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重组人载脂蛋白C-I在毕赤酵母中的分泌表达及鉴定
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作者 苏曼曼 陈月 +2 位作者 王丁丁 许天敏 颜炜群 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期9-13,共5页
目的:在毕赤酵母中高效分泌表达与天然人载脂蛋白C-I具有相同结构和活性的重组人载脂蛋白C-I(rhApoC-I)。方法:RT-PCR法自人肝组织调取编码人ApoC-I的cDNA,构建真核分泌型表达载体pPICZα/hApoC-I。重组质粒线性化后转化毕赤酵母感受态... 目的:在毕赤酵母中高效分泌表达与天然人载脂蛋白C-I具有相同结构和活性的重组人载脂蛋白C-I(rhApoC-I)。方法:RT-PCR法自人肝组织调取编码人ApoC-I的cDNA,构建真核分泌型表达载体pPICZα/hApoC-I。重组质粒线性化后转化毕赤酵母感受态细胞,甲醇诱导表达,建立rhApoC-I的毕赤酵母表达体系。对rhApoC-I进行Western blot分析和体外活性研究。结果:经PCR法克隆的hApoC-I cDNA序列与GenBank登录序列一致。SDS-PAGE和Western blot分析均在分子量约6.6kDa出现特异性条带,2L发酵条件下表达量达到80mg/L。结论:首次在毕赤酵母菌中高效分泌表达rhApoC-I,并确定其具有抑制血小板衍生生长因子诱导的平滑肌细胞增殖的抑制作用,为进一步研究其结构与功能提供物质基础。 展开更多
关键词 载脂蛋白c-i 分泌表达 毕赤酵母 平滑肌细胞
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肺结核病人血清差异蛋白的分离及鉴定 被引量:2
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作者 李翠萍 胡天桥 +6 位作者 农炳金 臧宁 周怡 胡水秀 郑艳燕 周昌明 何敏 《中国实验诊断学》 2012年第9期1633-1636,共4页
目的分离并鉴定SELDI筛选出的肺结核病人血清差异表达蛋白。方法乙腈沉淀法去除血清中的高丰度蛋白,Tricine-SDS-PAGE电泳分离差异表达的目标蛋白,高效液相色谱串联质谱鉴定目标蛋白并进行生物信息学分析。结果电泳显示肺结核患者血清... 目的分离并鉴定SELDI筛选出的肺结核病人血清差异表达蛋白。方法乙腈沉淀法去除血清中的高丰度蛋白,Tricine-SDS-PAGE电泳分离差异表达的目标蛋白,高效液相色谱串联质谱鉴定目标蛋白并进行生物信息学分析。结果电泳显示肺结核患者血清中小于6000Da的蛋白条带浓度明显低于正常人血清,经质谱鉴定和生物信息学分析,该目标蛋白为载脂蛋白(apo)C-I酶解片段,与SELDI建立的诊断模型中分子量为M4480.14的潜在标志物吻合。结论与血脂代谢密切相关的apo C-I可能是结核病血清潜在标志物之一。 展开更多
关键词 肺结核 LC-MS/MS 差异蛋白 载脂蛋白c-i
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基于SELDI-TOF-MS技术筛选乳腺癌血清蛋白标志物 被引量:6
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作者 孙亚冬 王家祥 崔树德 《中国实验诊断学》 2019年第9期1512-1517,共6页
目的筛选并鉴定乳腺癌患者血清中可能存在的蛋白标志物,建立与乳腺癌早期诊断及三阴性乳腺癌相关的蛋白质指纹图谱模型。方法分别收集60例乳腺癌患者术前及对应术后2周的血清标本,其中包括22例三阴性乳腺癌患者。采用表面增强激光解析... 目的筛选并鉴定乳腺癌患者血清中可能存在的蛋白标志物,建立与乳腺癌早期诊断及三阴性乳腺癌相关的蛋白质指纹图谱模型。方法分别收集60例乳腺癌患者术前及对应术后2周的血清标本,其中包括22例三阴性乳腺癌患者。采用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术筛选出乳腺癌术前组与健康对照组、乳腺癌术前组与术后组、三阴性乳腺癌组与非三阴性乳腺癌组之间血清差异蛋白,然后联合MALDI-TOF-MS、Tricine-SDS-PAGE等技术对筛选出的目标蛋白进行鉴定,最终确定乳腺癌血清特异蛋白标志物。结果乳腺癌术前组与健康对照组共筛选到14个差异蛋白峰值,11个在乳腺癌组呈高表达,3个呈低表达,其中Youden指数最高的模型为低表达蛋白m/z6448。乳腺癌组m/z6448表达水平低于健康对照组(38.0187±34.2194vs 337.5261±507.6438,P<0.01)。乳腺癌术前组与术后组具有差异性的蛋白质峰值6个,其中有4个在乳腺癌术前组呈高表达,有2个低表达。Youden指数最高的模型为m/z6448,其在乳腺癌术后组的表达水平高于术前组(38.0187±34.2194vs 294.1245±102.8634,P<0.01)。三阴性乳腺癌组与非三阴性乳腺癌组筛选出9个差异性的蛋白质峰值,其中有4个在三阴性乳腺癌组低表达,Youden指数最高的模型m/z峰位于6448的蛋白标志物,其在非三阴性乳腺癌中表达水平高于三阴性乳腺癌(5.1351+3.6437vs 43.6162±185.8542,P<0.01)。联合MALDI-TOF-MS、Tricine-SDSPAGE等技术对筛选出的目标蛋白质进行鉴定,最终确定该差异蛋白为载脂蛋白C-I(APO C-I)肽段。结论 m/z峰位于6448的蛋白标志物经鉴定为载脂蛋白C-I肽段,可以作为乳腺癌血清尤其是三阴性乳腺癌的特异性血清蛋白标记物,初步建立了乳腺癌早期诊断及三阴性乳腺癌血清蛋白质指纹图谱模型。该蛋白表达的降低与乳腺癌肿瘤恶性程度的升高相关,可能与乳腺癌较差的预后有关,值得更深入研究。 展开更多
关键词 乳腺癌 蛋白质组学 载脂蛋白c-i(APO c-i)
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THE TREE SHREW APOLIPOPROTEIN C-I cDNA: SEQUENCE AND ITS EXPRESSION
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作者 王克勤 吕新跃 +2 位作者 吴钢 薛红 陈保生 《Chinese Medical Sciences Journal》 CAS CSCD 2001年第4期194-199,共6页
A rabbit anti serum to tree shrew apolipoprotein C I (apo C I) was used to screen an expression cDNA library constructed by us from tree shrew (TS)liver tissue. Two apo C I cDNA clones were obtained. The longer one co... A rabbit anti serum to tree shrew apolipoprotein C I (apo C I) was used to screen an expression cDNA library constructed by us from tree shrew (TS)liver tissue. Two apo C I cDNA clones were obtained. The longer one consistsof 380 nucleotides, including 21 bp and 95 bp at the 5’ and 3’ end of the non translated regions respectively, and a 264 bp fragment in an open reading frame encoding 88 amino acids prepropeptide which contains 26 amino acids of signal peptide and a mature protein (62 amino acids). Comparing the amino acid sequence deduced from this cDNA with those of the published mammalian apo C Is reveals that it shared some structural similarity with rat, mouse and dog apo C I, but it had 5 more amino acids than that of human and baboon. The expression of apo C I mRNA in 8 different tissues were also assayed with Northern blot. The results demonstrated that liver had the highest expression, intestine had much less expression and no expression in other tissues, which is much different from human and other species. This study has laid down a good foundation for further studying on the function and the stucture of tree shrew apo C I gene. 展开更多
关键词 tree shrew apolipoprotein C I EXPRESSION
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心血管危险因子与广西汉族迟发性阿尔茨海默病之间的相关性研究 被引量:10
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作者 郑卫东 郑怀竞 +7 位作者 杨泽 郑陈光 吕泽平 金锋 王沥 史晓红 唐雷 胡才有 《中国神经免疫学和神经病学杂志》 CAS 2004年第2期68-71,90,共5页
目的 研究心血管危险因子载脂蛋白 E( Apo E)、载脂蛋白 C- ( Apo C- )以及低密度脂蛋白受体相关蛋白 ( LRP)与汉族迟发性阿尔茨海默病 ( LOAD)之间的相关性。方法 应用 PCR-RFLP技术或直接通过 PCR方法 ,分析了 1 5 6例正常老年人、7... 目的 研究心血管危险因子载脂蛋白 E( Apo E)、载脂蛋白 C- ( Apo C- )以及低密度脂蛋白受体相关蛋白 ( LRP)与汉族迟发性阿尔茨海默病 ( LOAD)之间的相关性。方法 应用 PCR-RFLP技术或直接通过 PCR方法 ,分析了 1 5 6例正常老年人、79例 LOAD Apo E、Apo C- 与 LRP基因型。结果 在 LOAD患者组和正常对照组中 ,Apo Eε4等位基因出现的频率分别为 1 7.7%、5 .7% ,其间差异有显著性 ( x2 =1 5 .75 0 ;P=0 .0 0 1 ,OR=3 .3 96,95 % CI =1 .80 8~ 6.3 79) ;Apo Eε3等位基因频率分别为 76.0 %、84% ,前者低于后者 ( x2 =4.43 9;P=0 .0 3 5 ,OR=1 .65 9,95 % CI =1 .0 3 3~ 2 .665 ) ;LRP、Apo C- 基因的基因型频率和等位基因频率在 LOAD与对照组之间差异无显著性 ( P >0 .0 5 )。结论  Apo Eε4等位基因是 LOAD的遗传危险因子 ,Apo Eε3等位基因则可能有保护效应 ;此研究未能证明 Apo C- 基因变异和 LRP基因 C766T多态性与 展开更多
关键词 心血管危险因子 载脂蛋白E APOE 广西 汉族 阿尔茨海默病 载脂蛋白c-i Apoc-i 老年人
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非小细胞肺癌血清蛋白质标志物的检测及鉴定 被引量:7
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作者 杨洋 樊玉霞 +2 位作者 刘东雷 吴恺 赵松 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1577-1579,共3页
目的运用蛋白组学技术检测非小细胞肺癌(NSCLC)特异性的血清蛋白标志物,并验证联合应用标志物对非小细胞肺癌的检出效能。方法运用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI—TOF-MS)等蛋白组学技术对112例非小细胞肺癌患者和123例... 目的运用蛋白组学技术检测非小细胞肺癌(NSCLC)特异性的血清蛋白标志物,并验证联合应用标志物对非小细胞肺癌的检出效能。方法运用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI—TOF-MS)等蛋白组学技术对112例非小细胞肺癌患者和123例对照者血清的蛋白质谱进行分析检测,并对差异性峰值进行鉴定,随后运用蛋白质抗体芯片对检测出的特异性蛋白质标志物进行验证,并衡量标志物的联合检出效能。结果质荷比峰值为6628、9191、11412的3个蛋白质构建了具有高区别能力的非小细胞肺癌判别模型。质荷比为6628的蛋白鉴定为载脂蛋白C-I,在非小细胞肺癌血清中下调;质荷比为9191和11412的蛋白分别鉴定为触珠蛋白α-1链和S100A4蛋白,在非小细胞肺癌血清中上调。三者的联合应用在盲法检测组中的敏感性和特异性分别为96.56%和94.79%。结论载脂蛋白C-I、触珠蛋白α1链和-S100A4蛋白作为非小细胞肺癌特异性的血清蛋白质标志物,可以用于非小细胞肺癌的早期诊断。 展开更多
关键词 载脂蛋白c-i 触珠蛋白α-1链 S100A4蛋白 非小细胞肺癌 蛋白组学
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