基因枪转化小麦主要轰击参数的优化

基因枪转化是目前小麦遗传转化的主要方法。影响基因枪转化效率的主要参数有轰击距离、轰击压力、DNA总量及浓度、金粉颗粒大小及用量等。为改善目前小麦遗传转化效率偏低的现状,以普通小麦品种科农199为受体材料,设金粉大小(0.6μm和1.0μm)、轰击距离(5.5cm和8.5cm)及轰击压力(650、900和1100psi)三因素共12个处理,利用pAHC25质粒转化小麦幼胚,以确定最佳轰击参数,建立稳定高效的普通小麦基因枪转化体系。结果表明,3个因素的不同组合对幼胚的愈伤诱导效率没有明显影响,但对再生率影响较大,以金粉0.6μm、轰击距离5.5cm的再生率最高。3个因素组合的不同处理对GUS瞬时表达有明显影响,以金粉0.6μm、轰击距离5.5cm和轰击压力650psi处理的GUS瞬时表达量最高。本试验最终获得28株转基因植株,其中12株来自金粉0.6μm、轰击距离5.5cm和轰击压力650psi的处理,该处理的平均转化率达2.45%。

基因枪转化玉米愈伤组织参数的优化

以玉米愈伤组织为受体 ,借助GUS基因的短暂表达 ,优化了PDS 10 0 0 /He型基因枪和自制基因枪的基因枪转化参数。PDS 10 0 0 /He型基因枪转化玉米愈伤组织的最佳轰击参数为 135 0psi压力 ,2 5In·Hg真空度 ,6cm射击距离。自制基因枪转化玉米愈伤组织的最佳轰击参数为0 6MPa 。

小麦成熟胚基因枪转化影响因素的研究

为了探索小麦成熟胚基因枪转化的影响因素,对Z50、郑麦366、Bobwhite和西农529四个小麦基因型的成熟胚进行了愈伤组织的诱导及植株分化再生研究,同时以郑麦366的成熟胚为外植体分析了不同渗透处理剂、每枪金粉用量和轰击距离对基因枪转化过程的影响。结果表明,Z50、郑麦366、Bobwhite三个基因型的出愈率及胚性愈伤率差异不大,均在85%以上,西农529的出愈率较低,胚性愈伤率与Z50、郑麦366和Bobwhite差异显著。不同小麦基因型分化率差异显著,其中郑麦366分化率最高(39.26%)。基因枪转化结果显示,渗透剂对小麦愈伤组织生长均有一定的抑制作用,蔗糖的抑制作用比甘露醇弱;每枪金粉用量100μg的分化率较高(45.57%),但金粉用量100μg时的GUS瞬时表达量与金粉用量60μg时差异不显著,轰击距离为9cm时的分化率和GUS瞬时表达量均比6cm和12cm时高;蔗糖用量0.4mol、金粉用量60μg、轰击距离9cm时GUS瞬时表达量最高,该条件下小麦成熟胚转化频率达0.67%,已初步优化了基因枪介导的小麦成熟胚遗传转化体系。