载脂蛋白CⅡ、载脂蛋白CⅢ含量和脂蛋白脂肪酶、肝脂肪酶活性在大鼠脂肪肝模型中的变化

目的观察载脂蛋白CⅡ、载脂蛋白CⅢ和脂蛋白脂肪酶、肝脂肪酶在大鼠脂肪肝模型中的变化,探讨大鼠脂肪肝发病机理。方法高脂肪、高胆固醇饮食饲养法造脂肪肝胰岛素抵抗大鼠模型;检测马来酸罗格列酮干预前后载脂蛋白CⅡ、载脂蛋白CⅢ含量和脂蛋白脂肪酶、肝脂肪酶活性的变化;用双抗体夹心ELISA法检测脂肪肝大鼠血浆载脂蛋白CⅡ、载脂蛋白CⅢ含量,用酶法检测脂肪肝大鼠脂蛋白脂肪酶、肝脂肪酶活性。结果脂肪肝大鼠的血浆载脂蛋白CⅡ含量较正常大鼠降低,载脂蛋白CⅢ含量较正常大鼠升高,脂蛋白脂肪酶、肝脂肪酶活性较正常大鼠降低;经马来酸罗格列酮干预治疗后,脂肪肝大鼠的血浆载脂蛋白CⅡ含量升高,载脂蛋白CⅢ含量降低,脂蛋白脂肪酶、肝脂肪酶活性均升高。结论胰岛素抵抗使载脂蛋白CⅡ含量减少、载脂蛋白CⅢ增多,致脂蛋白脂肪酶、肝脂肪酶活性降低,而胰岛素增敏剂可以通过改变载脂蛋白CⅡ、载脂蛋白CⅢ含量来提高脂蛋白脂肪酶,肝脂肪酶活性。

载脂蛋白CⅡ、CⅢ在脑梗死患者血清中的动态变化及临床意义

目的观察脑梗死患者血清中载脂蛋白CⅡ(ApoCⅡ)、载脂蛋白CⅢ(ApoCⅢ)的动态变化,探讨其与脑梗死病情严重程度的关系。方法选取2007年1—3月住院的62例脑梗死为观察组,选择同期健康体检者30例作为对照组,观察组于发病第1、7、14天测定血清中ApoCⅡ、ApoCⅢ含量并与对照组比较,分析其与美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分的相关性。结果发病第1、7、14天观察组ApoCⅡ、ApoCⅢ含量均显著高于对照组,且发病1 d血清ApoCⅡ、ApoCⅢ含量最高,随着病情的恢复呈逐渐降低的趋势(P<0.05),发病14 d NIHSS评分均低于发病1、7 d(P<0.05)。血清ApoCⅡ、ApoCⅢ与NIHSS评分呈显著正相关(r=0.827,P<0.001;r=0.914,P<0.001)。结论 ApoCⅡ、ApoCⅢ水平变化对于观察病情演变、判断预后有重要意义。

载脂蛋白CⅡ微卫星DNA检测的方法学建立

目的 建立准确检测载脂蛋白CⅡ (apoCⅡ )微卫星DNA(TG)n(AG)m的方法。方法 采用套式聚合酶链反应扩增样品DNA ,将扩增产物上样于变性聚丙烯酰胺凝胶 ,高压电泳 ,凝胶银染后按等位基因梯阶标准判定样品基因型 ;对等位基因(TG) 2 0 (AG) 8进行测序。结果 (TG)n(AG)m位点 ,共检出 12个等位基因 ( 17、18、2 6～ 3 5 ) ,3 6个基因型。 (AG)m位点 ,共检出4个等位基因 ( 6～ 9) ,7个基因型。DNA测序确证该等位基因为 (TG) 2 0 (AG) 8。结论 该法准确、快速、简便 ,适用于科研及大规模人群检查。

血清载脂蛋白CⅡ含量对HDL亚类分布的影响

目的:探讨血清载脂蛋白CⅡ含量对HDL亚类分布的影响。方法:采用双向电泳-免疫印迹方法检测247例受试者血清HDL亚类组成及含量。结果:随血清apoCⅡ水平的逐渐升高,年龄、BMI、TG、TC、apoB100、apoCⅡ、apoCⅢ、apoE、preβ1-HDL、preβ2-HDL、HDL3b和HDL3a含量显著增加,HDL-C、HDL2a、HDL2b含量显著减少。随apoCⅡ和apoAⅠ水平的逐渐升高,preβ1-HDL的含量均呈增加趋势,但HDL2b的含量在同一apoCⅡ组随apoAⅠ水平的升高呈增加趋势,而在同一apoAⅠ组随apoCⅡ水平的增加呈减少趋势。随apoCⅡ/apoCⅢ比值的逐渐升高,preβ1-HDL的含量呈增加趋势,而HDL2b的含量呈减少趋势。相关分析发现,控制血清TG和TC浓度后,apoCⅡ与preβ1-HDL呈显著正相关(r=0.186,P<0.01),与HDL2b呈显著负相关(r=-0.149,P<0.05);apoAⅠ含量与所有HDL亚类呈显著正相关(r值在0.349-0.587之间,P<0.01);此外,apoCⅢ与preβ1-HDL和preβ2-HDL呈显著正相关(r分别为0.184和0.178,P<0.01);apoB100与HDL2a呈显著负相关(r=-0.102,P<0.05);apoE与HDL3a呈显著正相关(r=0.040,P<0.05)。结论:随血清apoCⅡ水平的逐渐升高,HDL亚类的颗粒呈减小趋势,提示HDL成熟代谢受阻;apoAⅠ的含量可以对抗apoCⅡ对HDL亚类分布的影响;apoCⅡ/apoCⅢ的比值亦可作为反映HDL亚类分布的指标之一。

载脂蛋白CⅡ在急性脑梗死患者血清中的动态变化及意义

目的探讨载脂蛋白CⅡ(ApoCⅡ)在急性脑梗死患者血清中的动态变化及意义。方法选取62例急性脑梗死患者为脑梗死组,同期健康体检者30例作为对照组,采用免疫透射比浊法测定对照组血清中ApoCⅡ含量以及脑梗死组患者发病第1、7、14天血清中ApoCⅡ含量的变化,并在每个时间点对脑梗死组患者进行NIHSS评分。结果每个时间点脑梗死组ApoCⅡ含量均显著高于对照组(P<0.05)。脑梗死组发病初期血清ApoCⅡ含量最高,随着病情的恢复,脑梗死组血清ApoCⅡ含量呈逐渐降低的趋势。脑梗死组ApoCⅡ水平与NIHSS评分呈显著正相关(r=0.83,P<0.00)。结论 ApoCⅡ水平异常与急性脑梗死发生密切相关,并与急性脑梗死病情严重程度存在着明显的相关性,监测其水平变化对于脑梗死的预防、病情改善有重要意义。

人载脂蛋白CⅡ成熟肽编码基因的克隆

目的:克隆人载脂蛋白CⅡ(ApoCⅡ)成熟肽编码基因。方法:以人基因组DNA为模板,利用聚合酶链反应(PCR)分别扩增ApoCⅡ成熟肽的编码基因外显子3和外显子4,继而采用外显子拼接法,以两种扩增产物为模板再次进行PCR,得到246bp的人ApoCⅡ基因编码片段。将ApoCⅡ基因编码片段重组入载体pUC18,并进行序列测定。结果:PCR扩增得到ApoCⅡ基因编码片段,经测序证实重组入载体pUC18中的ApoCⅡ编码片段的序列与Genbank中所检索到的编码序列完全一致。结论:利用外显子拼接法完成人ApoCⅡ成熟肽基因编码片段的克隆,为基因工程研制有生物活性蛋白提供了可行的技术手段。

恶性高脂血症载脂蛋白CⅡ的基因分析

为了从分子水平上揭示婴儿恶性高脂血症的发病机制 ,从一例婴儿恶性高脂血症 (患儿已死亡 )患儿父母外周血白细胞中提取DNA ,在特异引物引导下 ,采用聚合酶链反应技术扩增载脂蛋白CⅡ调控区及第一、二、三、四外显子基因。扩增产物纯化后 ,应用DNA自动分析法测定了扩增产物全部DNA序列。结果 ,患儿父母载脂蛋白CⅡ第一、二、三、四外显子基因均没有出现突变点 ,但其载脂蛋白CⅡ的调控区第一外显子上游 -1 90位点各自有一条链由正常的T突变为A ,患儿父母均为此突变的杂合子。据此推测 ,这种突变可能影响了载脂蛋白CⅡ的基因表达 ,患儿可能为此载蛋白CⅡ基因突变的纯合子 ,此突变使载脂蛋白CⅡ合成减少 ,浓度降低 ,不能有效地激活脂蛋白脂酶进行脂解 。

2型糖尿病肾病患者血清载脂蛋白CⅡ、CⅢ与微量白蛋白尿的关系

目的分析2型糖尿病肾病(DN)患者血清载脂蛋白(apoC)CⅡ、CⅢ含量变化,探讨其与DN的关系。方法将150例2型糖尿病(T2DM)患者分为单纯糖尿病(DM)组,早期DN组和临床DN组,每组各50例。检测各组患者血清空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、极低密度脂蛋白(VLDL)、apoCⅡ和apoCⅢ含量。结果与正常对照组比较,所有T2DM患者血清FBG、TG、VLDL、apoCⅡ、apoCⅢ水平明显升高(P<0.05),HDL水平明显下降(P<0.01),所有T2DN患者血清TC、LDL水平也明显升高(P<0.05);与单纯T2DM患者比较,2型DN患者血清FBG、TG、TC、LDL、VLDL水平有升高趋势,但无明显差异(P>0.05),而apoCⅡ、apoCⅢ水平明显升高(P<0.01),随着肾病进展,其水平有上升趋势(P>0.05)。血清apoCⅡ和apoCⅢ与TG、VLDL及微量白蛋白(MAU)水平呈正相关(P<0.05),与HDL水平呈负相关(P<0.05)。apoCⅡ(β=0.15,P<0.05)和apoCⅢ(β=0.17,P<0.05)共同决定MAU。结论载脂蛋白CⅡ、CⅢ含量异常是T2DM患者代谢紊乱的特征,同时可能是预测DN的重要指标。

树载脂蛋白CⅡ的cDNA和蛋白质结构分析

以从树肝脏mRNA反转录获得的cDNA一链为模板 ,应用SMART RACE技术 ,获得了树apoCⅡ的cDNA序列 ,并推导出其蛋白质氨基酸序列 ,应用分子生物学软件对该蛋白的一级、二级结构进行分析和比较。结果显示 ,树apoCⅡcDNA序列 (在GenBank中的注册号为AF335 5 85 )长 483bp ,其中开放阅读框架 30 6bp ,编码 10 1个氨基酸的前原蛋白 ,其蛋白原由 79个氨基酸组成。树apoCⅡ的氨基酸顺序与人、猴、狗的同源性分别为 86 %、87%和 81%。与人及其它种属动物的相同序列比较显示 ,树apoCⅡ分子C 端激活LPL功能区比N 端脂质结合区更具保守性。

载脂蛋白CⅡ缺乏症的基因突变

迄今进行基因测序的载脂蛋白ＣⅡ缺乏症共有１１个家系，有４个家系为意大利裔，其中３个住西西里岛，而又有２个家庭住在同一个小村庄。突变多发生在第３和第４外显子，在１１个家系中有６个突变发生在第３外显子，对突变类型分析发现无义突变有５例，移码突变有３例，起动信号，剪接供体位点和误义突变各有一例。

载脂蛋白CⅡ研究进展

载脂蛋白 C (Apo C )是脂蛋白脂酶 (L PL)的辅助因子 ,在脂类代谢中具有重要的生物学功能。Apo C 过度表达或缺失均可导致高脂血症。本文就 Apo C 的分子结构、生物学功能。

通过定点诱变构建带有突变的载脂蛋白CⅡ启动子的表达载体

目的 :为研究载脂蛋白CⅡ启动子 -190处的碱基突变对其转录活性的影响 ,构建带有突变的载脂蛋白CⅡ启动子的表达载体。 方法 :以插入有正常ApoCⅡ启动子的质粒 pGL3 为模板 ,设计一对带有预期突变的完全互补的引物 ,利用Stratagene的定点诱变试剂盒对ApoCⅡ启动子 -190处的碱基进行突变 ,扩增出带有缺刻的突变质粒 ,转化入XL_Blue超感受态细胞中修复缺刻。 结果 :成功地把ApoCⅡ启动子 -190处的碱基由T突变为A ,构建了带有突变的ApoCⅡ启动子的表达载体。 结论 :用一种快速、高效的定点诱变方法 ,获得了带有预期突变的环状质粒 ,为进一步检测突变的载脂蛋白CⅡ启动子的活性奠定了基础。

载脂蛋白AⅡ基因-265T/C多态性与冠心病患者脂类代谢及冠脉狭窄程度相关性研究

目的:探究载脂蛋白AⅡ基因-265T/C(ApoAⅡ-265T/C)多态性与冠心病(CHD)患者脂类代谢及冠脉狭窄程度相关性。方法:选择96例CHD患者为研究组。另取同期健康体检者100例作为对照组。分别采集研究组入院后翌日清晨空腹静脉血以及对照组入院当天空腹静脉血。通过聚合酶链反应结合限制片段长度多态性(PCR-RFLP)实现对所有受试者ApoAⅡ-265T/C基因多态性的检测。并通过全自动生化分析仪以及相关试剂盒完成血清脂代谢指标水平的检测。此外,对CHD患者开展冠脉造影,将所有CHD患者根据Gensini评分的差异分为轻度狭窄组(≤20分)、中度狭窄组(>20分且≤45分)及重度狭窄组(>45分)。比较研究组和对照组ApoAⅡ-265T/C基因多态性、血清脂代谢指标水平。分析不同冠脉狭窄程度CHD患者ApoAⅡ-265T/C基因多态性、血清脂代谢指标水平。并通过多因素Logistic回归分析明确CHD患者冠脉中/重度狭窄的影响因素。结果:CHD组血清ApoAⅠ及ApoB水平均低于对照组(均P<0.05),ApoAⅡ-265T/C多态性CC+CT基因型频率、C等位基因型频率高于对照组,差异有统计学意义(均P<0.05)。中/重度狭窄组患者的CC+CT基因型频率、C等位基因频率均高于轻度狭窄组,差异有统计学意义(均P<0.05)。中/重度狭窄组血清ApoAⅠ及ApoB水平均低于轻度狭窄组,差异有统计学意义(均P<0.05)。经多因素Logistic回归分析发现,CC+CT基因型频率以及C等位基因型均是CHD患者冠脉中/重度狭窄的危险因素(均P<0.05)。结论:CHD患者存在ApoAⅡ-265T/C基因CC+CT基因型频率、C等位基因型异常,且和CHD患者中/重度狭窄密切相关。

人载脂蛋白C Ⅱ原核表达载体构建及蛋白表达方法

目的构建人载脂蛋白CⅡ(ApoCⅡ)的原核表达载体,表达融合蛋白GST-hApoCⅡ。方法采用限制性内切酶BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切pUC18/hApoCⅡ获得ApoCⅡ成熟肽基因片段,并与相同酶切处理的表达载体pGEX-3X连接构建重组质粒。重组质粒经酶切鉴定、测序验证后转化感受态E.coli DH5α,IPTG诱导表达,优化表达条件,表达产物经SDS-PAGE电泳分析鉴定。选取最佳条件诱导表达,亲和层系法纯化融合蛋白,采用Western blot鉴定。结果重组质粒经酶切和测序后证实目的基因已连接入表达载体,SDS-PAGE检测到35 kD的目的蛋白条带,优化和纯化后经Western blot证实蛋白质产物为融合蛋白GST-hApoCⅡ。结论本方法成功表达融合蛋白GST-hApoCⅡ,此为ApoCⅡ结构及其作用机理研究及制备ApoCⅡ抗体等提供了便利条件。

人血清载脂蛋白C_Ⅱ酶联免疫测定法研究

本文叙述了测定人血清载脂蛋白(apo)C_(II)含量的酶联免疫竞争法。用辣根过氧化物酶标记apo CⅡ单克隆抗体(McAb)。聚苯乙烯反应板预先用0.01％鞣酸处理,然后以apoCs进行包被。本法与apoA_I、A_(II)、B、C_I、C_(III)、和E没有交叉反应,批内变异系数CV=4.8%,批间变异系数CV=10.1％,回收率为101.1％,检测下限为12.5ng/ml。

载脂蛋白C_Ⅱ单克隆抗体研制及酶联免疫测定法研究

本文主要采用载脂蛋白(apo)C_(?)免疫Balb/C小鼠,采用鼠与鼠杂交瘤技术制备出了两株抗人血清apoC_(?)单克隆抗体(McAb),建立了ELISA双抗体夹心法,并对其中实验条件进行了选择。

恶性高脂血症载脂蛋白C的等电聚焦分析

为了揭示婴儿恶性高脂血症的发病机制,利用分析性等电聚焦技术对一例婴儿恶性高脂血症患儿父母极低密度脂蛋白载脂蛋白进行分析,并对聚焦条带进行等电点测定及光密度扫描。结果:患儿父母载脂蛋白(apo)CⅡ(父0.008g/L,母0.026g/L)、apoCⅢ(父0.04g/L,母0.06g/L)的含量均比正常人少,且患儿父母apoCⅢ1缺失。所测到的apoCⅡ、apoCⅢ0、apoCⅢ2等电点分别为4.79、4.93、4.54,未发现等电点异常的条带。推测其父母是apoCⅡ缺乏征杂合子,患儿为apoCⅡ缺乏征纯合子。结果提示患儿父母apoCⅢ总量的减少乃至apoCⅢ1缺乏是对apoCⅡ含量下降的补偿,apoCⅡ浓度及/或apoCⅡ/apoCⅢ比值可能是有效激活脂蛋白脂酶(LPL)的关键。