脂肪干细胞移植促进脑缺血大鼠脑组织轴突生长诱向因子1(netrin-1)的表达

目的观察脑缺血损伤大鼠脑组织中轴突生长诱向因子1(netrin-1)的表达及脂肪干细胞(ADSC)移植对其表达的影响。方法健康雄性SD大鼠分为正常组、模型组和ADSC组。复制大鼠大脑中动脉栓塞模型,分离培养ADSC,ADSC组大鼠经侧脑室注射30μL含1×106个细胞的ADSC悬液,模型组注射等剂量PBS。各组大鼠分别在术后4、7、14 d处死6只并取脑组织,采用反转录PCR检测脑组织中netrin-1 mRNA的表达、Western blot法和免疫组织化学法检测脑组织中netrin-1蛋白的表达和定位。结果与正常组相比,模型组脑缺血后脑组织中netrin-1的表达增加,4 d时达高峰,在各观察时间点的表达均显著高于正常组。与模型组相比,ADSC组脑组织中netrin-1的表达进一步上升,7 d时达高峰,在各观察时间点的表达均显著高于模型组。结论脑缺血损伤后进行ADSC移植可提高脑组织中netrin-1的表达,可促进轴突的再生与修复。

电针对轴突生长导向因子-1和臂板蛋白3a在局灶性脑梗死大鼠脑皮质表达的影响

目的观察局灶性脑梗死大鼠皮质轴突生长导向因子-1(netrin-1,Ntn1)和臂板蛋白3a(semaphorin-3a,sema3a)的表达及电针干预对其表达的影响。探索Ntn1与sema3a在电针对脑梗后神经可塑性影响中的作用。方法将130只雄性SD大鼠分为正常组(n=10)、模型组(n=60)及电针组(n=60)。利用线栓法制作大脑中动脉闭塞模型。分别在术后1、3、7、14 d时,对术后大鼠进行神经功能评分(modified neurologic severity scores,mNSS),利用免疫组化检测缺血侧大脑脑皮质中Ntn1、sema3a、神经丝蛋白200(NF200)分布和表达,免疫印迹法检测缺血侧大脑皮质Ntn1和sema3a的蛋白表达。结果免疫组化结果显示在各个时相点大鼠脑皮质均表达Ntn1和sema3a,主要集中在细胞质阳性表达。Western blot检测结果显示,与正常组相比,模型组Ntn1蛋白的表达水平在脑梗死后1 d即开始明显上升(P<0.01),3 d时呈上升趋势(P<0.01),7 d时达峰值(P<0.01),14 d时仍显著高于基础水平(P<0.01),电针组与模型组相比,Ntn1蛋白表达趋势相同,但表达量明显高于模型组,术后1、3、7、14 d时有统计学差异(P<0.05,P<0.01)。与正常组相比,模型组sema3a蛋白的表达水平在术后1 d即开始上升(P<0.01),7 d时达高峰(P<0.01),14 d时仍高于基础水平(P<0.01)。同时相点电针组与模型组相比sema3a均呈现低表达,1、3 d和7、14 d时有统计学差异(P<0.05,P<0.01),峰值同样在7 d时出现。Western blot检测结果与免疫组化分析结果基本相符。7、14 d时电针组与模型组相比mNSS评分存在统计学差异(P<0.05),14 d时电针组与模型组相比NF200的表达量存在统计学差异(P<0.05)。结论局灶性脑梗死后大鼠皮质Ntn1与sema3a表达明显上调,给予电针干预后可提高Ntn1的表达并抑制sema3a的表达,促进轴突的再生与修复,这可能是电针促进脑梗死后神经功能恢复的机制之一。

一氧化氮对星形胶质细胞轴突生长因子-1表达及迁移的影响

目的探讨一氧化氮(NO)对星形胶质细胞中轴突生长因子-1(netrin-1)的表达变化以及对细胞迁移的影响。方法采用硝普钠(SNP)作为NO供体处理星形胶质细胞,通过振荡培养和差速贴壁法分离纯化新生SD大鼠星形胶质细胞,接种至培养板,分为实验组和对照组,每组6个样本,实验组用50μmol/L SNP处理星形胶质细胞,通过划痕法观察细胞的迁移,并采用Western blotting和免疫细胞化学方法分别检测处理前后的星形胶质细胞中netrin-1蛋白的表达变化。结果 SNP处理后,实验组的星形胶质细胞与对照组相比,划痕区细胞明显增多,星形胶质细胞netrin-1表达随着时间的推移出现先升高后降低趋势,于48 h达到峰值(P<0.01)。结论 SNP使星形胶质细胞netrin-1表达水平发生变化和影响星形胶质细胞迁移,提示netrin-1可能通过NO的调控而影响星形胶质细胞迁移。

电针对坐骨神经损伤大鼠神经生长导向因子Netrin-1的影响

目的探讨电针对大鼠坐骨神经损伤后神经导向因子Netrin-1及其mRNA表达的影响。方法健康SD大鼠72只,随机分为空白对照组、模型对照组和电针治疗组,每组24只。后两组大鼠右坐骨神经横断后即刻端对端缝合。电针治疗组取"环跳"、"足三里"进行电针治疗,1次/d,7天1个疗程,连续治疗3个疗程。每疗程结束后应用免疫组化法、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测坐骨神经和相应脊髓段Netrin-1及其mRNA的表达变化。结果电针组与模型组比较,大鼠损伤的坐骨神经和相应脊髓段中Netrin-1及其mRNA在第一疗程后达到高峰,之后逐渐降低,且都高于模型组,有非常显著性差异(P<0.01),而且两组始终都高于空白对照组,也有非常显著性差异(P<0.01)。结论电针治疗能明显增强损伤的坐骨神经和相应脊髓段中Netrin-1及其mRNA的表达。

缺血性糖尿病足部溃疡皮肤Vδ1T细胞胰岛素样生长因子1与诱生型一氧化氮合酶的表达

背景:皮肤Vδ1T细胞分泌的一系列细胞因子能促进伤口愈合,但与糖尿病足部皮肤组织溃疡难以愈合的关系尚未见报道。目的:观察缺血性糖尿病患者足部溃疡皮肤Vδ1T细胞中胰岛素样生长因子1与诱生型一氧化氮合酶的表达。方法:选取缺血性糖尿病足部溃疡患者及正常对照者足部全层皮肤,各10例。双酶标免疫荧光标记测量Vδ1T细胞及胰岛素样生长因子1、诱生型一氧化氮合酶蛋白表达。结果与结论:缺血性糖尿病足部溃疡患者Vδ1T细胞中胰岛素样生长因子1蛋白表达较对照者明显减少(P<0.01);诱生型一氧化氮合酶蛋白表达明显增加(P<0.01)。提示Vδ1T细胞中胰岛素样生长因子1减少可能与缺血性糖尿病足部溃疡难以愈合有关,而胰岛素样生长因子1减少与溃疡皮肤Vδ1T细胞诱生型一氧化氮合酶表达增加,产生氧化应激有关。

电针对坐骨神经损伤大鼠神经生长导向因子Netrin-1受体DCC的影响

目的探讨电针对大鼠坐骨神经损伤后神经导向因子Netrin-1受体DCC的影响。方法 SD大鼠70只,随机分为空白对照组(10只)、假手术组(20只)、模型对照组(20只)和电针治疗组(20只)。后两组大鼠右坐骨神经横断后即刻端对端缝合。电针治疗组取"环跳"、"足三里"进行治疗,每天1次,每次15分钟,7天1个疗程,连续治疗2个疗程。每疗程结束后应用免疫组化法、实时荧光定量PCR法检测坐骨神经和相应脊髓段Netrin-1受体DCC的表达变化。结果电针治疗组大鼠与模型对照组比较,损伤坐骨神经、相应脊髓段DCC在第一疗程后表达均增强,后两疗程后有所降低,但前者始终强于后者,有非常显著性差异(P<0.01),且两组始终都强于空白对照组和假手术组,也有非常显著性差异(P<0.01)。结论电针治疗能增强损伤的坐骨神经和相应脊髓段中Netrin1受体DCC的表达,可能是其治疗周围神经损伤的机制之一。

神经导向因子Netrin-1对血管内皮细胞生长因子蛋白表达的影响

目的研究神经导向因子Netrin-1与血管内皮细胞生长因子蛋白表达之间的关系。方法选取无特定病原体(SPF)级Wistar大鼠,从其骨髓腔中分离获得间充质干细胞(MSCs)后37℃、5%CO2培养至传代4次。采用Transwell法进行细胞迁移实验,分为空白组、VEGF组、Netrin-1组及Netrin-1加VEGF组,培养12h后显微镜观察并计算每孔细胞数目,培养1周后测定管腔周长、管腔数目及分支点数目。将转染Netrin-1重组子后的MSCs细胞悬液、未转染的MSCs细胞悬液接种于大鼠腹部皮下,以Matrigel胶作为空白对照组,移植10d、20d、30d后取出胶栓,免疫组化法检测VEGF表达水平。结果在细胞迁移及小管形成实验中,VEGF组与Netrin-1组细胞迁移数量、小管形成中的管腔周长、管腔数目及分支点数目无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05);而VEGF加Netrin-1组与VEGF组或Netrin-1组比较,细胞迁移数升高,管腔周长变长,管腔数目和分支点数目均明显增多,差异具有统计学意义(P<0.01)。体内血管生成实验中,移植转染Netrin-1重组子的MSCs与移植普通MSCs相比,MSCs/Netrin-1组的VEGF蛋白水平更高,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论Netrin-1和VEGF促进血管生成的能力相当,两者结合更能促进血管生成。神经导向因子Netrin-1促进血管内皮细胞生长因子蛋白表达。

轴突导向因子Netrin-1对视网膜脉络膜内皮细胞RF/6A的作用研究

目的研究轴突导向因子Netrin-1对视网膜脉络膜内皮细胞RF/6A的作用。方法用免疫组化,CCK-8,Transwell及Martrigel方法检测不同浓度Netrin-1对RF/6A细胞增殖,迁移和管腔形成的作用及与血管内皮生长因子(VEGF)的相互作用。结果体外实验发现Netrin-l对新生血管形成具有双重作用,浓度0～500ng/ml,对细胞迁移,增殖及管腔形成表现为促进作用,而在Netrin-1浓度>500ng/ml时表现为抑制作用。Netrin-1浓度为50ng/ml时增殖和迁移能力最强。VEGF同时作用时,增殖及迁移作用增强。结论 Netrin-1对RF/6A细胞系的作用依浓度改变表现为对细胞增殖、迁移及管腔形成的促进及抑制作用。VEGF存在的条件下,促进作用表现为进一步增强,抑制作用无明显差异。由此可以推测Netrin-1在新生血管形成中具有双重调控作用,调控作用取决于Netrin-1的浓度及与VEGF的相互作用。在以新生血管发生为主要特点的增殖性糖尿病性视网膜病变中可能起到一定作用。

肝细胞癌中血管内皮生长因子、缺氧诱生因子1α和表皮生长因子的表达及临床意义

目的分析肝细胞癌(HCC)中血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱生因子1α(HIF-1α)、表皮生长因子(EGF)表达及临床意义。方法选择2014年1月-2018年12月湘南学院附属医院病理科HCC组织石蜡包埋标本63例(HCC组),距HCC组织2 cm处分别取癌旁组织63例(癌旁组),正常肝组织20例(正常组),采用免疫组织化学SABC法检测VEGF、HIF-1α及EGF表达情况,并分析其表达与临床病理特征关系。结果 HCC组VEGF、HIF-1α、EGF阳性表达率均高于癌旁组与正常组(P均<0. 01);TNM分期、分化程度、癌灶直径、静脉浸润4项指标中,仅有静脉浸润与VEGF、HIF-1α、EGF存在相关性;有静脉浸润组织VEGF、HIF-1α、EGF阳性表达率均高于无静脉浸润组织(P均<0. 05)。结论 VEGF、HIF-1α、EGF在HCC组织中呈过量表达状态,其表达与新生血管形成存在紧密联系。

弥漫大B细胞淋巴瘤患者神经生长因子、Netrin-1、脑源性神经生长因子的表达及相关性分析

目的弥漫大B细胞淋巴瘤患者神经生长因子、Netrin-1、脑源性神经生长因子的表达及其相关性分析。方法收集2020年1~12月就诊的弥漫大B细胞淋巴瘤患者60例为研究对象,依照淋巴瘤国际预后指数将患者分成低、高危组,每组30例;另采取30例慢性淋巴结炎患者活检淋巴组织为对照组。比较3组的一般资料;免疫组织化学染色检测Ki-67、神经生长因子、Netrin-1、脑源性神经生长因子的表达;流式术检测调节性Treg细胞比例。结果3组研究对象一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。低危组Ki-67(25.64±2.73)较对照组(4.25±0.98)上升,高危组(66.38±6.25)Ki-67较低危组上升(P<0.05)。低危组神经生长因子(62.35±6.78)、Netrin-1(46.58±6.72)平均光密度较对照组(18.21±4.25、22.45±2.26)增加,高危组神经生长因子(213.69±19.54)、Netrin-1(178.58±15.21)平均光密度较低危组增加(P<0.05);脑源性神经生长因子无显著变化。低危组Treg比例(3.08±0.12)较对照组(1.99±0.11)增加,高危组Treg比例(3.62±0.13)较低危组增加(P<0.05)。神经生长因子与Ki-67(r=0.968,P<0.001)、Treg(r=0.859,P<0.001)呈正相关;Netrin-1与Ki-67(r=0.964,P<0.001)、Treg(r=0.825,P<0.001)、神经生长因子(r=0.972,P<0.001)呈正相关;脑源性神经生长因子与Ki-67(r=-0.124,P=0.246)、Treg(r=-0.106,P=0.318)、神经生长因子(r=-0.114,P=0.284)无相关性。结论弥漫大B细胞淋巴瘤患者神经生长因子和Netrin-1表达升高,其与患者体内增殖水平和外周血Treg细胞比例相关。

神经导向因子Netrin-1及其受体的作用研究现状

神经系统的正确形成有赖于神经导向因子的参与引导。轴突的生长锥可探测周围环境中的神经导向因子,通过吸引与排斥的方式使形成的轴突正确到达靶向部位。

肿瘤坏死因子α调控启动子活性促进netrin-1的表达

目的探讨TNF-α对netrin-1基因表达的影响,并对其调控机制作初步研究。方法采用RT-PCR和蛋白质免疫印迹法检测TNF-α对netrin-1表达的影响。用PCR反应扩增netrin-1启动子序列,克隆至pGL3荧光素酶报告基因载体,转染HEK-293A细胞,通过检测荧光素酶活性观察TNF-α对netrin-1转录水平的表达调控。结果 TNF-α(20ng/ml)能上调netrin-1的表达。成功构建pGL3-netrin-1-promoter荧光素酶表达载体,并证实构建的报告基因载体启动子具有活性;发现TNF-α可使netrin-1启动子活性增加(P<0.05),并以剂量和时间依赖方式调节netrin-1启动子的活性。结论细胞因子TNF-α可能通过调控启动子的活性而调节netrin-1的表达。

中重度颅脑创伤患者血清STC1 S100B和NETRIN-1的表达及对预后的预测价值

目的探讨斯钙素抗体-1(STC1)、S100钙结合蛋白B(S100B)、轴突生长诱向因子-1(NETRIN-1)在中重度创伤性颅脑损伤(TBI)术后患者血清中的表达水平及预测预后的价值。方法收集74例TBI患者及40名健康者的血清样本,使用q RT-PCR检测健康者与TBI患者术前及术后第1天、第3天、第5天、第7天的血清STC1、S100B、NETRIN-1表达水平。收集TBI患者的一般临床资料,使用扩展版格拉斯哥结局量表(EGOS)评估患者预后,根据EGOS评分将患者分为预后良好组(EGOS≥5分,n=40)及预后不良组(EGOS<5分,n=34)。分析TBI患者术后血清STC1、S100B、NETRIN-1表达水平与预后的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析STC1、S100B、NETRIN-1表达水平对患者预后的预测价值,多因素Logistic分析评估引起TBI患者预后不良的因素。结果q RT-PCR分析显示,与健康者相比,TBI患者术前血清STC1、S100B水平升高,NETRIN-1水平降低,术后血清STC1、S100B水平降低,NETRIN-1水平升高(P<0.05)。TBI患者术后第1、3、5、7天血清STC1、S100B水平逐渐降低,NETRIN-1水平逐渐升高,术后第5天最显著(P<0.05)。与术后第5天预后良好组患者相比,预后不良组患者血清STC1、S100B水平显著升高,NETRIN-1水平显著降低(P<0.05)。皮尔逊相关性分析显示术后第5天TBI患者血清STC1、S100B水平与APACHEⅡ评分呈正比,NETRIN-1水平与APACHEⅡ评分呈反比(P<0.05)。ROC曲线分析发现术后第5天血清STC1、S100B、NETRIN-1水平对TBI患者预后具有预测价值,多因素Logistic回归分析显示仅STC1水平与患者预后相关(P<0.05)。结论STC1、S100B、NETRIN-1在TBI患者血清中表达水平异常,对TBI患者预后分析具有较高价值。

神经导向因子Netrin-1在血管生成中可能的双向作用

Netrin家族以经典的神经导向因子而闻名。但近年来一系列的研究发现在非神经组织中也有netrins广泛表达,提示netrin家族的功能并不像先前理解的那么简单。其中netrin-1在促进和抑制血管生成中可能具有的双向作用无疑是netrin家族新功能中最令人关注的。尽管netrin-1在血管生成中的确切作用还存在不少争论,仍加深了我们对神经系统与脉管系统间的密切联系的了解,也为临床心脑缺血性疾病、糖尿病引起的血管和神经病变等的治疗以及抑制肿瘤血管生成提供了新思路。本文综述了netrin-1在血管生成中的可能的双向作用及其潜在的临床意义。

运动神经诱向因子1及其受体在人早期胎盘绒毛的分布及周龄变化

运动神经诱向因子１及其受体在人早期胎盘绒毛的分布及周龄变化新宇黄威权孙岚（第四军医大学）本文用免疫组织化学ＡＢＣ法，研究了运动神经诱向因子１（ＭＮＴＦ１）及其受体在人早期胎盘绒毛的分布及周龄变化。邻片免疫组织化学双标记法显示：胎盘绒毛的细胞滋养层细...

神经导向因子Netrin-1调节单核巨噬细胞迁移与动脉粥样斑块关系的研究进展

动脉粥样硬化是动脉壁的一种慢性炎症性疾病,单核巨噬细胞在其发生发展中起着关键作用。动脉粥样斑块中单核巨噬细胞迁移能力受损,滞留于斑块内,增加了斑块不稳定性,加速动脉粥样硬化病变的进展。目前研究表明动脉粥样斑块中巨噬细胞分泌的神经导向因子Netrin-1通过与巨噬细胞表面相应受体结合,可以抑制巨噬细胞迁出斑块,促进动脉粥样硬化的进展。但在动脉粥样硬化形成初期,血管内皮细胞表达的Netrin-1却被发现对动脉粥样硬化起到保护作用。

生存因子Netrin-1对胰岛的作用

生存因子Netrin-1在神经和血管的新生过程中均发挥重要作用。最近的研究发现,在胰岛形成过程中,Netrin-1能通过激活整合素调节细胞的迁移、侵袭、增殖和生存,并具有和血管内皮生长因子一样的促进血管生成的功能,刺激平滑肌细胞和内皮细胞有丝分裂。同时,Netrin-1能够在新生的胰岛中表达,并参与调节凋亡,保护胰腺损伤。生存因子Netrin-1对保存胰岛细胞量及修复胰岛功能提供新思路,对2型糖尿病的预防和治疗具有深远的意义。

TNF-α和IL-1β对HaCaT细胞诱生型一氧化氮合酶表达的影响

目的 探讨炎症性细胞因子肿瘤坏死因子 α(tumornecrosisfactor α ,TNF α)协同白细胞介素 1β(inter leukin 1β ,IL 1β)对体外培养角质形成细胞 (keratinocye ,KC)株HaCaT细胞诱生型一氧化氮合酶 (induciblenitricoxidesyn thase ,iNOS)mRNA和蛋白表达的调节作用 ,以及地塞米松对TNF α和IL 1β作用的影响。 方法 用RT PCR、Westernblotting和免疫组织化学 (SP)方法检测HaCaT细胞iNOSmRNA和蛋白表达情况。结果 正常培养HaCaT细胞iNOS微弱表达或不表达 ,TNF α协同IL 1β显著上调HaCaT细胞iNOSmRNA和蛋白表达 ,地塞米松可显著抑制TNF α和IL 1β的作用。结论 推测TNF α和IL 1β可能通过上调角质形成细胞表达iNOS合成释放的一氧化氮 (niricoxide ,NO)参与皮肤免疫和炎症反应 ;地塞米松的治疗效应可能部分与其能抑制iNOS表达有关。