一氧化氮对星形胶质细胞轴突生长因子-1表达及迁移的影响

目的探讨一氧化氮(NO)对星形胶质细胞中轴突生长因子-1(netrin-1)的表达变化以及对细胞迁移的影响。方法采用硝普钠(SNP)作为NO供体处理星形胶质细胞,通过振荡培养和差速贴壁法分离纯化新生SD大鼠星形胶质细胞,接种至培养板,分为实验组和对照组,每组6个样本,实验组用50μmol/L SNP处理星形胶质细胞,通过划痕法观察细胞的迁移,并采用Western blotting和免疫细胞化学方法分别检测处理前后的星形胶质细胞中netrin-1蛋白的表达变化。结果 SNP处理后,实验组的星形胶质细胞与对照组相比,划痕区细胞明显增多,星形胶质细胞netrin-1表达随着时间的推移出现先升高后降低趋势,于48 h达到峰值(P<0.01)。结论 SNP使星形胶质细胞netrin-1表达水平发生变化和影响星形胶质细胞迁移,提示netrin-1可能通过NO的调控而影响星形胶质细胞迁移。

电针对轴突生长导向因子-1和臂板蛋白3a在局灶性脑梗死大鼠脑皮质表达的影响

目的观察局灶性脑梗死大鼠皮质轴突生长导向因子-1(netrin-1,Ntn1)和臂板蛋白3a(semaphorin-3a,sema3a)的表达及电针干预对其表达的影响。探索Ntn1与sema3a在电针对脑梗后神经可塑性影响中的作用。方法将130只雄性SD大鼠分为正常组(n=10)、模型组(n=60)及电针组(n=60)。利用线栓法制作大脑中动脉闭塞模型。分别在术后1、3、7、14 d时,对术后大鼠进行神经功能评分(modified neurologic severity scores,mNSS),利用免疫组化检测缺血侧大脑脑皮质中Ntn1、sema3a、神经丝蛋白200(NF200)分布和表达,免疫印迹法检测缺血侧大脑皮质Ntn1和sema3a的蛋白表达。结果免疫组化结果显示在各个时相点大鼠脑皮质均表达Ntn1和sema3a,主要集中在细胞质阳性表达。Western blot检测结果显示,与正常组相比,模型组Ntn1蛋白的表达水平在脑梗死后1 d即开始明显上升(P<0.01),3 d时呈上升趋势(P<0.01),7 d时达峰值(P<0.01),14 d时仍显著高于基础水平(P<0.01),电针组与模型组相比,Ntn1蛋白表达趋势相同,但表达量明显高于模型组,术后1、3、7、14 d时有统计学差异(P<0.05,P<0.01)。与正常组相比,模型组sema3a蛋白的表达水平在术后1 d即开始上升(P<0.01),7 d时达高峰(P<0.01),14 d时仍高于基础水平(P<0.01)。同时相点电针组与模型组相比sema3a均呈现低表达,1、3 d和7、14 d时有统计学差异(P<0.05,P<0.01),峰值同样在7 d时出现。Western blot检测结果与免疫组化分析结果基本相符。7、14 d时电针组与模型组相比mNSS评分存在统计学差异(P<0.05),14 d时电针组与模型组相比NF200的表达量存在统计学差异(P<0.05)。结论局灶性脑梗死后大鼠皮质Ntn1与sema3a表达明显上调,给予电针干预后可提高Ntn1的表达并抑制sema3a的表达,促进轴突的再生与修复,这可能是电针促进脑梗死后神经功能恢复的机制之一。

中重度颅脑创伤患者血清STC1 S100B和NETRIN-1的表达及对预后的预测价值

目的探讨斯钙素抗体-1(STC1)、S100钙结合蛋白B(S100B)、轴突生长诱向因子-1(NETRIN-1)在中重度创伤性颅脑损伤(TBI)术后患者血清中的表达水平及预测预后的价值。方法收集74例TBI患者及40名健康者的血清样本,使用q RT-PCR检测健康者与TBI患者术前及术后第1天、第3天、第5天、第7天的血清STC1、S100B、NETRIN-1表达水平。收集TBI患者的一般临床资料,使用扩展版格拉斯哥结局量表(EGOS)评估患者预后,根据EGOS评分将患者分为预后良好组(EGOS≥5分,n=40)及预后不良组(EGOS<5分,n=34)。分析TBI患者术后血清STC1、S100B、NETRIN-1表达水平与预后的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析STC1、S100B、NETRIN-1表达水平对患者预后的预测价值,多因素Logistic分析评估引起TBI患者预后不良的因素。结果q RT-PCR分析显示,与健康者相比,TBI患者术前血清STC1、S100B水平升高,NETRIN-1水平降低,术后血清STC1、S100B水平降低,NETRIN-1水平升高(P<0.05)。TBI患者术后第1、3、5、7天血清STC1、S100B水平逐渐降低,NETRIN-1水平逐渐升高,术后第5天最显著(P<0.05)。与术后第5天预后良好组患者相比,预后不良组患者血清STC1、S100B水平显著升高,NETRIN-1水平显著降低(P<0.05)。皮尔逊相关性分析显示术后第5天TBI患者血清STC1、S100B水平与APACHEⅡ评分呈正比,NETRIN-1水平与APACHEⅡ评分呈反比(P<0.05)。ROC曲线分析发现术后第5天血清STC1、S100B、NETRIN-1水平对TBI患者预后具有预测价值,多因素Logistic回归分析显示仅STC1水平与患者预后相关(P<0.05)。结论STC1、S100B、NETRIN-1在TBI患者血清中表达水平异常,对TBI患者预后分析具有较高价值。

干扰Netrin-1促进视网膜母细胞瘤对顺铂的敏感性

目的探讨Netrin-1在视网膜母细胞瘤(RB)中的表达情况以及其干预是否会影响RB对顺铂的敏感性。方法收集24例RB患者的肿瘤组织,其中19例为初治者,5例为复发者,采用Real-time PCR和Western blotting检测Netrin-1基因(在多种肿瘤中高表达)的表达情况。利用慢病毒干扰RB细胞系Y79中Netrin-1的表达,并检测细胞的增殖情况以及顺铂处理后的细胞凋亡情况。结果Netrin-1在RB患者肿瘤组织中呈高表达(P<0.05),且在复发患者中的表达水平明显高于初治者(P<0.05);干扰Netrin-1可抑制RB细胞的增殖(P<0.05),还可增加肿瘤对顺铂的敏感性(P<0.05)。结论Netrin-1可能在RB的形成和耐药机制中发挥重要作用。

netrin-1及其受体在非神经系统中的作用

轴突生长导向因子-1(netrin-1)是netrins家族中研究最广泛的成员。netrin-1最初被认为是胎儿发育过程中轴突引导的调节因子,与其经典受体非协调5(uncoordinated-5,UNC5)与结直肠癌缺失基因(deleted in colorectal cancer,DCC)共同介导轴突的吸引或排斥。随着更多netrin-1受体的发现,如唐氏综合征细胞粘附分子(down syndrome cell adhesion molecule,DSCAM)、整合素α6β4(integrinα6β4,Inα6β4)和整合素α3β1(integrinα3β1,Inα3β1)、腺苷A2B受体(A2B adenosine receptor,A2BAR)和CD146等的发现,扩展了netrin-1在非神经系统的功能,如调控血管生长,肿瘤生长,细胞凋亡,炎症发展。本文就netrin–1及其受体在非神经系统中的作用的研究进展进行概述。