小鼠肝细胞膜载脂蛋白CⅢ受体特性的进一步研究

目的 研究小鼠肝细胞膜载脂蛋白 (apo) C 受体与 apo C 、C 、C 及 E的结合特性。方法 用受体的放射性配基结合分析法 (RBA )观察血浆脂蛋白 (VL DL、L DL及 HDL )以及纯化的 apo C 、C 、C 及 E与小鼠肝细胞膜 apo C 受体结合的活性。结果 apo C 受体与 1 2 5I- apo C 的结合能被非标记 apo C 、C 、C 、E及 VL DL抑制 ,其中 apo C 、C 、C 及 VL DL抑制曲线相似 ,以 apo C 的抑制作用最强 ,apo C 次之 ,apo C 最弱 ,apo E与 apo C 受体亦有一定结合 ;而含 apo B10 0的 L DL以及含 apo A 及 apo A 的 HDL和人血清白蛋白则对结合无影响。结论 小鼠肝细胞膜上存在 apo C 受体 ,除能特异结合 apo C 及 VL DL外 ,亦能在一定程度上与apo C 、C 及 E结合。

胰岛素及胰高血糖素对HepG2细胞载脂蛋白CⅢ受体功能的影响

为寻求一种可替代人肝细胞研究载脂蛋白 (apolipoprotein ,apo)CⅢ受体的生理模型 ,并探讨apoCⅢ受体的生理功能及其在内源性高甘油三酯血症发病机制中的作用 ,首先以12 5I标记的人apoCⅢ为配体 ,利用放射性配体结合分析法观察了人肝癌细胞系HepG2细胞是否有apoCⅢ受体存在 .结果证实HepG2细胞上存在高亲和力的、可饱和的、特异的apoCⅢ受体结合位点 ,其受体的亲和力 (Kd)和apoCⅢ受体结合容量 (Bmax)分别为(9 5 3± 1 0 3)× 10 -9mol/L和 (3 2 8± 0 31) μg/ g .随后又分别研究了胰岛素及胰高血糖素对HepG2细胞apoCⅢ受体功能的影响 ,结果表明 :胰岛素可使HepG2细胞apoCⅢ受体结合容量 (Bmax)显著增加 ,但对受体的亲和力 (Kd)无影响 ;胰高血糖素可使HepG2细胞apoCⅢ受体亲和力显著下降 (即Kd 值升高 ) ,对受体的结合容量无影响 .

负荷内源性高甘油三酯血症患者血清极低密度和低密度脂蛋白对HepG2细胞载脂蛋白CⅢ受体功能的影响

目的 探讨载脂蛋白CⅢ受体在内源性高甘油三酯血症发病机制中的作用。材料与方法 人肝癌细胞系HepG2 (本室保种 ) ;RPMI 16 40培养基 (GIBCO) ;L 谷氨酰胺 (EMK进口分装 ) ;新生小牛血清 (成都华西生化制品厂 ) ;青霉素G钠、硫酸链霉素 (华北制药厂 ) ;胰蛋白酶 (1∶2 5 0 ,Difco进口分装 ) ;Na12 5I(Amersham) ;纯化人载脂蛋白CⅢ ,由本室傅强博士制备 ;低温乙醇法制备人血浆白蛋白组份FⅡ+FⅢ (由成都蜀阳制药厂提供 ) ;甘油三酯试剂盒和胆固醇试剂盒均购自北京中生公司 ;人血清白蛋白(Takara) ;血浆密度标准缓冲液 (PDB ,含 0 .9%NaCl,0 .0 1%NaN3 ,10mmol LTris HCl及 1mmol LEDTA ,pH 7.4 ) ;其它试剂均为国产分析纯。人肝癌细胞系HepG2细胞按常规方法培养。取高甘油三酯血症患者 [甘油三酯≥ 5 .93mmol L (35 0mg dL) ,总胆固醇≤ 6 .74mmol L (2 6 0mg dL) ]及血脂正常者 [甘油三酯≤ 1.7mmol L(15 0mg dL) ,总胆固醇≤ 6 .74mmol L (2 6 0mg dL) ]空腹血清各 2 0mL(均为多人的混合血清 ) ,按略加修改的张林华和刘秉文等的一次性密度梯度超速离心法操作。甘油三酯和胆固醇含量用北京中生公司酶法试剂盒测定 ;受体分析以12 5I标记的人载脂蛋白CⅢ为配体 ,利用放射性配体结合分析法 ,分别观察负?