载脂蛋白ApoE的原核表达以及与PrP蛋白间相互作用的初步研究

利用RT-PCR方法从人源细胞系SH-SY5Y cDNA中扩增出载脂蛋白ApoE基因,并在pET32a载体中表达融合蛋白His-ApoE,以纯化的融合蛋白免疫实验用兔获得特异性抗体,利用ELISA及免疫共沉淀方法对ApoE及PrP之间的相互作用进行研究。结果表明,SDS-PAGE显示表达的His-ApoE蛋白的相对分子量约为54 000,所制备的抗血清ELISA效价可达到1∶406 900,并能够有效地识别重组及动物组织中的内源性ApoE蛋白。ELISA和免疫共沉淀实验均显示,原核表达的ApoE可与全长的PrP蛋白(PrP23-231)在体外发生相互作用,其作用位点可能位于PrP蛋白的N端。这些结果为TSE经血传播的机制研究提供了新思路。

^(18)F-FDG PET/CT摄取值及血清载脂蛋白A1、谷胱甘肽对不同运动障碍亚型帕金森病的预测价值

目的:探讨^(18)F-脱氧葡萄糖(^(18)F-FDG)正电子发射断层扫描-计算机断层扫描(PET/CT)摄取值及血清载脂蛋白A1(Apo A1)、谷胱甘肽(GSH)用于不同运动障碍亚型帕金森病的预测价值。方法:选取2020年12月至2022年12月在临沂市人民医院就诊的84例帕金森病患者,根据国际运动障碍协会统一帕金森病评定量表(MDS-UPDRS)将患者分为震颤为主型(TD)组(50例)和姿势不稳或步态障碍型(PIGD)组(34例)。比较不同运动障碍亚型帕金森病患者^(18)F-FDGPET/CT的^(18)F-FDG摄取值、血清Apo A1及GSH水平,并通过受试者工作特征(ROC)曲线分析上述3项指标联合预测不同运动障碍亚型帕金森病的价值;验证^(18)F-FDG摄取值、血清Apo A1及GSH联合检测对不同运动障碍亚型帕金森病患者预测结果与患者实际亚型的一致性。结果:TD组丘脑的^(18)F-FDG摄取值显著低于PIGD组;TD组血清Apo A1水平显著高于PIGD组、TD组血清GSH水平显著高于PIGD组,差异有统计学意义(t=3.669、2.758、2.824,P<0.05);ROC曲线下面积(AUC)分析显示,丘脑^(18)F-FDG摄取值、Apo A1及GSH联合预测不同运动障碍亚型帕金森病的AUC为0.858;^(18)F-FDG摄取值、血清Apo A1及GSH联合对不同运动障碍亚型帕金森病患者预测结果与患者实际亚型的一致性较高(Kappa=0.804)。结论:^(18)F-FDG PET/CT摄取值、血清Apo A1及GSH联合应用对不同运动障碍亚型帕金森病有较好的的预测价值。

基因芯片法检测载脂蛋白E(ApoE)基因型试剂性能验证

目的:评价利用基因芯片法检测载脂蛋白E(ApoE)基因型检测试剂性能。方法:利用基因芯片法检测载脂蛋白E(ApoE)6种不同的基因型:E2/E2、E3/E3、E4/E4,E3/E4、E2/E3、E2/E4。其检测结果与直接测序结果比较。结果:该方法的准确性,精密度均>90%,与测序法符合率100%。结论:利用基因芯片法检测载脂蛋白E(ApoE)基因型检测试剂性能有很好的准确性,精密度。

载脂蛋白E与阿尔茨海默病的关系

阿尔茨海默病(Alzheimerdisease,AD)是最常见的一种老年性痴呆症,临床上以进行性记忆丧失和认知功能障碍为特征。流行病学资料表明,载脂蛋白E(apolipoproteinE,ApoE)的基因多态性与AD密切相关。ApoE不但影响了AD的发生年龄与危险性,还与AD特征性病理改变神经原纤维缠结(neurofibrillarytangle,NFT)和老年斑(se nileplaque,SP)共定位。研究发现,ApoE可促进β-淀粉样肽(β-amyloidpeptide,Aβ)的沉积和SP的形成,C末端切除的ApoE片段则促使Tau蛋白的过度磷酸化及NFT的形成,并进一步引起神经变性和行为缺陷。同时,ApoE还与炎症因子的表达相关。上述证据均提示了ApoE及其基因多态性在AD发病机制中的重要作用。

江苏汉族人群心脑血管病患者载脂蛋白E基因研究

目的:探讨用基因测序法检测载脂蛋白E(ApoE)基因多态性及其与心脑血管疾病之间的关系。方法:应用基因测序方法检测了193例心脑血管疾病患者和100例无血缘关系的健康汉族人群ApoE基因型。结果:ε3/3基因型高血压组频率为64.3%,高血压+冠心病组为57.7%,高血压+脑血管病组为62.2%均明显低于对照组的86%(P<0.05);而ε3/4基因型频率,高血压组为21.4%,高血压+冠心病组为19.2%,高血压+脑血管病组为24.4%,均显著高于对照组的6%(P<0.05);ε4/4基因型高血压+冠心病组频率为5.1%明显高于对照组0%(P<0.05)。分析等位基因频率,高血压组和高血压+冠心病组、高血压+脑血管病组ε3等位基因频率分别为80.7%,74.4%和78.9%,明显低于对照组92.5%(P<0.05),ε4等位基因频率分别为12.1%,16.7%和14.5%,明显高于对照组的3.5%(P<0.05),差异有明显统计学意义。两组间其它各基因型无统计学差异。结论:应用基因测序方法进行ApoE基因分型是最全面、最直接、可靠的方法;ε4等位基因是心脑血管疾病共同的遗传易患因子,而ε3等位基因具有保护作用。

血清同型半胱氨酸、超敏C-反应蛋白、载脂蛋白E与脑血管疾病相关性的研究

目的探讨血清同型半胱氨酸(Hcy)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、载脂蛋白E(ApoE)与脑血管疾病的关系。方法选择脑血管疾病患者82例,分为两组,其中脑梗死组45例,脑出血组37例,正常对照组50例,测定其血清同型半胱氨酸、超敏C-反应蛋白、载脂蛋白E水平。结果脑梗死组和脑出血组血清Hcy和hs-CRP均有不同程度增高,与正常对照组比较均有显著性差异(P<0.01),ApoE也升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。以上指标在脑梗死组与脑出血组的差异无统计学意义(P>0.05),疾病组hs-CRP水平与Hcy水平呈正相关(r=0.465,P<0.01)。结论血清Hcy和hs-CRP升高与脑血管病相关。

载脂蛋白E基因分析中血样处理方法比较研究

目的为筛选快速、简便、灵敏的适用于大规模流行病学调查的载脂蛋白E(ApoE)基因分析的血样处理方法,对不同血样处理方法进行比较研究。方法建立本实验室ApoE基因分析体系,并对蒸馏水萃取法、血细胞裂解法、Tris-EDTA(TE)萃取法等血样处理方法进行了比较。结果在蒸馏水萃取法、血细胞裂解法、TE萃取法中提取效率最高的是血细胞裂解法,蒸馏水萃取法次之,TE萃取法最低;在灵敏度方面,蒸馏水萃取法灵敏度最高;在血片干燥程度对PCR结果的影响中,只有彻底干燥24h后进行处理,才能获得清晰的PCR结果;在经济方面,本实验室体系可获得与使用进口试剂盒同样的检测效果,而进口试剂盒价格昂贵。结论蒸馏水萃取法非常适合大规模流行病学调查,具备快速、简便、灵敏等优点。

脑动静脉畸形与载脂蛋白E基因多态性的关系研究

目的：脑动静脉畸形（cerebral arteriovenous malformation，cAVM）发病原因尚未被完全揭示，本研究从基因多态性的角度探索cAVM直径的大小与载脂蛋白E基因（apolipoprotein E，APOE）亚型APOE ε2、ε3和ε4多态性之间的关系。方法：对颅脑CT血管造影（CT angiography，CTA）检查表现为cAVM病变的患者，取其静脉血液使用限制性片段长度多态性聚合酶链反应（PCR—RFLP）技术来检测APOE基因型，并使用χ^2检验和Logistic回归分析来分析其相关性。结果：在165例纳入患者中，APOEε4携带者cAVM直径〉3cm的比例明显高于非ε4携带者的发生率，单因素和多因素Logistic回归分析均发现ε4是cAVM直径〉3cm的危险因素。结论：脑内直径〉3cm的cAVM的发病可能与患者携带有APOEε4相关。

SLCO1B1、ApoE基因多态性对瑞舒伐他汀治疗血脂异常超高危动脉粥样硬化性心血管疾病患者的影响

目的 探究SLCO1B1、载脂蛋白(Apo)E基因多态性对瑞舒伐他汀治疗血脂异常所致超高危动脉粥样硬化性心血管疾病(ASCVD)患者的影响。方法 268例血脂异常的超高危ASCVD患者,按照基因型检测结果分组。观察治疗前后各组总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、血清肌酐(Cr)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)水平,研究期间患者肌痛发生情况。结果 所有入组患者中ApoE等位基因分布为e2 25例,e3 201例,e4 42例;基因型分布:E2/E2 6例,E2/E3 29例,E3/E3 150例,E2/E4 9例,E3/E4 73例,E4/E4 1例。SLCO1B1中521 T/C位点基因型分布分别为:TT 190例,TC 66例,CC 12例;SLCO1B1中388 A/G位点基因型分布分别为:AA 8例,AG 100例,GG 160例。符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05)。治疗前,TC+CC组与TT组各指标比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,TC+CC组LDL-C水平显著低于TT组(P<0.05),TC+CC组CK水平显著高于TT组(P<0.05)。治疗前后,AA、AG与GG组血脂及肝肾功能指标差异无统计学意义(P>0.05)。治疗前,e2、e3与e4组血脂及肝肾功能指标差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,e2、e3与e4组LDL-C水平差异有统计学意义(P<0.05)。SLCO1B1 521 T>C中TT、TC+CC的肌痛发生率分别为4.21%(8/190)、11.54%(9/78),不同基因型患者肌痛发生率差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ApoE基因中e2等位基因与E3/E3基因型有效降低脂异常所致的超高危ASCVD患者的LDL-C水平,e4等位基因的ASCVD者服用瑞舒伐他汀的疗效欠佳,SLCO1B1 521T>C基因多态性会导致瑞舒伐他汀引起肌痛,SLCO1B1 521T>C中CC基因型会更加容易出现肌痛现象。瑞舒伐他汀治疗期间应当注重SLCO1B1、ApoE基因多态性的检测。

慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者高密度载脂蛋白A-Ⅰ、A-Ⅱ和血清淀粉样蛋白A水平变化及意义

目的探讨慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)患者血清高密度载脂蛋白(Apo)A-Ⅰ、A-Ⅱ和血清淀粉样蛋白(SA)A水平变化及意义。方法 100例AECOPD患者(试验组)于治疗前后检测血清中总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、ApoA-Ⅰ、ApoA-Ⅱ、SAA浓度,并选择30例健康人群作为对照组。结果试验组治疗前后TC、HDL-C水平与对照组相比均无统计学差异(P>0. 05);治疗前血清ApoA-Ⅰ、ApoA-Ⅱ水平明显低于对照组,而SAA水平明显高于对照组(P<0. 01);治疗后ApoA-Ⅰ、ApoA-Ⅱ水平较治疗前明显升高,SAA水平较治疗前明显下降(均P<0. 01),较对照组均无统计学差异(P> 0. 05)。结论AECOPD患者血清TC、HDL-C水平无明显变化,ApoA-Ⅰ、ApoA-Ⅱ下降和SAA的上升是AECOPD患者脂质代谢异常的重要原因;表明Apo在AECOPD期起重要作用。

子宫内膜癌及非典型增生患者血清载脂蛋白AI水平及其模拟肽L4F对子宫内膜癌细胞增殖的抑制作用

目的探究血清载脂蛋白AI(apolipoprotein AI,apo AI)及其模拟肽L4F在子宫内膜癌(endometrial cancer,EC)及非典型增生(atypical endometrial hyperplasia,AEH)患者中的水平及其作用。方法共纳入134名研究对象,包括41例正常对照受试者,48例子宫内膜AEH患者和45例EC患者。测定和比较其血清总胆固醇(total cholesterol,TCH)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白(high-density lipoprotein,HDL)、低密度脂蛋白(lowdensity lipoprotein,LDL)、载脂蛋白AI和载脂蛋白B(apo B)水平。L4F处理EC细胞系(HEC-1A和ECC-1),作用浓度为0、5、20、40μg/mL,作用时间为48 h;L4F处理EC类器官,作用浓度为20μg/mL,作用时间为7天。CCK8检测EC细胞系增殖活力。光学显微镜下观察EC类器官形态大小改变。荧光免疫组织化学对Ki67表达进行定量以评估EC类器官的增殖活力。Western blot评估细胞系及类器官AMPK磷酸化水平以及Nanog表达水平。结果子宫内膜AEH组及EC组的血清TCH、TG、HDL、LDL水平与正常对照组相比差异无统计学意义;子宫内膜AEH组[(0.970±0.201)g/L]及EC组[(0.913±0.163 g/L)]血清的apo AI水平均低于正常对照组[(1.129±0.257 g/L)],差异有统计学意义(P<0.001)。L4F抑制EC细胞系以及EC类器官的增殖活力;L4F促进EC细胞的AMPK磷酸化以及抑制Nanog蛋白水平。结论EC及AEH患者血清apo AI处于低水平,apo AI模拟肽L4F对EC具有显著的抗肿瘤作用。

洛伐他汀及阿司匹林对冠心病患者载脂蛋白B的影响

目的:探讨洛伐他汀及阿司匹林对冠心病患者载脂蛋白B(Apo B)的影响。方法:观察218例冠心病患者的载脂蛋白B(Apo B)在用药前后的变化。其中洛伐他汀组74例,阿司匹林组58例,洛伐他汀和阿司匹林联用组86例。结果:3组患者用药前后载脂蛋白B(Apo B)的改变差异均有统计学意义(P<0.05),而洛伐他汀及阿司匹林联用组用药后载脂蛋白B(Apo B)的浓度与另两组用药后载脂蛋白B(Apo B)的浓度比较差异亦有统计学意义(P<0.01)。结论:洛伐他汀和阿司匹林联用对载脂蛋白B(Apo B)优于单一使用洛伐他汀或阿司匹林。

原肌球蛋白调节蛋白1对ApoE敲除小鼠糖脂代谢的影响

目的研究原肌球蛋白调节蛋白1(Tmod1)对载脂蛋白E(ApoE)基因敲除小鼠的糖脂代谢的影响。方法将心脏过表达而全身其他部位敲除Tmod1的小鼠(TOT/Tmod1-/-)与ApoE-/-小鼠杂交获得ApoE和Tmod1的双敲小鼠(ApoE-/-/TOT/Tmod1-/-)。对ApoE-/-小鼠和双敲小鼠进行高脂饮食喂养,检测2种小鼠的体质量改变、脂肪含量、血脂水平、口服糖耐量(OGTT)和胰岛素耐量(ITT)。对肝脏和皮肤进行组织学分析。结果双敲小鼠较ApoE-/-小鼠体质量减轻,体脂含量降低(P<0.05)。但喂养高脂饮食8周后,双敲小鼠体质量增加量、皮下脂肪组织的厚度、三酰甘油和总胆固醇水平均高于ApoE-/-小鼠(P<0.05),而脂肪肝、口服葡萄糖耐量和胰岛素耐受水平则明显降低(P<0.05)。结论Tmod1参与调节高脂饮食引起的ApoE-/-小鼠糖脂代谢水平的改变。

Alzheimer病患者性激素水平测定与ApoE基因分型研究

检测散发性Alzheimer病(AD)患者与健康老年人血清雌二醇(E2)、睾酮(T)、促滤泡成熟素(FSH)、促黄体生成素(LH)水平,分析ApoE基因型和性激素水平与中国AD患者的相关性.采用放射免疫分析方法对81例Alzheimer病患者和98例正常老年人性激素水平测定,用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)方法分析ApoE基因型.结果为:AD组女性血清雌二醇37.25 pg.mL-1、男性睾酮2.22 ng.mL-1、促滤泡成熟素男性10.39 U.L-1、女性21.52 U.L-1、促黄体生成素男性7.54 U.L-1、女性9.42 U.L-1;正常组女性血清雌二醇39.09 pg.mL-1、男性睾酮4.07 ng.mL-1、促滤泡成熟素男性11.74 U.L-1、女性28.93 U.L-1、促黄体生成素男性1.62 U.L-1、女性6.28 U.L-1.AD组和正常对照组的ApoE基因频率存在差异,携带ApoE4的比例分别为16.1%、12.2%.ApoE4等位基因可能是中国散发性AD发生的危险因素.携带ApoE4基因型的AD患者血清雌二醇、睾酮水平明显低于对照组.提示雌二醇、睾酮水平下降可能与AD发病相关.

大鼠实验性脑挫伤后不同时间脑apoE的表达

目的观察大鼠实验性脑挫伤后脑内apo E蛋白变化的时空性规律。方法采用自由落体撞击法致大鼠脑挫伤模型，观察伤后不同时间（0．5h、2h、6h、12h、24h、3d、7d、14d）apo E蛋白的变化，并用计算机图像分析技术作定量统计分析。结果伤后0．5h组脑皮质神经元apo E出现阳性表达，3d达到高峰，随后下降；伤后0．5h组在海马出现apo E强阳性反应，CA1区在伤后3d达到高峰，而CA2～CA4区在24h达到高峰，随后逐渐下降，伤后海马apo E表达以CA1区最强。结论挫伤后apo E时空性变化规律可作为脑损伤时间推断、早期诊断及生前伤和死后伤鉴别的一个新的参考指标。

短暂性脑缺血发作患者血清LP(a)、ApoB/ApoA1水平与颈动脉粥样硬化的关系

颈动脉粥样硬化是短暂性脑缺血发作(TIA)的重要危险因子〔1,2〕。脂质代谢紊乱是动脉粥样硬化形成的一个重要机制。本研究旨在探讨颈动脉粥样硬化、血清脂蛋白(LP)(a)、载脂蛋白(Apo)B/Apo A1水平与TIA的相关性。1资料与方法1.1一般资料选取2007年1月至2009年12月我院神经内科收治的102例TIA患者为观察组,其中男65例,女37例,

老年高血脂患者Apo C检测的临床意义

目的 探讨老年高血脂患者血清载脂蛋白CⅡ、CⅢ(ApoCⅡ、CⅢ)的变化及意义。方法 免疫比浊法测定老年不同高血脂组血清ApoCⅡ、ApoCⅢ水平,并分析与其他指标的相关性。结果 老年高血脂患者血清Tch、LDL水平各组间无差异(P >0 0 5 ) ,且与TG浓度无明显相关;TG浓度与HDL水平呈负相关关系(r =0 43 5 ,P <0 0 0 1) ,与ApoCⅡ、ApoCⅢ水平呈正相关关系(r =0 478,0 42 6,P <0 0 0 1) :老年高血脂患者血清ApoCⅡ、ApoCⅢ水平在男女性别间无显著性差异(P >0 0 5 )。结论 血清ApoCⅡ、ApoCⅢ水平与动脉粥样硬化危险因子TG呈正相关。

ApoE基因及相关因素与缺血性脑卒中认知障碍关系的研究进展

近期研究发现载脂蛋白E（apolipoprotein E,ApoE）基因与认知损害有较好的相关性,可能成为认知损害的预测或诊断标准。一些相关基因及因素与认知功能也有相关性。认知功能是人类认识和了解客观事物的能力,主要包括识别、语言、记忆。

Alzheimer病与APOE基因的临床研究

研究Alzheimer病与APOE基因相互关系，以MID作对照。取研究对象静脉血，用聚合酶链式反应（PCR）和CfoI内切酶作载脂蛋白E（APOE）基因的限制性片段长度多态性（RFLP）分析，并观察临床症状、检查神经系统体征、CT及BSSD量表评分．结果APOEε4等位基因频率AD组为18．75％（21／112），MID组为6．67％（6／90），P＜0．01，相差非常显著．提示在上海地区的AD和MID的人群中，病人的APOEε4等位基因与AD的发病可能有较为密切的关联，但未能发现APOEε4等位基因患者有特异性临床症状。

ApoE基因功能及相关疾病模型的研究进展

载脂蛋白E（apolipoproteinE，APOE）基因位于人类第19号染色体上，全长3．7kb，表达产物载脂蛋白是一种富含精氨酸的碱性蛋白。apoE蛋白参与脂质的运输、储存及排泄，同时也参与神经系统的发育和损伤后的修复。目前人类高发的动脉粥样硬化和阿尔茨海默病均与apoE蛋白参与的脂代谢调节异常有关，体外及动物实验研究表明，APOE基因的多态性与冠心病、高脂血症、脑梗塞的发生相关。研究制作APOE转基因及基因敲除或突变的相关动物模型，探明其脂代谢过程，可以更好地了解上述疾病的发病机制，寻找相关疾病的潜在治疗靶点，从而为治疗人类疾病提供更加可行有效的方案。本文总结了人类APOE基因型与apoE蛋白相关的几种疾病发生机制，并对体外研究疾病发展过程的动物模型进行了综述。