轴索生长抑制因子DNA疫苗安全有效地防治大鼠缺血性脑中风

目的评估轴索生长抑制因子DNA疫苗(pcDNA3.1(+)-neurite growth inhibitors,pcDNA-NGIs)防治缺血性脑中风的安全性和有效性。方法肌肉注射pcDNA-NGIs后,采用改良实验性自身免疫性脑髓鞘炎记分系统、改良神经病严重程度记分和逃避作业评估神经系统炎症、感觉运动和认知缺陷;采用生物素右旋糖胺追踪皮质红核投射的新生轴索。结果pcDNA-NGIs免疫不会引起神经系统炎症和感觉运动缺陷;阻塞大脑中动脉之前或之后进行pcDNA-NGIs免疫可增加皮质红核投射的新生纤维数(P=0.018)并削弱缺血性脑中风的感觉运动缺陷(P=0.042)。结论pcDNA-NGIs免疫不会使健康大鼠产生神经炎症和神经病症状,但可促进中风大鼠的神经再生和感觉运动功能恢复。

依达拉奉联合鼠神经生长因子对颅脑外伤患者神经功能损伤修复的效果

目的分析依达拉奉联合鼠神经生长因子(mNGF)对颅脑外伤患者神经功能损伤修复的效果及对血中神经元特异性烯醇化酶(NSE)和轴索过度生长抑制因子-A(Nogo-A)表达水平的影响。方法将收治的105例颅脑外伤患者分为观察组和对照组;对照组采用依达拉奉治疗,观察组采用依达拉奉联合mNGF治疗;治疗前后采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分及格拉斯哥昏迷指数(GCS)评分对患者神经功能及颅脑损伤严重程度进行调查,并检测患者血中神经功能、神经损伤指标、神经递质、炎症因子和应激激素水平;治疗前后检测患者血中NSE和Nogo-A表达水平。结果治疗后,观察组患者NIHSS评分显著低于对照组(P<0.05),GCS评分显著高于对照组(P<0.05);治疗后观察组脑源性神经营养因子(BDNF)水平高于对照组,髓鞘碱性蛋白(MBP)和缺血修饰白蛋白(IMA)水平低于对照组(P<0.05);治疗后观察组血中血管黏附蛋白-1(VAP-1)、强啡肽(Dny-A)、神经肽Y(NPY)、C反应蛋白(CRP)、核因子κB(NF-κB)、白细胞介素-1β(IL-1β)、皮质醇(Cor)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、去甲肾上腺素(NE)、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)水平、血中NSE及Nogo-A水平明显低于对照组(P<0.05)。结论依达拉奉联合mNGF治疗颅脑外伤患者可有效改善患者神经功能,加速损伤修复,并有效降低患者血中NSE和Nogo-A表达水平。

Nogo-A与缺血后适应脑保护作用的研究进展

轴索过度生长抑制因子A(Nogo-A)是近年来人们在中枢神经系统髓磷脂中研究发现的一种抑制轴突生长的蛋白,对神经细胞再生有显著的抑制作用。缺血后适应是近年来发现的一种新的干预措施,作为缺氧耐受现象的一种,可以显著地减轻缺血/再灌注损伤。现就Ngoo-A与缺血后适应脑保护的研究进行综述,探讨两者与神经损伤修复的关系。

中国广西人群Nogo-C基因rs17046518G/A多态性研究

目的了解Nogo-C基因3'-非翻译区单核苷酸多态性(SNP)各等位基因及基因型在中国广西地区人群中的分布频率,比较其在不同种族间分布的差异,旨在为人类学及群体遗传学研究提供前瞻性基础资料。方法采用单碱基延伸的PCR技术和DNA测序法检测199例中国广西人的Nogo-C基因3'-非翻译区rs17046518 G/A多态性,并结合人类基因组计划(Hapmap)公布的四个人群(欧洲人、非洲人、日本人和中国北京人)的SNP分型数据,比较分析这五个人群的基因型及等位基因的分布频率。结果 Nogo-C基因型AA、GA和GG频率分别为69.8%、25.1%和5.0%;等位基因A、G频率分别为82.4%和17.6%。其基因型及等位基因频率在男女组间比较差异无显著性;但与欧洲和非洲人群比较,Nogo-C基因多态性的分布频率均存在显著性差异(P均<0.05);而与日本和北京人比较差异无显著性。结论在中国广西人群中存在Nogo-C基因多态性,且与性别无相关性。Nogo-C基因型分布及等位基因频率在不同种族间存在明显差异,符合遗传学规律。此为进一步人类学及群体遗传学的研究和基因多态性普查奠定了基础,并为进行疾病前瞻性研究提供了重要的分子遗传学数据。

通络化痰胶囊对MCAO模型大鼠皮层Nogo-A、GAP-43表达影响的实验研究

目的研究通络化痰胶囊对MCAO模型大鼠脑缺血损伤后皮层区域神经轴索抑制因子勿动蛋白(Nogo-A)及轴突再生促进因子生长相关蛋白43(GAP-43)表达的影响。方法48只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、通络化痰胶囊高、低剂量组。除正常组外,其余各组参照Koizumi法制作大鼠大脑中动脉缺血模型(MCAO)。高、低剂量组造模清醒后分别给予648 mg/kg、324 mg/kg通络化痰胶囊2 ml。各组大鼠同期观察7 d、14 d。应用免疫组化法检测Nogo-A、GAP-43表达水平。结果与模型组相比,通络化痰胶囊高、低剂量组均能降低Nogo-A表达(P<0.05,P<0.01),上调GAP-43的表达(P<0.05)。结论通络化痰胶囊可通过降低Nogo-A的表达、上调GAP-43的表达,改善脑缺血区域神经轴突再生的微环境,从而发挥其脑保护作用。

雄激素与Nogo蛋白对神经系统发育的作用

雄激素是近年来研究较多的具有神经保护作用的类固醇激素，可以调节神经营养因子含量，抗氧化损伤及促进神经细胞轴突再生，对于中枢神经系统损伤性疾病具有潜在治疗作用。Nogo是近年来人们在中枢神经系统髓磷脂中研究发现的一种抑制轴突生长的蛋白，与中枢神经再生抑制密切相关。目前已证实Nogo蛋白在体外培养时有很强的轴突生长抑制活性。研究雄激素与Nogo蛋白对中枢神经系统的作用及其之间的相互关系，对于治疗中枢神经系统损伤性疾病，具有重要的指导作用。

抗大鼠Nogo-A-Δ2特异性多克隆抗体的制备及鉴定

目的制备特异性兔抗大鼠轴索过度生长抑制因子A(Nogo-A)氨基端序列aa1~172(Nogo-A-Δ2)抗体,并鉴定抗体特性。方法利用原核表达系统获得Nogo-A-Δ2(NA2)蛋白,以NA2纯蛋白为抗原免疫大耳白兔,同时NA2偶联N-羟基琥珀酰亚胺活化后的琼脂糖凝胶,偶联NA2抗原的凝胶进行免疫后大鼠血清的纯化,获得兔抗NA2抗体;ELISA检测纯化抗体的效价,Western blotting分析抗体的特异性。结果构建pET-24a-NA2表达载体,经大肠杆菌(Escherichia coli,E coli)原核表达及Ni柱亲和纯化得到用于免疫的NA2纯蛋白,免疫大耳白兔获得抗血清后,利用偶联NA2蛋白的琼脂糖亲和填料对免疫血清进行特异性亲和纯化,获得效价高(1∶1×10^(6))、特异性好的兔抗大鼠NA2特异性抗体。结论本研究成功制备了能够识别NA2结构域的特异性兔多抗。