构建轻链次级库提高人抗TNF-α抗体的亲和力

目的使用构建轻链次级库的方法,对已经获得的人源抗TNFα单抗mAb的Fab进行轻链置换,并筛选具有更高亲和力的人源抗TNFαmAb的Fab。方法首先,采用RTPCR扩增正常人全套抗体轻链基因,并与已获得的人源抗TNFαmAb的重链基因配对,构建人源抗TNFα噬菌体抗体的轻链次级库。然后筛选与TNFα具有更高亲和力的克隆。结果经过3轮的生物淘筛biopanning,获得了较原来的人源抗TNFαmAbFab具有更高亲和力的人源抗体Fab。结论轻链次级库筛选法,能有效地提高抗体的亲和力,为解决噬菌体抗体库法制备的人源抗体亲和力较低这一难题,提供了一种有效的方法。

通过构建轻链二级库对人源抗TNF-α抗体进行亲和力成熟

通过构建轻链二级库的方法 ,对人源抗 TNF-α单抗 Fab进行轻链置换 ,并筛选出具有更高亲和力的人源抗 TNF- α单抗的 Fab.首先用 RT- PCR技术扩增正常人全套抗体轻链基因 ,并与已获得的人源抗 TNF- α单抗的重链基因配对 ,构建人源抗 TNF- α噬菌体抗体轻链二级库 ,然后筛选与 TNF- α具有更高亲和力的克隆 .经过三轮的生物淘筛 ( biopanning) ,获得了比原来的人源抗 TNF-α单抗 Fab具有更高亲和力的人源抗体 Fab.轻链二级库筛选法能够有效使抗体的亲和力提高 ,为解决噬菌体抗体库法制备的人源抗体的亲和力较低这一难题提供了一种有效的方法 .