)。结论 P-15肽能有效激活、促进间充质干细胞增殖和向软骨细胞分化。