金针菇免疫调节蛋白FIP-fve在毕赤酵母中的表达研究

金针菇免疫调节蛋白FIP-fve是隶属于真菌免疫调节蛋白家族的小分子功能蛋白质,在生物医学研究和功能食品应用中有重要价值,但天然蛋白产量较低。本文构建了真核表达载体pPIC9K-FIP-fve后转入毕赤酵母GS115。结果:甲醇诱导获得高效分泌表达的可溶性蛋白,表达率40%以上,经纯化,蛋白产率为121.6 mg/L。本研究为FIP-fve重组蛋白应用奠定了基础。

HIV-1 C亚型密码子优化gp120基因重组腺病毒载体的构建及表达

目的构建含有HIV-1C亚型gp120基因重组腺病毒载体，并在293细胞中表达gp120蛋白。方法PCR扩增，获得HIV-1C亚型gp120片段，定向克隆人腺病毒转移载体pTrack-CMV，线性化后转化至含有腺病毒骨架载体pAd-easy-1的大肠埃希菌BJ5183，获得重组子prAd—gp120，PacI酶切纯化后转染293细胞，包装成复制缺陷型重组腺病毒vAd—gp120。结果经PCR、酶切及DNA测序，插入片段大小、方向正确，获得了具有感染力的vAd—gp120重组腺病毒；通过Western印迹检测，重组腺病毒在293细胞中表达出分子量为120kD的蛋白。结论成功构建了含有HIV-1C亚型gp120基因重组腺病毒载体，并获得该基因的表达。

大鼠微小RNA miR-16的克隆及其慢病毒表达载体的构建

目的克隆微小RNArno—miR-一16，构建其慢病毒表达载体pLV—miR-16并包装成慢病毒颗粒，为进一步研究miR一16的功能奠定了实验基础。方法从大鼠细胞基因组中用PCR的方法扩增miR-16的前体，构建了miR-16的重组表达载体pLV—miR-16，脂质体法将重组慢病毒载体和包装质粒混合物（pPACK—GAG、pPACK—REV和pVSV）共转染包装细胞293TN细胞，包装产生慢病毒，以293TN细胞绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）的表达水平测定病毒滴度。结果经PCR扩增检测阳性菌落和测序证实，成功构建携带大鼠miR-16基因重组慢病毒载体。倒置荧光显微镜下观察可见包装细胞293TN呈绿色荧光，并测得10^8〉ifu／ml。结论成功构建大鼠慢病毒载体pLV—miR-16，为深入研究rno—miR-16的生物学功能奠定了基础。