血清载脂蛋白B椭偏光蛋白质芯片技术定量检测的条件优化

目的优化椭偏光蛋白芯片技术定量检测血清载脂蛋白B(ApoB)的条件,并观察最佳条件下椭偏光蛋白芯片技术定量检测血清ApoB的准确性。方法用椭偏光蛋白芯片技术检测含有0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mg/m L的载脂蛋白B抗体(anti ApoB)和200μg/m L ApoB标准品的溶液,测得灰度值最高者选为最佳anti-ApoB浓度。用椭偏光蛋白芯片技术检测5、10、20、50、100、200μg/m L ApoB标准品溶液,anti-ApoB浓度为0.3 mg/m L,结果以灰度值表示。然后在上述标准品溶液中加入蛋白G使其终浓度为0.1 mg/m L,再检测一次灰度值。比较两次检测的灰度值,确定是否应该加入0.1 mg/m L蛋白G。最佳条件下椭偏光蛋白芯片技术检测0、5、10、20、50、100、200μg/m L ApoB标准品溶液,计算上述ApoB标准品溶液灰度值与不含ApoB的空白探针溶液(含anti ApoB和蛋白G)灰度值的差值。对上述ApoB标准品溶液浓度和灰度值差值的相关性进行分析,以ApoB标准品溶液浓度为横坐标,灰度值差值为纵坐标描画标准曲线并建立方程。最佳条件下用椭偏光蛋白芯片技术检测16份40倍稀释的已知ApoB浓度(采用免疫比浊法测定)血清的灰度值两次。用上述方程计算16份血清中ApoB浓度,并与其实际ApoB浓度比较。结果最佳anti-ApoB浓度为0.3 mg/m L。与不应用蛋白G者相比,应用0.1 mg/m L蛋白G的椭偏光蛋白芯片技术测得样品的灰度值高(P均<0.05)。以ApoB浓度为横坐标x、灰度差值为纵坐标y描画标准曲线,Maple9.5软件得出的回归方程为:y=-23.116Ln(1-x/60),R2=0.936 4。16份血清ApoB浓度和第一次、第二次用椭偏光蛋白芯片技术检测测得血清ApoB浓度相比P均>0.05。结论椭偏光蛋白芯片技术检测血清ApoB的最佳条件为anti-ApoB浓度0.3 mg/m L,蛋白G浓度0.1 mg/m L。此条件下椭偏光蛋白芯片技术检测血清ApoB结果准确。