miR-214-5p通过DNMT1介导的AXIN2基因DNA甲基化修饰在皮肤基底细胞癌中的作用机制

目的探讨皮肤基底细胞癌中轴抑制蛋白2(Axis inhibition protein 2,AXIN2)基因启动子甲基化对基因转录的影响及miR-214-5p通过靶向DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase1,DNMT1)对AXIN2甲基化率的调控机制。方法收集2022年1月-2023年6月在广州市皮肤病防治所就诊治疗的102例皮肤基底细胞癌(Cutaneous basal cell carcinoma,BCC)患者作为研究对象,提取癌组织和癌旁正常组织标本及基线资料。焦磷酸测序法检测AXIN2基因启动子区甲基化率。实时荧光定量PCR检测AXIN2、DNMT1基因mRNA和miR-214-5p的表达水平。将miR-214-5p模拟物(mimic)、抑制物(inhibitor)及其阴性对照(mimic NC和inhibitor NC)分别对基底细胞癌A431细胞进行转染,48 h后检测DNMT1基因mRNA表达水平和AXIN2基因甲基化率。结果BCC癌组织的AXIN2基因甲基化率显著高于癌旁正常组织(t=5.128,P<0.001),AXIN2基因mRNA相对表达水平显著低于癌旁正常组织(t=7.826,P<0.001),DNMT1基因mRNA表达水平显著高于癌旁正常组织(t=4.838,P<0.001),miR-214-5p表达水平显著低于癌旁正常组织(t=5.426,P<0.001)。BCC癌组织的AXIN2基因甲基化率与其mRNA表达水平呈负相关(r=-0.793,P<0.001),DNMT1基因mRNA水平与AXIN2基因甲基化率呈正相关(r=0.814,P<0.001),miR-214-5p表达水平与DNMT1基因mRNA水平呈负相关(r=-0.747,P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验结果证实,DNMT1是miR-214-5p的靶基因。细胞转染后,与mimic NC、inhibitor和inhibitor NC比较,mimic的DNMT1基因mRNA水平、AXIN2基因甲基化率显著降低(P<0.001);而inhibitor的DNMT1基因mRNA水平和AXIN2基因甲基化率相较于其他三组明显上升(P<0.001)。结论miR-214-5p可通过调控下游靶蛋白DNMT1表达,影响AXIN2基因的DNA甲基化率,调控AXIN2基因的表达水平,参与皮肤基底细胞癌的发生机制。

沉默miR-6771-3p通过靶向AXIN2/Wnt信号通路调控异位子宫内膜间质细胞增殖和迁移实验研究

目的:探讨微小RNA(miRNA)miR-6771-3p在子宫内膜异位组织中的表达及其通过靶向调控AXIN2对异位子宫内膜间质细胞增殖和迁移的影响。方法:收集因子宫内膜异位症行手术治疗的患者子宫在位内膜组织和异位内膜组织34例,采用实时聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测组织中miR-6771-3p的表达水平。将异位子宫内膜间质细胞分为沉默组(转染靶向沉默miR-6771-3p的短发夹RNA载体)和空载体组(转染对照载体)。噻唑蓝(MTT)法分析转染后各组异位子宫内膜间质细胞的增殖能力,细胞划痕愈合实验分析转染后各组异位子宫内膜间质细胞的迁移能力,生物信息学技术和双荧光素酶报告基因实验验证miR-6771-3p和轴抑制蛋白2(AXIN2)的靶向关系,RT-qPCR检测转染后各组细胞AXIN2 mRNA表达水平。Western blot检测转染后各组细胞AXIN2蛋白和Wnt信号通路蛋白的表达水平。结果:子宫异位内膜组织中miR-6771-3p表达显著高于子宫在位内膜组织(P<0.01)。与空载体组异位子宫内膜间质细胞比较,沉默组异位子宫内膜间质细胞增殖能力显著降低(P<0.01),细胞划痕愈合率显著降低(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-6771-3p与AXIN2存在靶向关系(P<0.01),miR-6771-3p能够负调控AXIN2 mRNA表达(P<0.01)。与空载体组相比,沉默组细胞中AXIN2蛋白表达显著升高,Wnt信号通路蛋白表达显著降低(均P<0.01)。结论:在子宫异位内膜组织中miR-6771-3p呈高表达,miR-6771-3p通过靶向AXIN2基因影响Wnt信号通路转导,进而调控异位子宫内膜间质细胞的增殖和迁移。

胃癌组织中miR-107、AXIN2的表达及与预后的相关性

目的检测微小RNA-107(microRNA-107,miR-107)和轴抑制蛋白2(axis inhibition protein 2,AXIN2)在胃癌组织中的表达,探讨两者表达的关系及临床意义。方法采用qRT-PCR法检测65例胃癌及正常胃黏膜组织中miR-107和AXIN2 mRNA表达水平;采用免疫组化SP法检测AXIN2蛋白表达水平,分析miR-107、AXIN2与胃癌临床病理特征的关系;Kaplan-Meier法分析胃癌患者术后3年生存期;Cox生存回归分析影响胃癌患者预后的危险因素;Pearson分析胃癌组织中miR-107与AXIN2 mRNA表达水平的相关性。结果胃癌组织中miR-107的表达水平高于正常胃黏膜组织(P<0.05),AXIN2 mRNA表达水平及蛋白阳性率均低于正常胃黏膜组织(P<0.05);miR-107和AXIN2表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移、TNM分期及浸润深度有关(P<0.05);miR-107高表达组患者的3年生存率显著低于miR-107低表达组患者,AXIN2高表达组胃癌患者3年生存率显著高于低表达组患者(P<0.05);淋巴结转移、TNM分期、miR-107高表达、AXIN2低表达是影响胃癌患者不良预后的独立危险因素(P<0.05);胃癌组织中miR-107与AXIN2 mRNA表达呈负相关(r=-0.607,P<0.001)。结论胃癌组织中miR-107高表达、AXIN2低表达,且与患者预后有关,可能作为胃癌患者潜在的预后标志物。

一个先天缺牙家系的基因突变及病例对照研究

目的探讨非综合征型多数牙先天缺失患者的人类成对盒基因9(PAX9)、同源盒基因1(MSX1)、中轴抑制蛋白2(AXIN2)突变位点,为该疾病的病因学研究提供依据。方法对该例患者及其家庭成员进行全身系统检查、口腔专科检查(含拍摄曲面断层片)及家系调查;抽取外周静脉血,提取基因组DNA,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增PAX9基因的外显子1、2、3、4,MSX1基因外显子1、2及AXIN2基因外显子2、3、4、5、6、7、8、9、10、11,通过对分段PCR纯化产物进行测序,并结合系谱图进行基因突变分析。同时,通过病例-对照实验(先天缺牙组50例,健康对照组100例)对突变位点AXIN2G1807C与先天缺牙的相关性进行分析。结果先证者的祖母和外祖父为兄妹关系。口内检查以及曲面断层片发现先证者为无牙牙合,仅见左侧下颌升支处有一阻生牙影像,其余家庭成员牙齿数目发育正常。均未合并其他组织器官的先天发育异常。先证者及部分表型正常者分别发现3个已知突变位点,分别为AXIN2外显子6第1 365位A变为G(rs9915936),外显子7第1 807位G变为C(rs145353986)以及外显子8第2 062位C变为T(p.Leu688Leu)。PAX9、MSX1未见异常。病例组和对照组间AXIN2G1807C的基因频率和基因型频率差异无统计学意义。结论 AXIN2c.2062C>T突变可能是导致中国人群非综合征型多数牙缺失的危险因素之一。AXIN2c.1807G>C与此类疾病之间不存在明显的相关性。