无载体主干序列的bar和cecropin B基因表达框共转化水稻

基因枪等直接转化法可将去除质粒载体主干序列的外源基因表达框导入植物基因组 ,消除质粒主干序列对植物基因组的影响 ,同时由于转基因分子较小 ,比较容易实现多个基因的共转化 ,在植物基因工程育种上有重要的应用价值。研究了基因枪介导外源基因表达框 (包括启动子、基因开放阅读框和终止子 )转化水稻的影响因素和转基因的整合模式 ,结果表明 :(1)基因枪介导外源基因表达框转化水稻的频率约在 0 1%～ 0 5 %之间 ,非选择标记基因与选择标记基因的共转化频率约为 5 0 %～ 6 0 % ,增加基因表达框DNA浓度可提高转化率。相同基因构建物对不同品种水稻的转化率不同 ,基因构建物的侧边序列对基因枪转化的品种差异可能具有重要影响。 (2 )非选择标记基因cecropinB表达框在水稻基因组内整合模式简单 ,仅有 1～ 3个拷贝 ;筛选标记基因bar表达框却比完整质粒转化后的整合模式复杂得多 ,插入拷贝数在 4～ 14个之间。线形基因表达框的游离DNA末端和CaMV

转基因水稻T-DNA侧翼序列的扩增与分析

利用现有的转抗白叶枯病基因Ｘａ２１的水稻材料，通过ＴＡＩＬ－ＰＣＲ技术扩增出携带Ｘａ２１基因的Ｔ－ＤＮＡ的侧翼序列。对２４个有效扩增片段的序列分析结果表明，其中１４个侧翼序列是水稻ＤＮＡ，９个含载体主干序列，１个是外源基因Ｘａ２１片段。１４个Ｔ－ＤＮＡ侧翼的水稻ＤＮＡ序列与直接转化法外源基因整合位点的基因组序列具有不同的特点。这些Ｔ－ＤＮＡ在水稻染色体上整合后其两端序列的特点类似于在转基因双子叶植物中观察到的现象。在含主干序列的侧翼序列（３７．５％，９ ／ ２４）中，载体主干序列是以不同的类型出现的。