载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽3G抗乙肝病毒作用研究进展

载脂蛋白B m RNA编辑酶催化多肽3G(apolipoprotein B m RNA editing enzyme catalytic polypeptide-like 3G,APOBEC3G)是一种天然抗病毒因子,目前研究证明其具有抗乙肝病毒的作用。它可能通过影响HBV DNA逆转录、诱导HBV DNA超突变、包装到HBV病毒粒子中、参与干扰素的抗病毒作用等方式起到抗乙肝病毒的作用。它为新型抗病毒药物的开发和机体天然免疫机制的研究开拓了新的方向,可能对未来的HBV防治提供新的线索并产生重要影响。

人免疫缺陷病毒TAT蛋白转导肽与人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白质3F/3G串联锌结合域的融合表达

目的:分析载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白质3F和3G(APOBEC3F/3G)的蛋白基序,获得具有细胞转导潜力的抗病毒基序融合蛋白。方法:用MotifScan软件对APOBEC3F/3G进行生物信息学分析,找出APOBEC3F/3G中的锌结合域(ZBRs)。通过PCR及多步酶切克隆得到APOBEC3F/3G的3个串联ZBRs基因片段,并将其与人免疫缺陷病毒(HIV)的TAT蛋白转导域基因克隆至原核表达载体(pET32a),转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达。结果:酶切和测序鉴定,得到含有HIV-TAT和3个ZBRs基因的重组质粒;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测分析,融合蛋白在BL21(DE3)中获得表达,占菌体总蛋白的20%。结论:获得含HIV-TAT和3个ZBRs的融合表达重组蛋白,为进一步研究APOBEC3F/3G抗病毒机制,也为其在抗病毒治疗中的应用打下基础。

载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽样3G在不同慢性乙型肝炎患者中的表达及其细胞内定位

目的观察载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽样3G（APOBEC3G）在不同慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染类型患者的外周血单个核细胞（PBMC）及肝组织中的表达水平及其细胞内定位。方法用Westernblot及激光扫描共聚焦显微镜，以健康人为对照，检测不同慢性HBV感染类型患者（慢性乙型肝炎、慢性乙型重型肝炎、肝炎肝硬化、HBV相关性肝癌）的PBMC及肝组织中APOBEC3G的表达状况及其亚细胞定位。多组比较采用方差分析，两两比较采用q检验。结果Western blot结果显示，健康人PBMC中APOBEC3G表达水平极低，慢性乙型肝炎、慢性乙型重型肝炎、肝炎肝硬化和HBV相关性肝癌患者PBMC中APOBEC3G蛋白相对表达水平倍数分别为4．12±0．21、4．07±0．28、4．16±0．36、4．21±0．39，均高于健康人。但不同慢性HBV感染类型患者之间两两比较，PBMC中APOBEC3G的表达水平差异无统计学意义（g值分别为0．931、0．744、1．675、1．675、2．606、0．931，P值均〉0．05）。慢性乙型肝炎患者与HBV相关性肝癌患者比较，肝组织中APOBEC3G表达水平差异无统计学意义（4．40±0．34与4．34±0．43，q=0．588，P〉0．05）。激光扫描共聚焦显微镜观察结果显示PBMC中或肝组织中APOBEC3G表达定位于胞质中，胞核中无表达。结论慢性HBV感染患者虽有APOBEC3G的表达升高，可能只是HBV慢性感染的伴随表现，APOBEC3G是否参与机体抵御HBV感染的过程尚不清楚。

APOBEC3F的真核表达及其抗猪繁殖与呼吸综合征病毒作用的分析

为研究载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样3F(APOBEC3F)对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)增殖的影响,本研究根据GenBank中登录的猪源APOBEC3F基因序列(EU871586)设计引物,经PCR从苏太猪外周血单个核淋巴细胞中扩增APOBEC3F基因,经测序后构建系统进化树分析其遗传进化特性。结果显示,猪源APOBEC3F基因编码区(CDS)长1257 bp,编码418个氨基酸,与其他物种该基因的同源性在60%~70%。利用扩增的APOBEC3F基因构建真核表达载体pcDNA3.1(+)5'Flag-APOBEC3F经菌液PCR和测序鉴定正确后,转染Marc-145细胞,采用间接免疫荧光试验(IFA)和western blot鉴定重组APOBEC3F蛋白的表达。IFA结果显示,转染pcDNA3.1(+)5'Flag-APOBEC3F的Marc-145细胞质中出现特异性红色荧光;western blot结果显示,转染pcDNA3.1(+)5'Flag-APOBEC3F的细胞样品在44 ku处有特异性条带,表明猪源APOBEC3F在Marc-145细胞中获得了表达。在Marc-145细胞中转染不同剂量的pcDNA3.1(+)5'Flag-APOBEC3F或不同剂量的针对APOBEC3F的siRNA,过表达或抑制APOBEC3F表达后感染PRRSV,通过RT-qPCR检测PRRSV N基因mRNA的转录水平,采用western blot检测细胞中PRRSV N蛋白的表达水平,采用TCID50测定PRRSV滴度。结果显示,在Marc-145细胞中过表达的APOBEC3F可以显著抑制PRRSV N基因mRNA转录水平(P<0.01)和N蛋白的表达水平,降低PRRSV滴度(P<0.01、P<0.001),表明APOBEC3F具有抑制PRRSV增殖的作用,且抑制效率与重组质粒的转染剂量呈正相关。在Marc-145细胞中抑制APOBEC3F的表达后,PRRSV N基因的mRNA转录水平(P<0.01)、N蛋白的表达水平与PRRSV滴度(P<0.05、P<0.001)均显著升高,表明抑制APOBEC3F的表达具有促进PRRSV增殖的作用,且该促进效率与针对APOBEC3F的siRNA转染剂量呈正相关。本研究首次证明APOBEC3F对PRRSV在Marc-145细胞中的增殖有抑制作用,为研究APOBEC3F功能提供实验依据,也为研究抗PRRSV相关机制的研究提供参考。

慢性乙型肝炎患者外周血单核细胞中载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3G的表达及其临床意义

目的探讨载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3G感染的不同阶段及应用不同抗病毒药物治疗期间水平的差异,推测固有免疫在抗病毒治疗中的作用。方法选择应用聚乙二醇化干扰素α-2a抗病毒治疗的慢性乙型肝炎(CHB)患者30例,口服恩替卡韦抗病毒治疗的CHB患者30例,未应用抗病毒治疗的CHB患者和乙型肝炎肝硬化代偿期患者各20例;健康成人20例为健康对照。检测CHB患者不同感染阶段及应用不同抗病毒药物期间的HBV DNA载量、ALT水平,应用荧光定量RT-PCR分析外周血单个核细胞(PBMC)中APOBEC3G mRNA的含量。结果与健康成人比较,CHB、肝硬化患者应用恩替卡韦及干扰素抗病毒治疗期间,患者PBMC中APOBEC3G mRNA的含量分别升高1.4倍(t=-3.166、P=0.003)、1.37倍(t=-2.206、P=0.0335)、1.44倍(t=-3.381、P=0.0014)和3.95倍(t=-4.790、P=0.0002)。未应用抗病毒治疗的CHB患者血中的APOBEC3G mRNA的含量与应用恩替卡韦治疗患者差异无统计学意义(t=-0.242、P=0.8097)。应用干扰素治疗的CHB患者PBMC中APOBEC3G mRNA的含量分别是未经治疗的CHB患者及应用恩替卡韦治疗患者的2.36倍(t=4.085、P=0.0002)和2.40倍(t=4.9、P<0.0001)。CHB炎患者ALT水平升高者PBMC中APOBEC3G mRNA的含量增高1.35倍,差异具有统计学意义(t=2.667、P=0.0112)。HBV DNA载量高低与A3G mRNA含量无关(F=0.2124、P=0.8871)。结论APOBEC3G在干扰素抗病毒治疗中起着重要作用。

宫颈癌组织APOBEC3A蛋白的表达与高危型HPV感染的相关性研究

目的:探讨宫颈癌组织中载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3A(APOBEC3A)表达与高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染的关系。方法:采用免疫组化法检测26例宫颈癌、27例宫颈上皮内瘤变(CIN)I～III和22例正常宫颈组织APOBEC3A蛋白的表达,同时使用凯普分型检测试剂盒对3组样品分别进行高危HPV16/HPV18分型检测。以脂质体法转染APOBEC3A质粒进入HeLa细胞,RT-qPCR与Western blotting验证APOBEC3A对高危型HPV18 E6 mRNA以及蛋白表达的影响。结果:宫颈癌组织、CIN组织以及正常宫颈组织中APOBEC3A蛋白表达的阳性率分别为46.2%、92.6%和86.4%,宫颈癌组织中APOBEC3A蛋白表达较正常宫颈组织明显下降(P<0.01)。宫颈癌组织、CIN及正常宫颈组织中HPV16感染阳性率分别为92.3%、77.8%和54.5%;HPV18感染阳性率分别为80.8%、51.8%和68.2%;APOBEC3A蛋白表达与HPV18感染阳性率呈负相关(P<0.05)。增加HeLa细胞中APOBEC3A的表达明显降低了HPV18 E6 mRNA以及蛋白的表达。结论:在宫颈癌组织中APOBEC3A高表达可以对抗HPV18感染,并抑制HPV18 E6的转录和表达。

激光扫描共聚焦显微镜研究APOBEC3G蛋白的亚细胞定位

采用RT-PCR技术,从HIV的非允许性H9细胞中获得载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(APOBEC3G)的全长cDNA。APOBEC3G cDNA全长1 155nt,编码384个氨基酸。将APOBEC3G克隆到真核表达载体pEGFP-C3上,转染CD4+HeLa细胞,激光扫描共聚焦显微镜下可观察到表达的GFP-APOBEC3G融合蛋白定位于细胞质。

肝细胞癌组织中APOBEC3s类胞苷脱氨酶基因家族成员的表达观察

目的观察载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3(APOBEC3s)类胞苷脱氨酶基因家族成员在肝细胞癌(HCC)组织中的表达变化,并探讨其意义。方法分别采用实时定量PCR和免疫组化法检测155例HCC患者癌组织和癌旁组织中的APOBEC3s类胞苷脱氨酶基因家族成员A3A、A3B、A3C、A3D、A3F、A3G、A3H的mRNA和蛋白。以癌组织中APOBEC3s类胞苷脱氨酶基因家族成员mRNA相对表达量的中位数为界,将155例HCC患者分为高表达组和低表达组,并分析APOBEC3s类胞苷脱氨酶基因家族各成员mRNA相对表达量与HCC预后的关系。结果 HCC患者癌组织中APOBEC3s类胞苷脱氨酶基因家族成员A3A、A3B、A3C、A3D、A3F、A3G、A3H mRNA相对表达量分别为4. 08±0. 11、6. 61±0. 17、6. 42±0. 10、5. 29±0. 12、6. 64±0. 12、7. 49±0. 07、4. 32±0. 08,HCC患者癌旁组织中APOBEC3s类胞苷脱氨酶基因家族成员A3A、A3B、A3C、A3D、A3F、A3G、A3H mRNA相对表达量分别为2. 93±0. 11、4. 60±0. 11、5. 48±0. 11、5. 22±0. 08、6. 97±0. 08、5. 91±0. 12、4. 21±0. 10,癌组织与癌旁组织中A3A、A3B、A3C、A3G mRNA相对表达量相比,P均<0. 05。HCC患者癌组织中APOBEC3s类胞苷脱氨酶基因家族成员A3A、A3B、A3C、A3D、A3F、A3G、A3H蛋白阳性表达率分别为92. 3%、96. 8%、89. 0%、58. 1%、69. 7%、85. 9%、52. 9%,HCC患者癌旁组织中APOBEC3s类胞苷脱氨酶基因家族成员A3A、A3B、A3C、A3D、A3F、A3G、A3H蛋白阳性表达率分别为61. 3%、63. 2%、57. 4%、61. 9%、74. 8%、47. 7%、47. 7%,癌组织与癌旁组织中A3A、A3B、A3C、A3G蛋白阳性表达率相比,P均<0. 05。155例HCC患者癌组织中A3A mRNA低表达者、高表达者5年生存率分别为27. 3%、17. 7%,两者相比,P <0. 05; A3B mRNA低表达者、高表达者5年生存率分别为30. 0%、17. 1%,两者相比,P <0. 05; A3G mRNA低表达者、高表达5年生存率分别为33. 6%、13. 7%,两者相比,P <0. 05。结论APOBEC3s类胞苷脱氨酶基因家族成员A3A、A3B、A3C、A3G mRNA和蛋白表达水平在HCC癌组织中显著上调,且A3A、A3B、A3G mRNA高表达的HCC患者术后生存率低。

APOBEC3G对HIV-1及其Vif缺失株的抑制作用

目的研究细胞内在抗病毒因子APOBEC3G对HIV-1及其Vif缺失株的抑制作用。方法 HIV-1野生株病毒(BH10WT)和Vif缺失株病毒(BH10ΔVif)分别由转染293T细胞获得,通过感染MT4和H9细胞,分别检测其反转录酶活性。用分子克隆技术构建APOBEC3G与绿色荧光蛋白融合表达的质粒pEGFP-3G。HIV-1野生株和Vif缺失株质粒与不同剂量的pEGFP-3G共转染293T细胞,APOBEC3G-GFP在细胞内融合表达定位通过荧光显微镜观察。所生成的子代病毒粒子的感染力分别由MAGI检测和反转录酶活性检测方法定量。结果 BH10 WT病毒在H9细胞和MT4细胞中均有所复制,在感染MT4细胞后4 d已经具有较高的反转录酶活性。BH10ΔVif病毒感染H9细胞产生的子代病毒的反转录酶活性接近细胞对照水平,而其在MT4细胞中产生的子代病毒的反转录酶活性在感染后12 d有所显现,即非允许性H9细胞内APOBEC3G对ΔVif病毒株具有很强的抑制作用。与绿色荧光蛋白融合表达的APOBEC3G蛋白定位于细胞质。BH10ΔVif转染293T细胞后生成的病毒滴度为2.75×104 U/mL,随着pEGFP-3G共转染量的升高,所产生的子代病毒滴度从1.48×103 U/mL显著降至0.33×103 U/mL。与0.2μg质粒pEGFP-3G共转染产生的BH10ΔVif病毒的感染力比不表达APOBEC3G的相同病毒的感染力降低近20倍。结论 APOBEC3G具有抗HIV活性,同时HIV Vif在病毒复制过程中发挥关键作用,两者之间相互作用的量效关系为我们构建抗病毒药物筛选平台奠定了可靠的实验基础。

载脂蛋白B信使RNA编辑酶催化多肽3G抗乙型肝炎作用的研究进展

乙型肝炎病毒(HBV)是一种DNA病毒,慢性乙型病毒性肝炎可进展至肝硬化及肝癌。载脂蛋白B信使RNA编辑酶催化多肽3G(APOBEC3G)是一种显性胞苷脱氨酶,APOBEC3G HBV DNA正链的1200~2000 nt区域诱导HBV DNA突变,基因多态性Rs8177832可增强APOBEC3G对HBV的抑制作用,促进乙型肝炎e抗原(HBeAg)的血清转化。而HBV x蛋白(HBx)选择性、特异性下调细胞内APOBEC3G蛋白水平。本文就APOBEC3G抗乙型肝炎的研究机制作一综述。

反转录病毒载体介导的猪APOBEC3F在猪源细胞PK15中的表达

目的：利用反转录病毒载体构建猪载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白（APOBEC）3F重组质粒,并实现其在猪肾细胞PK15中的表达。方法：用RT-PCR方法扩增五指山猪来源的外周血淋巴细胞APOBEC3F基因,将其定点插入反转录病毒载体pMSCV neo中,同时于插入位点两侧分别添加FLAG和GFP标签,构建重组质粒pMSCV-FLAG-A3F-GFP,并进行酶切、测序鉴定;将鉴定正确的重组质粒与pVSV-G、pGag-Pol共转染包装细胞HEK293T,分别于转染后48~72 h收集细胞的培养上清以获得假型病毒粒子;用该假型病毒感染猪源细胞PK15,通过PCR、Western印迹检测目的基因的整合及表达。结果：PCR扩增到1254 bp的猪APOBEC3F基因,重组质粒pMSCV-FLAG-A3F-GFP经酶切、测序,结果无误;3质粒共转染HEK293T细胞包装出的假型病毒感染PK15细胞后观察到GFP表达;从感染假型病毒的PK15细胞基因组中扩增到1254 bp的猪APOBEC3F基因,Western印迹检测到78.1×103的猪APOBEC3F蛋白的表达。结论：实现了反转录病毒载体介导的猪APOBEC3F在猪源细胞PK15中的整合与表达,为深入研究该分子对猪内源性反转录病毒（PERV）的抑制作用奠定了基础。

APOBEC3A-HBc融合蛋白的表达及活性鉴定

目的构建载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3A(APOBEC3A)与不同长度和序列的乙型肝炎病毒核心蛋白(HBc)的融合蛋白真核表达载体,研究其表达能力及融合蛋白的细胞内定位及胞嘧啶脱氨基活性。方法采用In-Fusion重组克隆方法,将含有APOBEC3A的PCR产物分别和含有全长HBc、四种C端截短体HBc的PCR扩增片段连接克隆入真核表达载体pc DNA3.0。将重组载体分别转染HEK293 T细胞,用免疫荧光细胞化学染色法检测融合蛋白在HEK293 T细胞中的定位,Western blot法检测融合蛋白的表达水平;尿素变性PAGE法分析融合蛋白的胞嘧啶脱氨基活性。结果构建的五种融合蛋白表达载体,可在HEK293T细胞中表达五种融合蛋白,4种含HBc截短体编码的融合蛋白表达载体比含全长HBc编码的融合蛋白载体的表达能力强;含全长HBc的融合蛋白APOBEC3A-HBc主要定位于细胞质,而含HBc截短体的融合蛋白APOBEC3AHBc144 S、APOBEC3 A-HBc144 E、APOBEC3 A-HBc144 AAA和APOBEC3 A-HBc144 A均主要定位于细胞核中;HBc截短体融合蛋白的胞嘧啶脱氨基活性高于全长HBc融合蛋白。结论成功构建APOBEC3A与不同长度和序列HBc的融合蛋白真核表达载体,APOBEC3A与全长HBc及截短体HBc的融合蛋白在表达能力、细胞内定位以及胞嘧啶脱氨基活性具有明显差异。

稳定表达猪APOBEC3F的PK15细胞单克隆株的建立

目的:利用慢病毒载体建立稳定表达猪载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3F(pAPOBEC3F,简称pA3F)的PK15细胞系。方法:以实验室前期构建的pBPLV-flag-pA3F质粒为模板,PCR扩增pA3F基因,克隆到pLenti-Puro-3Flag载体构建成pLenti-Puro-pA3F-3Flag质粒,Western印迹鉴定其在HEK293T细胞中的表达;将pLenti-Puro-pA3F-3Flag质粒与包装载体共转染HEK293T细胞,包装成Lenti-pA3F慢病毒并测定病毒滴度;将Lenti-pA3F慢病毒感染PK15细胞,通过嘌呤霉素压力筛选并结合有限稀释法,筛选稳定表达pA3F的细胞单克隆株,最终Western印迹检测细胞单克隆株中pA3F的表达。结果:菌落PCR和序列测定表明pLenti-Puro-pA3F-3Flag质粒构建正确,Western印迹显示该质粒可在HEK293T细胞中表达pA3F蛋白;包装了Lenti-pA3F慢病毒,滴度为1.32×10~8TU/mL,慢病毒感染PK15细胞后可检测到pA3F蛋白的表达;经Western印迹鉴定,筛选得到的单克隆细胞可稳定表达pA3F蛋白。结论:建立了稳定表达pA3F的PK15细胞单克隆株,为进一步深入研究猪内源性反转录病毒在pA3F作用下的免疫逃逸机制奠定了基础。

HIV/AIDS患者APOBEC3G mRNA水平与CD4T淋巴细胞计数相关研究

目的探讨人体细胞内的载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(apolipoprotein B mRNA editing enzyme-catalytic polypeptide-like 3G,APOBEC3G)与HIV疾病进展的关系及其与CD4 T淋巴细胞计数之间的关系。方法用实时荧光相对定量RT-PCR的方法检测黑龙江省17例HIV-1感染者及7例健康人外周血单核细胞(PBMC)中APOBEC3G mRNA水平,同时检测黑龙江省17例HIV-1感染者及7例健康人CD4 T淋巴细胞计数。结果与未感染HIV组相比,HIV感染组APOBEC3G mRNA水平略降低,两组无显著性差异(P>0.05),3组APOBEC3G mRNA水平为:HIV未感染组>无症状感染组>AIDS患者组,但各组总体均数差异不显著(P>0.05)。HIV/AIDS患者CD4计数与APOBEC3G mRNA水平正相关(r=0.523,P=0.038)。结论 APOBEC3G在HIV-1疾病进展中可能发挥一定的作用。

APOBEC3G基因多态性与慢性乙型肝炎易感性的关系

目的探讨载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3G(APOBEC3G)基因rs185983011位点在人群中的多态性分布,并研究其与慢性乙型肝炎易感性的关系。方法分别收集186例HBsAg和HBeAg皆阴性的健康者、159例慢性乙型肝炎患者的血液样本。应用Sanger测序方法检测该研究对象APOBEC3G基因rs185983011位点的多态性,确定其基因型及等位基因分布情况。并将该位点的多态性与慢性乙型肝炎的易感性之间的关系进行统计学分析。结果 SNP rs1 8598301 1位点存在于检测人群中的基因型只有C/C和C/T,其中以C/C为主(97.7%)。SNP rs185983011位点的基因型频率和等位基因频率在慢性乙型肝炎患者组和健康者组中的分布无统计学差异(P>0.05)。结论研究人群APOBEC3G基因中rs185983011位点的基因型主要是C/C,未发现该位点的多态性与慢性乙型肝炎易感性存在相关性。

APOBEC3G在宫颈癌发生发展中的表达及意义

目的探讨载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(apolipoprotain B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide 3 protein,APOBEC3G)在维吾尔族女性患者宫颈癌(uterine cervical carcinoma,UCC)发生发展的各个阶段中的表达及意义。方法选择2015年1月—2017年12月在新疆维吾尔自治区人民医院妇科门诊和病区进行宫颈液基薄层细胞学检查和HC-Ⅱ高危型HPV检测联合筛查,并同时进行阴道镜活检和组织病理学诊断的维吾尔族女性患者190例,其中高危型人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)阴性慢性宫颈炎41例、高危型HPV阳性慢性宫颈炎40例、UCC前病变(宫颈上皮内瘤变I^III级)41例、UCC 68例。提取宫颈组织中的RNA和蛋白质,并采用Real-Time PCR检测APOBEC3G mRNA转录水平,采用Western blot检测APOBEC3G蛋白表达水平。结果APOBEC3GmRNA在HPV阴性宫颈炎、HPV阳性宫颈炎、UCC前病变、UCC各组表达水平差异均有统计学意义(F=11.00,P=0.000 1);组间两两比较,UCC组表达量是HPV阴性宫颈炎组的1.70倍,HPV阳性宫颈炎组的1.33倍,差异均有统计学意义(P<0.05);UCC前病变组表达量是HPV阴性宫颈炎组的3.00倍,HPV阳性性宫颈炎组的1.65倍,差异均有统计学意义(P<0.05);APOBEC3G在HPV阴性宫颈炎、HPV阳性宫颈炎、UCC前病变、UCC各组蛋白表达水平差异均有统计学意义(F=213.15,P=0.000 1);组间两两比较,HPV阴性宫颈炎、HPV阳性宫颈炎、UCC前病变、UCC组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 APOBEC3G在维吾尔族女性患者UCC发生发展各个阶段均有不同程度的表达,提示APOBEC3G在其UCC发展进程中发挥一定作用。

干扰素-α诱导HepG2 2.2.15细胞APOBEC3G的表达及其机制

目的探讨干扰素（IFN）-α刺激HepG2 2．2．15细胞后，对载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽样3G（apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide-like 3G，APOBEC3G）表达的影响，以及初步探讨Janus激酶-信号传导和转录激活子OAK—STAT）信号通道是否参与APOBEC3G基因转录调控。方法对HepG2 2．2．15细胞给予不同剂量（0、1、10^1、10^2、10^3、10^4 U／mL）IFN-α刺激8h时，以及10^3 U／mL IFN-α刺激2、4、6、8、10、12h时，收集细胞或培养上清液。应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及Western blot检测HepG22．2．15细胞APOBEC3G、STAT-1 mRNA及蛋白的表达水平。应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养上清液中乙型肝炎表面抗原与e抗原（HBsAg与HBeAg）水平，应用实时荧光定量PCR及RT-PCR分别检测上清液中HBVDNA水平以及细胞中HBVmRNA水平。结果无IFN-α（0 U／mL）刺激时，HepGa2．2．15细胞APOBEC3G表达水平很低。随着IFN-a浓度的升高，APOBEC3GmRNA及蛋白水平逐步升高，IFN-α浓度为10^4 U／mL时，APOBEC3G表达量最高，并且STAT-1分子mRNA及蛋白的表达量亦逐步升高，与APOBEC3G表达量呈现平行相关。随着IFN-a刺激时间的延长，APOBEC3G表达量明显升高，8h时达到最高，其后逐渐下降。10^4 U／mL IFN-α刺激8h时，HepG2 2．2．15细胞培养上清液中HBsAg、HBeAg、HBVDNA及细胞中HBVmR-NA水平均明显低于无IFN-α刺激的HepG22．2．15细胞。结论WN-a能诱导HepG22．2．15细胞表达APO—BEC3G，在一定范围内，APOBEC3G的表达与IFN—d的剂量、作用时间呈正相关；IFN-α诱导APOBEC3G的表达可能是其发挥抗病毒作用的机制之一；IFN-α是否经JAK-STAT信号通道刺激APOBEC3G的表达，二者之间的关系及其机制尚待进一步研究。

天然免疫抗病毒分子APOBEC3s在宫颈癌组织中的表达及意义

目的:探讨载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3s(apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide 3 protein,APOBEC3s)各个蛋白在维吾尔族宫颈癌和宫颈炎组织中的表达及意义。方法:选择2015年1月至2017年12月在新疆维吾尔自治区人民医院妇科门诊和病区行宫颈液基薄层细胞学检查和HC-Ⅱ高危型HPV检测联合筛查并同时行阴道镜活检和组织病理学诊断的维吾尔族妇女148例,其中高危型HPV阴性慢性宫颈炎80例,宫颈癌68例,提取宫颈组织中的RNA和蛋白质,并采用Real-Time PCR检测APOBEC3s各个蛋白mRNA转录水平,采用Western blot检测APOBEC3s各个蛋白表达水平。结果:APOBEC3C、APOBEC3F、APOBEC3G mRNA在宫颈癌组和宫颈炎组表达水平进行比较,差异有统计学意义(P=0.006,0.001,0.003);APOBEC3A、APOBEC3B、APOBEC3DE、APOBEC3H mRNA在宫颈癌组和宫颈炎组表达水平比较,差异无统计学意义(P=0.612,0.076,0.247,0.984);采用Western blot检测APOBEC3C、APOBEC3F、APOBEC3G蛋白表达水平在宫颈癌组和宫颈炎组进行比较,差异有统计学意义(P=0.001,0.001,0.001);Western blot检测APOBEC3A、APOBEC3B、APOBEC3DE、APOBEC3H蛋白表达水平在宫颈癌组和宫颈炎组进行比较,差异无统计学意义(P=0.612,0.076,0.247,0.984)。结论:APOBEC3C、APOBEC3F和APOBEC3G与维吾尔族宫颈癌发生具有相关性。

表达A3C的HBV载体质粒抑制HBV的研究

目的观察表达人类载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3C(A3C)的复制缺损型HBV载体质粒抑制乙型肝炎病毒(HBV)的作用。方法利用PCR技术和基因重组方法构建表达A3C和人绿色荧光蛋白(hrGFP)的HBV载体质粒pCH-LJ3-A3C、pCH-LJ3-hrGFP,分别与野生型HBV质粒pCH-3093共转染HepG2细胞,提取细胞裂解液及细胞培养上清液中病毒颗粒DNA进行Southern blot检测;提取细胞裂解液中核心蛋白相关的HBV DNA,PCR扩增,克隆,测序。结果pCH-LJ3-A3C对细胞浆及细胞培养上清液中病毒颗粒DNA具有抑制作用,使细胞浆内HBV DNA减少31%,使上清液中子代病毒颗粒HBV DNA减少40%;对HBV DNA具有编辑作用,50个克隆测定HBV DNA序列,36克隆出现G-A突变,G-A突变总数量982位点。结论pCH-LJ3-A3C可以抑制HBV复制,pCH-LJ3-A3C对HBV DNA的编辑作用是其发挥作用的主要原因,pCH-LJ3-A3C可以作为一种新型的抗病毒制剂治疗HBV感染。

病毒感染因子在APOBEC3G抗病毒中的拮抗作用

病毒感染因子(virion infectivity factor,Vif)是人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)的6个辅助蛋白之一,是病毒进行有效复制所必需的。由于Vif功能的复杂性以及对相应复合物体系的不了解,一直以来,对Vif的研究进展缓慢。直到2002年发现载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide-like3G,APOBEC3G)是存在于细胞内的一种天然抗病毒因子后,Vif的功能才被逐步阐明。APOBEC3G主要通过嘧啶脱氨基活性使HIV-1的负链DNA在逆转录过程中发生致死性超突变,从而起到抗病毒作用。HIV-1基因编码Vif来拮抗APOBEC3G,二者在宿主细胞内达到动态平衡。Vif通过介导APOBEC3G降解、减少在胞内的表达、阻碍其向病毒粒子的包装以及促使其装配成无活性的高分子质量复合体等多种途径起到中和作用。对Vif/APOBEC3G相互作用及其调节机制的进一步研究,将为新型抗HIV-1病毒药物的研制与开发提供理论依据。