β-连环蛋白和轴蛋白在食管癌中的表达及其与食管癌浸润和转移的关系

目的通过观察β-连环蛋白（β-catenin）和轴蛋白（Axin）在食管癌组织中的表达变化,探讨其在食管癌发病中的作用及其与食管癌浸润和转移的关系。方法选择45例食管鳞状细胞癌（食管癌组）,按分化程度分为高分化、中分化、低分化各15例;同时选取15例同体食管正常黏膜作为正常对照组,检测两组β-catenin和Axin的表达情况。结果食管癌组β-catenin表达阳性率为64.4%,正常对照组为6.7%,差异有统计学意义（P〈0.05）;食管癌组中高分化、中分化、低分化者β-catenin表达阳性率分别为40.0%、60.0%、93.3%,差异有统计学意义（P〈0.05）;有、无淋巴结转移者表达阳性率分别为89.5%、46.2%,差异亦有统计学意义（P〈0.05）;有、无纤维膜浸润者表达阳性率分别为72.4%、50.0%,差异无统计学意义（P〉0.05）。食管癌组Axin表达阳性率为37.8%,正常对照组为86.7%,差异有统计学意义（P〈0.05）;食管癌组中高分化、中分化、低分化者Axin表达阳性率分别为46.7%、33.3%、33.3%,差异无统计学意义（P〉0.05）;有、无淋巴结转移者表达阳性率分别为15.8%、53.8%,差异有统计学意义（P〈0.05）;有、无纤维膜浸润者表达阳性率分别为13.8%、81.3%,差异有统计学意义（P〈0.05）。食管鳞状细胞癌中β-catenin与Axin的表达呈显著负相关（P〈0.05）。结论 Axin表达降低可能促进了β-catenin的异常蓄积,相继激活下游靶基因基质金属蛋白酶-7,通过降解细胞外基质促进肿瘤的浸润。

轴蛋白在骨关节炎中的作用机制及研究进展

轴蛋白是一个构架蛋白,其传导信号的方式主要是与Wnt信号转导途径中的许多相关成员结合形成复合体。近年来发现轴蛋白为抑制因子,能通过下调β-连环蛋白(β-catenin)水平来调节关节软骨的成熟、增殖分化以及凋亡。β-catenin作为Wnt信号通路中的重要成员,而轴蛋白作为Wnt信号通路的负调节因子,将为骨关节炎的诊断和治疗提供新的思路和有效的方法。

X染色体连锁锌指蛋白轴蛋白在胃癌组织中的表达水平及与临床病理因素的相关性分析

目的:分析胃癌组织中X染色体连锁锌指蛋白、轴蛋白表达水平及与临床病理因素的相关性。方法:回顾性选取2018年2月至2021年2月本院胃癌患者300例,将其胃癌组织300例及癌旁组织(与胃癌组织相距5.0cm以上)140例手术切取下来,统计分析胃癌组织和癌旁组织中ZFX、Axin表达情况,并分析胃癌组织中ZFX、Axin表达与临床病理因素的相关性。结果:胃癌组织中ZFX表达阳性率84.33%(253/300)高于癌旁组织17.14%(24/140),阴性率15.67%(47/300)低于癌旁组织82.86%(116/140)(P<0.05);Axin表达阳性率34.00%(102/300)低于癌旁组织84.29%(118/140),阴性率66.00%(198/300)高于癌旁组织15.71%(22/140)(P<0.05)。Duke分期Ⅰ~Ⅱ期患者胃癌组织中ZFX表达阳性率低于Ⅲ~Ⅳ期患者(P<0.05),分化程度低分化、中分化、高分化患者胃癌组织中ZFX表达阳性率逐渐降低(P<0.05),浸润深度黏膜外层、黏膜层、黏膜及其下层患者胃癌组织中ZFX表达阳性率逐渐降低(P<0.05),淋巴结转移患者胃癌组织中ZFX表达阳性率高于淋巴结未转移患者(P<0.05)。Duke分期Ⅰ~Ⅱ期患者胃癌组织中Axin表达阳性率高于Ⅲ~Ⅳ期患者(P<0.05),分化程度低分化、中分化、高分化患者胃癌组织中Axin表达阳性率逐渐升高(P<0.05),浸润深度黏膜外层、黏膜层、黏膜及其下层患者胃癌组织中Axin表达阳性率逐渐升高(P<0.05),淋巴结转移患者胃癌组织中Axin表达阳性率低于淋巴结未转移患者(P<0.05)。结论:胃癌组织中X染色体连锁锌指蛋白表达阳性率提升,轴蛋白表达阳性率降低,均与临床病理因素中Duke分期、分化程度、浸润深度、淋巴结转移相关。

胃癌组织中轴蛋白、结肠癌转移相关基因1蛋白的表达及临床意义

目的探讨胃癌组织中轴蛋白(Axin)、结肠癌转移相关基因1(MACC1)蛋白的表达及其与临床病理参数的关系。方法收集山东省青岛市第八人民医院2015年1月~2017年12月胃癌患者手术标本150例胃癌组织,随机抽取其中70例为癌旁组织,利用免疫组织化法检测癌及癌旁组织中Axin、MACC1的表达;分析Axin、MACC1表达与胃癌患者临床病理参数之间的关系及两者的相关性。结果胃癌组织中Axin阳性表达率低于癌旁组织,胃癌组织中MACC1阳性表达率高于癌旁组织,差异均有高度统计学意义(P<0.01)。Axin、MACC1在胃癌组织中的表达均与胃癌的浸润深度、分化程度、淋巴结转移以及Duke分期有关(P<0.01),且胃癌组织中Axin表达与MACC1呈负相关(P<0.05)。结论Axin的表达降低及MACC1的表达升高都与胃癌发展相关,早期检测两项指标可为预测胃癌进展提供重要依据;Axin与MACC1的表达负相关,两者可能协同导致肿瘤的低分化、高侵袭、高转移性,提示两者可能成为胃癌治疗的潜在靶点。

β-连环蛋白、轴蛋白在卵巢上皮细胞癌组织中的表达及意义

目的:观察β-连环蛋白(β-catenin)和轴蛋白(Axin)在卵巢上皮细胞癌组织中的表达与肿瘤的生长、转移和浸润的关系,以指导临床诊断和治疗。方法:选取该院妇产科卵巢上皮细胞肿瘤患者50例,采用免疫组织化学方法 SP法检测β-catenin及Axin的表达情况。结果:组织分化级别越高,临床分期越早的卵巢上皮细胞癌患者β-catenin阳性率越低,Axin阳性率越高,差异有统计学意义(P<0.05)。β-catenin和Axin的表达与卵巢上皮细胞癌的组织分型没有关系。良性组织中β-catenin表达明显低于癌组织,Axin的表达阳性率明显高于癌组织。β-catenin和Axin在卵巢上皮细胞癌组织中的表达呈负相关性,差异有统计学意义(rs=-0.447,P<0.05)。结论:β-catenin和Axin的表达与卵巢上皮细胞癌组织的发生、发展、转移和浸润有一定的相关性,β-catenin可以理解为一种癌基因,对于癌组织的发生和转移有着促进作用,而Axin是一种保护基因,对于癌组织的发生和转移有着抑制作用。

USP7-MDM2-p53信号轴对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的:探讨泛素特异性蛋白酶7(USP7)调节Mdm2 p53结合蛋白同源物(MDM2)-p53轴对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法:Western blot检测人子宫内膜癌组织、癌旁组织、人子宫内膜上皮细胞hEEC及人子宫内膜癌细胞系Ishikawa、HEC-1-A、KLE中USP7蛋白表达。将Ishikawa细胞分为NC组、P22077(USP7抑制剂)组、pcDNA组、pcDNA-MDM2组、P22077+pcDNA组、P22077+pcDNA-MDM2组,CCK-8法和克隆形成实验检测Ishikawa细胞增殖;流式细胞术检测Ishikawa细胞凋亡与细胞周期变化;Western blot检测Ishikawa细胞中USP7、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、周期素依赖性激酶2(CDK2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、MDM2、p53蛋白表达。以RG7388(MDM2抑制剂)或PFT-α(p53抑制剂)与20μmol/L P22077共处理Ishikawa细胞48 h以验证USP7-MDM2-p53信号轴上下游关系。结果:USP7蛋白在子宫内膜癌组织和细胞中高表达,且Ishikawa细胞中USP7蛋白表达量最高,因此,选择Ishikawa细胞为研究对象。与NC组比较,P22077组Ishikawa细胞OD 450值、克隆形成率、S期和G 2/M期细胞数、USP7、CyclinD1、CDK2、MDM2蛋白表达降低,细胞凋亡率、G_(0)/G_(1)期细胞数、p53、Bax蛋白表达升高(P<0.05);与NC组、pcDNA组比较,pcDNA-MDM2组Ishikawa细胞OD 450值、克隆形成率、S期和G 2/M期细胞数、USP7、CyclinD1、CDK2、MDM2蛋白表达升高,细胞凋亡率、G_(0)/G_(1)期细胞数、p53、Bax蛋白表达降低(P<0.05);与P22077组、P22077+pcDNA组比较,P22077+pcDNA-MDM2组Ishikawa细胞OD 450值、克隆形成率、S期和G 2/M期细胞数、USP7、CyclinD1、CDK2、MDM2蛋白表达升高,细胞凋亡率、G_(0)/G_(1)期细胞数、p53、Bax蛋白表达降低(P<0.05)。p53为USP7-MDM2通路下游分子。结论:抑制USP7表达可能通过下调MDM2来激活p53进而抑制Ishikawa细胞增殖、促进细胞凋亡及周期停滞。

LncRNA MYLK-AS1调节miR-141-3p/STMN1轴对胃癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)肌球蛋白轻链激酶反义RNA1(myosin light chain kinase antisense RNA1,MYLK-AS1)调节miR-141-3p/微管不稳定蛋白1(stathmin 1,STMN1)轴对胃癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法:将HGC27细胞分为NC组、si-NC组、si-MYLK-AS1组、si-MYLK-AS1+inhibitor NC组、si-MYLK-AS1+miR-141-3p inhibitor组。双萤光素酶报告基因实验检测LncRNA MYLK-AS1、miR-141-3p、STMN1的关系;qRT-PCR检测HGC27细胞中LncRNA MYLK-AS1、miR-141-3p表达;CCK-8法检测HGC27细胞增殖情况;流式细胞术检测HGC27细胞凋亡;使用Transwell实验评估了HGC27细胞的侵袭和迁移能力,并统计了穿透基质膜的细胞数量;同时采用Western blot技术检测了HGC27细胞中STMN1、E-cadherin、Vimentin及N-cadherin这几种蛋白表达量的变化。结果:HGC27细胞中LncRNA MYLK-AS1、STMN1水平高于GES-1细胞(P<0.05),miR-141-3p水平低于GES-1细胞(P<0.05)。si-MYLK-AS1组HGC27细胞A_(450 nm)值、迁移、侵袭细胞数量、LncRNA MYLK-AS1表达量、STMN1、N-cadherin、Vimentin蛋白水平低于NC组、si-NC组(P<0.05),HGC27细胞凋亡率、miR-141-3p表达量、E-cadherin蛋白水平高于NC组、si-NC组(P<0.05);而miR-141-3p低表达减弱了沉默LncRNA MYLK-AS1抑制HGC27细胞发展的作用;LncRNA MYLK-AS1靶向调节miR-141-3p/STMN1轴。结论:LncRNA MYLK-AS1可能通过上调microRNA-141-3p的表达水平,间接导致STMN1基因表达受到抑制,这一过程可能对胃癌细胞的增殖、凋亡及侵袭特性产生明显影响。

LncRNA FGD5-AS1靶向miR-16-5p/CREB1轴减轻缺氧/复氧诱导大鼠H9c2心肌细胞凋亡的机制研究

目的:探究长链非编码RNA(LncRNA)FGD5反义RNA1(FGD5-AS1)对缺氧/复氧(H/R)诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡的影响以及对微小RNA-16-5p/cAMP响应元件结合蛋白1(miR-16-5p/CREB1)轴的调节机制。方法:将H9c2细胞分为对照组和H/R组(缺氧6 h,复氧6 h),然后将H/R组细胞分别进行转染,分为oe-NC组、oe-FGD5-AS1组、oe-FGD5-AS1+miR-16-5p mimic-NC组、oe-FGD5-AS1+miR-16-5p mimic组。实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应法(RT-qPCR)检测细胞中FGD5-AS1、miR-16-5p、CREB1的mRNA水平;蛋白免疫印迹(Western Blot)法测定裂解凋亡蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达;CCK-8法测定细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶活性实验分别验证miR-16-5p和FGD5-AS1、CREB1的靶向关系。结果:与对照组比较,H/R组细胞中FGD5-AS1和CREB1的mRNA水平、细胞存活率、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),miR-16-5p mRNA水平、细胞凋亡率及cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达升高(P<0.05);与H/R组和oe-NC组比较,转染过表达FGD5-AS1基因的H9c2细胞中FGD5-AS1和CREB1的mRNA水平、细胞存活率、Bcl-2蛋白表达增高,凋亡率及miR-16-5p、cleaved Caspase-3、Bax水平下降(P<0.05)。双荧光素酶活性实验验证了FGD5-AS1、CREB1均与miR-16-5p有结合位点。结论:过表达FGD5-AS1可能通过靶向下调miR-16-5p表达,上调CREB1表达,抑制H/R诱导的H9c2心肌细胞凋亡。

丹参多糖经MAPK/ERK信号轴抑制对肺癌细胞A549增殖、迁移和凋亡的影响

目的 探讨丹参多糖经丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号轴抑制对肺癌细胞A549增殖、迁移和凋亡的影响。方法 体外培养A549细胞,用不同质量浓度(0,1,2,4,8,16,32,64 mg/mL)丹参多糖干预48 h后,确定丹参多糖的半数抑制浓度(IC50);将A549细胞分为对照组、高剂量组、中剂量组和低剂量组(分别以0,8,4,2 mg/mL丹参多糖干预),以及抑制剂组(40μmol/L PD 98059)。采用划痕愈合试验检测A549细胞的迁移水平,采用流式细胞术检测A549细胞的凋亡情况,同时采用实时荧光定量聚合酶链反应法和免疫印迹法分别检测A549细胞中MAPK、ERK、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、B细胞淋巴瘤2基因(Bcl-2)、胱天蛋白酶3(caspase-3)mRNA和蛋白表达水平。结果 随着丹参多糖质量浓度的增加,A549细胞增殖率显著降低(P <0.05);丹参多糖对A549细胞的IC50为7.82 mg/mL,高、中、低剂量组干预剂量分别为8,4,2 mg/mL。与对照组比较,抑制剂组,高、中、低剂量组细胞的迁移距离及MMP-9,MAPK,ERK,Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P <0.05),细胞凋亡率、caspase-3 mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P <0.05);与抑制剂组比较,高、中、低剂量组细胞的迁移距离及MMP-9,MAPK,ERK,Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P <0.05),细胞凋亡率、caspase-3 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P <0.05),且随丹参多糖剂量的增加呈量效依赖关系(P <0.05)。结论 丹参多糖可能通过MAPK/ERK信号轴诱导A549细胞凋亡,抑制A549细胞增殖和迁移。

灯盏细辛基于Psmb8/NF-κB轴抑制糖尿病肾病大鼠炎症反应

目的探讨灯盏细辛(erigeron breviscapus,EB)是否通过介导β型蛋白酶体亚基8(proteasome subunitβtype 8,Psmb8)及核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)轴抑制糖尿病肾病大鼠炎症反应。方法随机选10只SPF雄性SD大鼠作为正常组,剩余大鼠用高脂饮食联合链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)构建糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠模型。成模大鼠共41只,随机剔除1只,将剩余大鼠随机分为模型组、EB低剂量组、EB中剂量组和EB高剂量组,每组10只。其中EB低剂量、EB中剂量和EB高剂量组分别灌胃EB 20、40、80 mg·kg^(-1)·d^(-1),正常组和模型组大鼠给予等量生理盐水,持续给药8周。检测各组大鼠空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、肾脏指数(renal mass index,KI);用全自动生化分析仪检测24 h尿蛋白(urine protein,UPro)、血清肌酐(serum creatinine,Scr)和血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平;HE染色观察大鼠肾组织病理形态变化;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)的含量;用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测Psmb8和NF-κB p65 mRNA相对表达量;用蛋白印迹(Western blotting)法检测Psmb8、NF-κB p65及p-NF-κB p65蛋白的相对表达量。结果与正常组比较,模型组大鼠FBG、KI升高,体质量下降(P<0.05),肾小球形态见明显病理改变,间质水肿并伴有大量炎性细胞浸润,血清TNF-α、IL-1β及IL-18含量升高,肾组织中Psmb8和NF-κB p65 mRNA及Psmb8、NF-κB p65和p-NF-κB p65蛋白的相对表达量升高(P<0.05);与模型组比较,EB低、中、高剂量组大鼠FBG和KI下降,体质量升高(P<0.05),肾组织炎性病理情况见不同程度减轻,血清TNF-α、IL-1β及IL-18含量降低,肾组织中Psmb8和NF-κB p65 mRNA及Psmb8、NF-κB p65和pNF-κB p65蛋白的相对表达量降低(P<0.05);且EB对DN大鼠的炎症抑制作用呈剂量依赖性。结论EB可抑制DN大鼠炎症反应,其作用机制可能与抑制Psmb8/NF-κB轴激活有关。

吸烟与非吸烟者气道纤毛轴动力蛋白基因DNAI1的表达差异

目的:检测纤毛轴动力蛋白基因DNAI1在吸烟者和非吸烟者支气管组织的表达差异,了解吸烟对纤毛轴动力蛋白基因的影响。方法:分别提取8例吸烟者和8例非吸烟者的支气管组织总RNA,用反转录聚合酶链反应方法分析纤毛轴动力蛋白基因DNAI1在上述组织的表达水平。结果:吸烟者和非吸烟者DNAI1的表达水平分别为0.35±0.02和0.60±0.07,两者相比有显著差异(t=9.96,P<0.01)。结论:纤毛轴动力蛋白基因DNAI1在吸烟者支气管组织中的表达明显降低,可能是吸烟造成纤毛运动功能下降的原因之一。

肾阳虚大鼠下丘脑-垂体-性腺轴钙调蛋白的基因表达及补肾中药的调整作用

目的从分子水平探讨肾阳虚证病理改变及补肾中药淫羊藿总黄酮作用机制,为肾阳虚证康复和开发药物的临床新用途提供理论依据。方法用大剂量外源糖皮质激素建立肾阳虚动物模型,以实时荧光定量RT-PCR技术,测定各组大鼠下丘脑-垂体-性腺轴钙调蛋白(CaM)mRNA的表达,以及淫羊藿总黄酮对其的影响。结果肾阳虚大鼠下丘脑、性腺CaMmRNA水平升高,垂体组织CaMmRNA水平没有显著变化,淫羊藿总黄酮能够降低下丘脑、睾丸组织CaMmRNA水平,但对垂体影响不显著。结论下丘脑中CaMmRNA水平升高与肾阳虚证有关,下丘脑、睾丸组织CaMmRNA水平的降低是淫羊藿总黄酮改善肾阳虚症状的作用机制之一。

针刺激活轴抑制蛋白1、腺苷酸活化蛋白激酶、丝/苏氨酸蛋白激酶信号通路对失神经骨骼肌萎缩大鼠的保护作用

目的研究针刺对失神经骨骼肌萎缩大鼠骨骼肌细胞丝/苏氨酸蛋白激酶(AKT)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、轴抑制蛋白1(Axin1)表达水平的影响。方法将48只SD大鼠采用简单随机分组分为空白对照组、假手术组、模型组和针刺组各12只。模型组和针刺组大鼠采用手术切断坐骨神经制备失神经骨骼肌萎缩大鼠模型,假手术组只暴露坐骨神经,空白对照组不做任何处理。针刺组在造模后进行电针治疗(“足三里”和“承山”穴),每次10 min,连续治疗3周。治疗后,检测各组大鼠绯肠肌组织的湿重比、肌纤维横截面积及肌细胞直径比;HE染色检测各组大鼠绯肠肌损伤;TUNEL染色检测各组大鼠绯肠肌细胞凋亡;蛋白质印迹法(Westernblotting)检测p-AKT、AKT、p-AMPK、AMPK、Axin1、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl相关X蛋白(Bax)、活化胱天蛋白酶(cleavedcaspase-3)和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达。结果与空白对照组和假手术组相比,模型组大鼠腓肠肌湿重比(0.38±0.06)、肌纤维截面积比(0.52±0.12)和肌纤维直径比(0.53±0.16)均明显下降(P<0.05),细胞凋亡率(30.85±5.74)%明显升高(P<0.05),Bcl-2(0.40±0.03)、Bax(0.53±0.05)、cleavedcaspase-3(0.58±0.06)、PCNA(0.44±0.05)、p-AKT/AKT(0.54±0.06)、p-AMPK/AMPK(0.73±0.04)和Axin1(0.41±0.05)的表达明显上调(P<0.05);与模型组相比,针刺组大鼠腓肠肌湿重比(0.52±0.07)、肌纤维截面积比(0.64±0.11)和肌纤维直径比(0.66±0.15)均明显增加(P<0.05),细胞凋亡率(21.39±3.87)%明显下降(P<0.05),Bcl-2(0.61±0.05)、PCNA(0.72±0.08)、p-AKT/AKT(0.82±0.09)和Axin1(0.62±0.06)的表达明显上调(P<0.05),Bax(0.33±0.04)、cleavedcaspase-3(0.34±0.04)和p-AMPK/AMPK(0.51±0.03)的表达明显下调(P<0.05)。结论针刺可能通过调控Axin1/AMPK/AKT的表达,延缓失神经大鼠骨骼肌的萎缩。

白藜芦醇通过调控雷帕霉素靶蛋白/M2型丙酮酸激酶轴抑制口腔鳞状细胞癌细胞的糖酵解作用

目的:通过雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)/M2型丙酮酸激酶(M2 isoform pyruvate kinase,PKM2)轴探讨白藜芦醇对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞的糖酵解的影响。方法:培养CAL-27和SCC-15细胞,采用不同浓度白藜芦醇(0、50、100、200、400、800 μmol/L)分别处理细胞24 h,噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测其对细胞增殖的影响并计算半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC 50 )值。选用250 μmol/L白藜芦醇或10 nmol/L mTOR抑制剂Rapamycin干预细胞 24 h ,采用2-脱氧葡萄糖类似物[(2-deoxy-2-[(7-nitro-2,1,3-benzoxadiazol-4-yl)amino]-D-glucose,2-NBDG]法检测细胞葡萄糖摄取率;比色法检测细胞上清中乳酸含量、细胞内糖酵解关键酶己糖激酶(hexokinase,HK)和丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)活性;Western blot检测细胞中己糖激酶2(hexokinase2,HK2)、PKM2、mTOR和磷酸化mTOR(phosphorylation mTOR,p-mTOR)等蛋白表达情况。结果:白藜芦醇对两株OSCC细胞的增殖有明显的抑制作用( P <0.05),并呈现浓度依赖性。白藜芦醇可显著抑制两株OSCC细胞的葡萄糖摄取能力以及降低乳酸的产生量( P <0.05),并可抑制两株细胞PK活性( P <0.05)、下调PKM2蛋白的表达( P <0.05),但对HK活性及HK2蛋白的表达无显著影响( P >0.05)。同时,白藜芦醇干预还可显著降低细胞内p-mTOR水平( P <0.05)。另外,Rapamycin干预也可抑制两株细胞的葡萄糖摄取能力、降低细胞上清中乳酸的产生量和细胞内p-mTOR水平,同时也可下调PKM2蛋白的表达。结论:白藜芦醇可抑制OSCC细胞的糖酵解作用,其机制可能与抑制mTOR/PKM2轴通路相关。

CircTP53调节miR-873-5p/CCND1轴对甲状腺癌细胞增殖、凋亡和迁移侵袭的影响

目的:探讨环状TP53(CircTP53)调节miR-873-5p/细胞周期蛋白1(CCND1)轴对甲状腺癌细胞增殖、凋亡和迁移侵袭的影响。方法:体外培养人甲状腺癌细胞TPC-1,随机分为对照组、CircTP53 siRNA、CircTP53 siRNA阴性对照组、共转染组。检测各组TPC-1细胞CCND1上皮间质转化标志蛋白(Vimentin、E-cadherin)表达。结果:与人甲状腺正常细胞Nthy-ori 3-1相比,人甲状腺癌组织源细胞和人甲状腺癌细胞株TPC-1、C643、SW579中CircTP53、CCND1 mRNA表达升高(P<0.05),miR-873-5p表达降低(P<0.05)。与对照组相比,CircTP53 siRNA组凋亡蛋白Bax/Bcl-2比值、细胞miR-873-5p及E-cadherin蛋白表达均升高(P<0.05)。结论:敲低CircTP53可通过促进miR-873-5p分泌下调CCND1表达,抑制甲状腺癌细胞集落形成,降低细胞活力及迁移侵袭活性,并促细胞凋亡。

运用CRISPR/Cas9技术构建敲除体轴抑制蛋白1(AXIN1)基因的ACT-1人未分化甲状腺癌细胞系

目的构建体轴抑制蛋白1(AXIN1)基因敲除的ACT-1人未分化甲状腺癌单克隆细胞系。方法用分子克隆技术及成簇的规律间隔的短回文重复序列/Cas9核酸酶(CRISPR/Cas9)基因编辑技术构建AXIN1基因敲除的单克隆细胞系;采用实时荧光定量PCR检测ACT-1细胞的AXIN1 mRNA水平,Western blot法检测AXIN1蛋白水平。结果通过T7检测成功获得有效的两个单链导向RNA(sgRNA)Cr3及Cr5;通过酶切鉴定及测序成功构建携带绿色荧光蛋白(GFP)的靶向AXIN1的sgRNA病毒载体;成功获得包括阴性对照在内的4个单克隆ACT-1未分化甲状腺癌细胞系;敲除组细胞AXIN1 mRNA及蛋白水平均明显降低。结论采用CRISPR-Cas9技术成功建立了敲除AXIN1基因的ACT-1未分化甲状腺癌细胞系。

红景天苷调节miR-26a-5p/JAG1/Notch-1信号轴对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学功能的影响

目的探讨红景天苷(SAL)调节微小RNA-26a-5p(miR-26a-5p)/JAG1/神经源性基因Notch同源蛋白1(Notch-1)信号轴对瘢痕疙瘩(KD)成纤维细胞(HKF)生物学功能的影响。方法将HKF细胞随机分为对照组(Control组)、SAL低浓度组(SAL-L组,50μmol/L SAL)、SAL高浓度组(SAL-H组,100μmol/L SAL)、SAL高浓度+miR-NC组(SAL-H+miR-NC组)、SAL高浓度+miR-26a-5p mimics组(SAL-H+miR-26a-5p mimics组)、SAL高浓度+NC-inhibitor组(SAL-H+NC-inhibitor组)、SAL高浓度+miR-26a-5p inhibitor组(SAL-H+miR-26a-5p inhibitor组)。CCK-8法检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡与细胞周期;RT-qPCR检测各组细胞中的miR-26a-5p、JAG1和Notch-1 mRNA的表达;Western blot检测细胞中JAG1和Notch-1蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-26a-5p与JAG1的关系。结果与Control组相比,SAL-H组HKF细胞增殖能力(24 h)、迁移距离、侵袭细胞个数、S期细胞比例、JAG1和Notch-1 mRNA和蛋白表达显著减少(P<0.05),细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例、miR-26a-5p表达显著增加(P<0.05);与SAL-H组和SAL-H+miR-NC组相比,SAL-H+miR-26a-5p mimics组相应指标变化与上述变化相同;miR-26a-5p inhibitor减弱了SAL-H对HKF细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用,减弱了HKF细胞凋亡。miR-26a-5p靶向负调控JAG1表达。结论SAL可能通过上调miR-26a-5p,靶向抑制JAG1/Notch-1信号轴抑制HKF细胞增殖、迁移、侵袭,促进细胞凋亡,改善KD。

lncRNASOX2-OT调节miR-215-5p/ZEB2轴抑制人前列腺癌细胞系增殖和上皮间质转化研究

目的探讨长非编码RNA SRY盒转录因子2重叠转录本(lncRNA SOX2-OT)调节miR-215-5p/E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)轴对前列腺癌细胞增殖和上皮间质转化(EMT)的影响。方法将PC-3细胞分为对照组、si-SOX2-OT组、si-NC组、si-SOX2-OT+anti-miR-215-5p组,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中SOX2-OT、miR-215-5p与ZEB2表达。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)及5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色法检测PC-3细胞增殖;流式细胞术检测PC-3细胞凋亡率;Transwell检测PC-3细胞迁移、侵袭;qRT-PCR检测PC-3细胞miR-215-5p、ZEB2 mRNA、凋亡蛋白与EMT标志蛋白转录表达;Western blot检测PC-3细胞ZEB2、凋亡蛋白与EMT标志蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证PC-3细胞中SOX2-OT对miR-215-5p及miR-215-5p对ZEB2的靶向调节作用。结果与人前列腺上皮细胞相比,人前列腺癌组织源细胞和人前列腺癌细胞株PC-3、DU 145、22RV1中SOX2-OT、ZEB2 mRNA表达升高,miR-215-5p表达降低(P<0.05)。与对照组相比,si-SOX2-OT组细胞活力、EdU阳性率、迁移细胞数、侵袭细胞数、细胞ZEB2、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)及Vimentin mRNA和蛋白表达均降低,细胞凋亡率、miR-215-5p及Bcl-2相关X基因(Bax)、E-cadherin mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05)。下调miR-215-5p表达可减弱敲低SOX2-OT对PC-3细胞的影响。结论敲低SOX2-OT可通过促进miR-215-5p表达而下调ZEB2的表达,从而抑制前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和EMT,并诱导细胞凋亡。

胃癌患者组织中p53、axin蛋白表达与hp感染和病理特征的关系分析

目的探讨胃癌组织中P53、轴蛋白(Axin)表达与幽门螺旋杆菌(Hp)感染和病理特征的关系。方法回顾性分析2017年2月-2019年5月医院收治的88例经病理证实的胃癌患者的临床资料。检测并统计胃癌组织及癌旁组织P53、Axin蛋白表达情况;检测胃癌组织中Hp感染情况,依据是否发生Hp感染将其分为Hp感染者与未感染者,统计Hp感染者与未感染者胃癌组织中P53、Axin蛋白表达情况;对比不同病理特征患者胃癌组织中P53、Axin蛋白表达情况。结果胃癌组织中P53蛋白阳性表达率显著高于癌旁组织(P<0.05),胃癌组织中Axin蛋白阳性表达率显著低于癌旁组织(P<0.05);Hp感染者的P53蛋白阳性表达率显著高于未感染者(P<0.05),Axin蛋白阳性表达率显著低于未感染者(P<0.05);低分化程度、有淋巴结转移、浸润肌层/浆膜层的患者的P53蛋白表达率显著高于高、中分化程度、无淋巴结转移、浸润黏膜/黏膜下层的患者的P53蛋白阳性表达率(P<0.05),低分化程度、有淋巴结转移、浸润肌层/浆膜层的患者的Axin蛋白阳性表达率显著低于高、中分化程度、无淋巴结转移、浸润黏膜/黏膜下层的患者的Axin蛋白阳性表达率(P<0.05)。结论胃癌伴Hp感染者组织中P53蛋白阳性表达率高、Axin蛋白阳性表达率低,且P53、Axin蛋白与胃癌组织分化程度、淋巴结转移、浸润深度关系密切。

miR-214-5p通过DNMT1介导的AXIN2基因DNA甲基化修饰在皮肤基底细胞癌中的作用机制

目的探讨皮肤基底细胞癌中轴抑制蛋白2(Axis inhibition protein 2,AXIN2)基因启动子甲基化对基因转录的影响及miR-214-5p通过靶向DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase1,DNMT1)对AXIN2甲基化率的调控机制。方法收集2022年1月-2023年6月在广州市皮肤病防治所就诊治疗的102例皮肤基底细胞癌(Cutaneous basal cell carcinoma,BCC)患者作为研究对象,提取癌组织和癌旁正常组织标本及基线资料。焦磷酸测序法检测AXIN2基因启动子区甲基化率。实时荧光定量PCR检测AXIN2、DNMT1基因mRNA和miR-214-5p的表达水平。将miR-214-5p模拟物(mimic)、抑制物(inhibitor)及其阴性对照(mimic NC和inhibitor NC)分别对基底细胞癌A431细胞进行转染,48 h后检测DNMT1基因mRNA表达水平和AXIN2基因甲基化率。结果BCC癌组织的AXIN2基因甲基化率显著高于癌旁正常组织(t=5.128,P<0.001),AXIN2基因mRNA相对表达水平显著低于癌旁正常组织(t=7.826,P<0.001),DNMT1基因mRNA表达水平显著高于癌旁正常组织(t=4.838,P<0.001),miR-214-5p表达水平显著低于癌旁正常组织(t=5.426,P<0.001)。BCC癌组织的AXIN2基因甲基化率与其mRNA表达水平呈负相关(r=-0.793,P<0.001),DNMT1基因mRNA水平与AXIN2基因甲基化率呈正相关(r=0.814,P<0.001),miR-214-5p表达水平与DNMT1基因mRNA水平呈负相关(r=-0.747,P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验结果证实,DNMT1是miR-214-5p的靶基因。细胞转染后,与mimic NC、inhibitor和inhibitor NC比较,mimic的DNMT1基因mRNA水平、AXIN2基因甲基化率显著降低(P<0.001);而inhibitor的DNMT1基因mRNA水平和AXIN2基因甲基化率相较于其他三组明显上升(P<0.001)。结论miR-214-5p可通过调控下游靶蛋白DNMT1表达,影响AXIN2基因的DNA甲基化率,调控AXIN2基因的表达水平,参与皮肤基底细胞癌的发生机制。