载脂蛋白E敲除(ApoE^(-/-))小鼠整装(whole-mount)主动脉免疫荧光组织化学染色的血管外膜淋巴管成像

目的 探索载脂蛋白E敲除(ApoE^(-/-))小鼠整装(whole-mount)主动脉免疫荧光组织化学染色法显示血管外膜淋巴管的可行性。方法 制备ApoE^(-/-)小鼠整装主动脉,进行淋巴管内皮受体1(LYVE1)、 α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫荧光组织化学染色,染色后组织经5 g/L苏丹黑B处理30 min、组织透明液透明,移至自制的样本容器中,荧光显微镜下成像。结果经5 g/L苏丹黑B处理的整装主动脉可见血管自发荧光显著降低,外膜淋巴管的特异性荧光强度显著增强,更易观察且不会对其他通道荧光产生干扰。结论 建立的ApoE^(-/-)小鼠整装主动脉免疫荧光组织化学染色显示血管外膜淋巴管的方法操作简便,特异性好。

辛伐他汀减轻载脂蛋白E^(-/-)小鼠氧化应激及小窝蛋白1的表达

背景氧化应激损伤内皮是动脉粥样硬化的始动因素,他汀对于动脉粥样硬化的干预主要集中在粥样硬化斑块形成之后,而对于粥样硬化斑块形成之前的研究较少。目的观察辛伐他汀对载脂蛋白(apo)E^(-/-)小鼠氧化应激及主动脉内皮小窝蛋白l的影响,探讨辛伐他汀在动脉粥样硬化一级预防中保护内皮功能的机制。方法24只6周龄雄性 apoE^(-/-)小鼠,随机等分为两组:对照组、辛伐他汀[5 mg/(kg·d)]治疗组,4周后处死动物。常规生物化学法测定血总胆固醇(TC)、超氧化物歧化酶活性(SOD)、丙二醛(MDA)和血清一氧化氮(N0)含量。采用苏木素伊红(HE)染色法观察小鼠主动脉内皮组织,免疫组织化学法分析小鼠主动脉内皮的小窝蛋白1的表达。结果两组间血脂水平无显著性差异。辛伐他汀治疗组主动脉内皮组织的损伤减轻(损伤阳性率33.3%比对照组:75%,P<0.05)。治疗4周后,辛伐他汀治疗组 SOD[(135.3±5.5)U/L 比对照组:(97.2±7.6)U/L,P<0.01)和 NO[(28.4±4.1)μmol/L 比对照组:(12.3±2.1)μmol/L,P<0.01]均明显升高,MDA 显著减低[(10.5±0.5)nmol/L 比对照组:(17.3±1.0)nmol/L,P<0.01]。辛伐他汀治疗组主动脉内皮上小窝蛋白1的表达(表达阳性率41.67%比对照组:83.33%,P<0.05)明显降低。结论辛伐他汀在不影响血脂水平情况下,抑制主动脉内皮的小窝蛋白1的表达,减轻 apoE^(-/-)小鼠氧化应激,增加 NO 水平,起到改善内皮功能、抗动脉粥样硬化作用,在动脉粥样硬化的一级预防中可能发挥重要作用。

艾塞那肽对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化模型中VCAM-1、ICAM-1表达的影响

目的探讨胰高血糖素样肽1(GLP-1)受体激动剂艾塞那肽对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型中主动脉病变的影响。方法 ApoE-/-小鼠随机分为普通饮食组(n=14)和高脂饮食组(n=68),喂养12周后随机抽取普通饮食组4只和高脂饮食组8只小鼠检测造模情况。将高脂饮食组小鼠再分为非药物干预组、阿托伐他汀钙片组、艾塞那肽小剂量组、艾塞那肽大剂量组、阿托伐他汀+艾塞那肽小剂量组、阿托伐他汀+艾塞那肽大剂量组(每组10只)。药物干预6周后,各组小鼠眶周静脉丛取血,并取主动脉弓行石蜡切片,HE染色观察。ELISA法检测血清血脂水平,Western blotting检测主动脉血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的蛋白表达水平。结果 HE染色结果显示:普通饮食组及阿托伐他汀+艾塞那肽大剂量组镜下观察未见异常;阿托伐他汀钙片组,艾塞那肽小、大剂量组,阿托伐他汀+艾塞那肽小剂量组可见广泛的病理性内膜增厚;非药物干预组有脂质斑块形成,可见脂核。单独应用艾塞那肽或联合阿托伐他汀可不同程度降低血清血脂(TC、TG、LDL-C)水平(P<0.05)。艾塞那肽不同剂量单独或联合阿托伐他汀可降低主动脉VCAM-1、ICAM-1的表达(P<0.05)。结论艾塞那肽可能通过下调ApoE-/-小鼠主动脉VCAM-1、ICAM-1的表达,抑制ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化病变的形成。

阿托伐他汀对ApoE^(-/-)小鼠载脂蛋白A-Ⅰ和B族1型清道夫受体的影响

目的:观察阿托伐他汀对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)病变形成及载脂蛋白A-I(ApoA-I)和B族1型清道夫受体(SR-B1)表达水平的影响,探讨阿托伐他汀抑制AS病变形成的可能机制。方法:C57BL/6J小鼠10只作为正常对照组常规饲养(A组),ApoE-/-小鼠30只高脂饮食饲养,随机分为ApoE-/-高脂模型组(B组)、阿托伐他汀小剂量组(10mg·kg-1·d-1,C组)和阿托伐他汀大剂量组(20mg·kg-1·d-1,D组)。给予生理盐水或药物干预12周后,测定小鼠血脂水平,HE染色和油红O染色观察各组小鼠胸主动脉粥样斑块的病理改变,采用Western blot法测定肝组织ApoA-I和SR-B1表达水平,实时定量PCR法测定肝组织ApoA-I和SR-B1 mRNA表达水平。结果:与A组相比,B组血清TG、TC、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)明显升高[分别为(2.93±0.18)mmol/L vs(0.59±0.09)mmol/L;(21.78±2.03)mmol/L vs(2.13±0.24)mmol/L;(2.86±0.26)mmol/L vs(0.57±0.10)mmol/L;(18.92±1.87)mmol/L vs(1.54±0.21)mmol/L;P<0.01]。与B组相比,C组和D组TC、LDL-C明显下降[TC B组:(21.78±2.03)mmol/L,C组:(11.79±0.98)mmol/L,D组:(10.07±1.03)mmol/L;LDL-C B组:(18.92±1.87)mmol/L,C组:(8.76±1.15)mmol/L,D组:(7.91±0.77)mmol/L;P<0.01]。胸主动脉粥样斑块面积明显减小[B组:(23.12±3.46)×104μm2,C组:(11.42±1.25)×104μm2,D组:(7.34±1.03)×104μm2,P<0.01];肝组织ApoA-I和SR-B1表达水平明显上调(ApoA-I B组:1.08±0.10,C组:1.36±0.11,D组:1.78±0.14;SRB1B组:0.72±0.07,C组:1.46±0.14,D组:1.50±0.21,P<0.01)。结论:阿托伐他汀可以通过降低ApoE-/-小鼠胆固醇水平,上调ApoAI和SR-B1表达,发挥抗动脉粥样硬化的作用。

选择性环氧化酶-2抑制剂对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化影响的实验研究

目的:观察选择性环氧化酶-2抑制剂对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化进展的影响。方法:8周龄载脂蛋白E基因敲除小鼠分为塞来昔布(celecoxib)组及安慰剂组,均予高脂饮食喂养,分别以特异性环氧化酶-2抑制剂塞来昔布及安慰剂灌胃8周;同龄野生型小鼠为正常对照组。酶法分析测定血脂,油红O染色观察主动脉根部粥样硬化斑块大小。结果:塞来昔布组与安慰剂组之间实验前后血脂水平均无差异,但均高于正常对照组(胆固醇水平P<0.01,甘油三酯水平P<0.05)。油红O染色显示,塞来昔布组及安慰剂组可见明显粥样硬化斑块形成;前者的斑块面积及斑块面积/原管腔面积均较后者显著降低(P均<0.01)。结论:用选择性环氧化酶-2抑制剂塞来昔布进行抗炎干预可抑制动脉粥样硬化的进展,其机制与调脂无关。针对炎症机制有望有效控制动脉粥样硬化的发生发展。

重组腺病毒介导脂联素基因对ApoE^-/-小鼠动脉粥样硬化的作用机制

目的研究腺病毒介导的脂联素(APN)过表达对Apo E-/-小鼠动脉粥样硬化(AS)的抑制作用和对NF-κB信号通路的影响。方法将12周龄雄性Apo E-/-小鼠120只分为空载腺病毒对照组和脂联素干预组,每组60只。在3个不同时间点(0天、4周、8周)处死小鼠收集组织。全自动生化仪检测血脂指标;ELISA法测定血清APN浓度;油红O染色法检测小鼠主动脉血管组织的病理学变化;Masson染色法检测进展性斑块区的胶原含量和纤维帽厚度变化;免疫荧光法测定小鼠主动脉血管APN和NF-κB p65蛋白的表达;免疫印迹法检测主动脉血管APN、NF-κB p65核蛋白和炎症因子的表达。结果 APN过表达抑制了Apo E-/-小鼠动脉粥样硬化斑块形成。与对照组相比,脂联素干预组的动脉粥样硬化病理损伤面积减少(P<0.01),动脉粥样硬化损伤程度降低(P<0.001),总体油红O染色测定血管表面损伤百分比,4周时为(27.78±8.64)vs(33.02±5.18)%;8周时为(31.58±5.87)vs(52.16±5.79)%。脂联素减缓了高脂饮食导致的小鼠血清中TC(P<0.001)、TG(P<0.001)、LDL-C(P<0.001)的浓度增加,使血脂水平趋向正常化。随着血清脂联素浓度增加,可以阻遏NF-κB通路的激活,抑制NF-κB p65核蛋白和炎症因子的表达。结论脂联素通过抑制NF-κB通路激活来减轻AS的炎症反应。

耐力训练对ApoE^-/-小鼠AS形成及病理变化的干预作用研究

目的:采用复制的实验动物AS模型,观察耐力运动对AS形成的预防作用和对已经形成的AS的治疗或干预效果。方法:选取48只8周龄ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠,饲以高脂高胆固醇膳食,实验动物分组为14周AS模型组(H组)、14周跑台运动组(HE组)、26周AS模型组(HH组)、14周造模+12周跑台运动组(H+E组),并选取8周龄C57BL/6J小鼠24只作为对照组,每组12只。令HE组和H+E组小鼠在活动跑台上进行耐力性运动(13 m/min,60 min/次,每周5次)。取主动脉组织制备主动脉根部冰冻切片,油红O染色评估AS斑块面积,HE染色分析主动脉组织病理学变化等。结果:(1)H组小鼠主动脉血管内膜可见大量AS斑块,其面积占血管腔总面积的41.79±6.93%,HE组主动脉斑块面积为25.07±7.04%,显著低于H组(P<0.01),且病变程度较H组明显减轻。(2)与H组相比,HH组小鼠主动脉AS病变进一步加重,斑块面积与血管腔总面积比例达58.80±6.40%,H+E组斑块面积为50.35±3.52%,显著低于HH组(P<0.05),且病变进展程度相对减缓。结论:14周耐力训练能有效地预防ApoE-/-小鼠AS的形成,12周耐力训练对ApoE-/-小鼠已经形成的AS起到了减缓其病变进展的作用。

半枝莲总黄酮对ApoE基因缺陷小鼠动脉粥样硬化及磷脂转运蛋白表达的影响

目的探讨半枝莲总黄酮(TFSB)对高脂饲养Apo E基因缺陷(Apo E-/-)小鼠在动脉粥样硬化(AS)病变形成早期抑制AS的作用及其分子机制。方法 11周龄♂Apo E-/-小鼠40只,随机分为模型组、TFSB低、中、高剂量组、辛伐他汀组,每组8只。取C57BL/6J小鼠8只作为正常对照组。均给予高脂饲养4周后给药,8周后全部处死,HE染色观察主动脉形态学变化,血液流变仪测血浆黏度、全血黏度(低切、高切),温氏法测红细胞比容。全自动生化分析仪检测血清TG、TC、HDL-C、LDL-C表达水平,ELISA法检测血清磷脂转运蛋白(PLTP)及维生素E(VE)的表达水平。Western blot法检测各组小鼠肝脏PLTP蛋白表达水平及法尼酯衍生物X受体(FXR)表达水平。结果模型组造模成功;TFSB各剂量组对模型小鼠主动脉AS形态学有改善作用,可明显降低AS模型小鼠血清TG、TC、LDL-C水平,升高HDL-C水平,与模型组比较,差异均具有显著性(P<0.05或P<0.01);TFSB各剂量组可明显降低AS模型鼠的红细胞比容、血浆黏度及全血黏度(低切、高切),且与模型组相比,差异均有显著性(P<0.01);TFSB各剂量组血清PLTP表达水平较模型组明显减少,差异均有显著性(P<0.01),且PLTP与VE水平呈负相关(r=-0.675,P<0.01);与模型组相比,TFSB中、高剂量组能够明显抑制肝脏PLTP及FXR蛋白表达水平(P<0.01)。结论 TFSB可能通过调节Apo E-/-小鼠FXR水平,从而调节PLTP水平、升高VE水平、调节血脂、改善血液流变学及减少小鼠的AS损伤,进而发挥抗AS的作用。

荷丹片对APOE^(-/-)小鼠血脂、炎症因子及形态学变化的影响

目的研究荷丹片(荷叶,丹参,山楂,番泻叶,补骨脂)对载脂蛋白E基因敲除(APOE-/-)小鼠的血脂、脂联素、肿瘤坏死因子(TNF-α)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)和形态学变化的影响。方法将50只APOE-/-小鼠随机分为对照组、模型组、荷丹片低、高剂量组、辛伐他汀组。对照组普通饲料喂养,其余各组高胆固醇饲料喂养。12周后,取血清测血脂,ELISA法测脂联素、TNF-α、hs-CRP水平;取同部位主动脉HE染色光镜下观察形态学变化。结果与对照组相比,模型组血脂、TNF-α、hs-CRP水平明显升高(P<0.01),脂联素水平明显降低(P<0.01),主动脉形态学病变加重。与模型组相比,荷丹片低、高剂量组、辛伐他汀组的血脂、TNF-α、hs-CRP水平明显降低(P<0.01),脂联素水平明显升高(P<0.05),主动脉形态学病变有所减轻。结论荷丹片可降低APOE-/-小鼠血脂和TNF-α、hs-CRP水平,升高脂联素水平,从而抑制动脉粥样硬化的发生、发展。

耐力训练对ApoE^(-/-)致AS小鼠IL-18和IL-10表达的影响

目的:深入观察耐力训练对载脂蛋白E基因敲除(Apo E^(-/-))致动脉粥样硬化(AS)小鼠白介素18(IL-18)和白介素10(IL-10)的影响,探讨运动防治AS的可能机制。方法:选取8周龄雄性Apo E^(-/-)小鼠20只:随机分为2组(n=10):AS模型组(AC组)和运动干预组(AE组),AE组进行跑台耐力训练;选取8周龄C57BL/6J雄性小鼠10只作为正常对照组(CC组)。实验持续12周,取主动脉制作冰冻切片,分别用于观察主动脉AS斑块和病理变化以及主动脉IL-18、IL-10蛋白表达;采用ELISA法检测血清IL-18、IL-10水平。结果:112周高脂膳食致Apo E^(-/-)小鼠发生典型的AS病变,耐力训练使AS斑块面积显著减少(P<0.01),病变程度显著减轻。2与CC组比较,AC组、AE组小鼠血清IL-18和IL-10水平均显著升高(P<0.01),且AC组IL-18/IL-10比值显著升高(P<0.01)。AE组血清IL-18水平及IL-18/IL-10比值均显著低于AC组(P<0.01)。3与CC组比较,AC组、AE组小鼠主动脉IL-10和IL-18蛋白表达均显著升高(P<0.01),AE组IL-10表达显著高于AC组(P<0.05),IL-18表达显著低于AC组(P<0.05)。结论:耐力训练通过降低血液和主动脉IL-18及提高IL-10水平,增强了主动脉血管抗炎能力,从而发挥抗AS的作用。

荷丹片对APOE^(-/-)小鼠炎症因子及氧化应激因子的影响

目的探讨荷丹片对载脂蛋白E基因敲除(APOE-/-)小鼠炎症因子、氧化应激因子的影响及对动脉粥样硬化(AS)的干预作用及机制。方法将50只APOE-/-小鼠随机均分为对照组、模型组、荷丹片低剂量组、荷丹片高剂量组及辛伐他汀组。对照组给予普通饲料,其余组给予高胆固醇饲料造模。同时用药组灌胃相应剂量药物,对照组和模型组给予等量生理盐水灌胃。造模12周后测定血清白细胞介素(IL)-1、IL-10、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;RT-PCR测主动脉肿瘤坏死因子(TNF)-αm RNA表达。结果模型组较对照组IL-1、MDA、TNF-αm RNA升高,IL-10、SOD降低(P<0.01);荷丹片低剂量组、荷丹片高剂量组、辛伐他汀组较模型组IL-1、MDA、TNF-αm RNA降低,IL-10、SOD升高(P<0.01)。结论荷丹片可通过抗炎、抗氧化应激作用干预AS的发生、发展。

MST1启动子区DNA低甲基化在ApoE^(-/-)小鼠肾损伤中的作用

目的探讨哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)及其DNA甲基化在载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)小鼠肾损伤中的作用及意义。方法实验动物分为2组:(1)Apo E-/-组(n=10):雄性Apo E-/-鼠饲以高蛋氨酸饮食;(2)对照组(n=10):雄性C57BL/6J鼠饲以高蛋氨酸饮食。喂养14周后,全自动生物化学分析仪测定小鼠血清肌酐和尿素氮水平;PAS染色及透射电子显微镜观察小鼠肾脏组织损伤情况;实时定量PCR及Western blot分别检测小鼠肾脏中MST1 mRNA和蛋白表达水平。巢式甲基化特异性PCR(n MS-PCR)检测小鼠肾脏MST1 DNA甲基化水平。结果与对照组比较,Apo E-/-组血清肌酐和尿素氮分别升高了1.1倍和1.6倍(P<0.01);PAS染色和透射电镜结果显示,Apo E-/-组较对照组肾脏明显损伤;Apo E-/-小鼠肾脏MST1表达分别与血清肌酐和尿素氮水平呈正相关(R2=0.7571,P=0.0012;R2=0.7342,P=0.0015);n MS-PCR结果显示,Apo E-/-组肾脏中MST1 DNA甲基化水平较对照组显著降低(P<0.01)。结论 MST1表达上调可能在Apo E-/-小鼠肾损伤中发挥重要作用,而MST1启动子区DNA低甲基化改变可能是MST1表达上调的重要机制。

ApoE^(-/-)小鼠的繁殖与鉴定

目的繁殖和鉴定ApoE^(-/-)小鼠,建立血管损伤模型,为进一步研究动脉粥样硬化奠定基础。方法将引进的小鼠采用1只雌性与1只雄性同笼的方式进行繁殖。从子代小鼠尾巴中提取DNA,用PCR法和琼脂糖凝胶电泳法鉴定小鼠的基因型。获取ApoE^(-/-)纯合子小鼠,并绘制其0~20周龄生长曲线。采用油红O脂类染色法从血管形态学方面观察ApoE^(-/-)小鼠。结果成功繁育出的ApoE^(-/-)纯合小鼠较C57小鼠生长缓慢,且20周龄ApoE^(-/-)小鼠血管有明显损伤。结论利用ApoE^(-/-)纯合子小鼠能够建立良好的血管损伤模型。

黄连温胆汤调控PI3K/Akt/mTOR信号通路干预ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化的作用机制

目的观察黄连温胆汤对载脂蛋白E(ApoE)^(-/-)小鼠动脉粥样硬化的干预效应,从磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物西罗莫司靶蛋白(mTOR)信号通路探讨其机制。方法采用高脂饲料饲养ApoE^(-/-)小鼠4周构建动脉粥样硬化模型。采用全自动生化分析仪检测小鼠血脂水平;采用苏木精-伊红(HE)染色、油红O染色、Masson染色观察主动脉斑块情况;采用免疫组化法检测小鼠主动脉根部PI3K、Akt、mTOR蛋白表达水平。结果与模型组比较,黄连温胆汤高剂量组总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)均降低(P<0.05)。HE染色显示:模型组主动脉根部斑块明显,呈易损斑块特征,各给药组斑块有不同程度减轻;油红O和Masson染色显示:与模型组比较,雷帕霉素组、黄连温胆汤高剂量组主动脉根部斑块面积减小,胶原纤维含量升高(P<0.05),易损斑块趋于稳定。蛋白免疫组化结果显示:黄连温胆汤中剂量组、黄连温胆汤高剂量组小鼠主动脉PI3K、Akt、mTOR蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论黄连温胆汤具有降脂和抗动脉粥样硬化的作用,其机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路,诱导巨噬细胞自噬有关。

阿托伐他汀对小鼠实验性动脉粥样硬化病变形成的抑制作用

目的观察阿托伐他汀对载脂蛋白E基因缺陷(apoE-/-)小鼠实验性动脉粥样硬化(AS)病变形成及血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达的影响,探讨阿托伐他汀抑制AS病变形成的可能机制。方法将apoE-/-小鼠随机分为3组:阿托伐他汀高、低剂量组、模型组(等量生理盐水),每组8只,给药第8周后全部处死。酶法检测血清脂质含量;比色法检测氧化指标一氧化氮(NO)、总抗氧化能力(TAC)及丙二醛(MDA);病理图像分析法测定主动脉AS斑块面积及其与管腔面积的比值;免疫组织化学染色方法测定主动脉壁VCAM-1表达。结果阿托伐他汀高、低剂量组与模型组apoE-/-小鼠比较显示:(1)阿托伐他汀(高、低剂量)可以显著降低总胆固醇、甘油三酯水平(P<0.01),升高高密度脂蛋白胆固醇水平(P<0.01);(2)明显增加血浆NO及TAC(P<0.01),减少MDA的生成(P<0.01);(3)阿托伐他汀可减少斑块面积与管腔面积比值(P<0.01);(4)阿托伐他汀可下调VCAM-1的表达(P<0.01)。结论阿托伐他汀可能通过调节apoE-/-小鼠血脂代谢、增强其抗氧化能力及下调主动脉壁VCAM-1表达,抑制apoE-/-小鼠AS病变形成的发展。

载脂蛋白M对小鼠血清白细胞介素-10和白细胞介素-6的影响

本实验旨在观察在脂多糖（LPS）诱导的小鼠炎症模型中,载脂蛋白M（apoM）是否能够影响小鼠血清中炎性因子的水平,现报道如下.

栀子苷调节PI3K/AKT/mTOR信号通路在动脉粥样硬化形成过程中对Th17/Treg功能的影响

目的:观察栀子苷对载脂蛋白E缺乏(ApoE^(-/-))小鼠Th17/调节性T(Treg)细胞失衡的影响及其作用机制。方法:将50只纯合子ApoE^(-/-)雌性小鼠随机分为对照组、模型组和栀子苷低剂量组、栀子苷中剂量组、栀子苷高剂量组。对照组小鼠喂养普通饲料,模型组和栀子苷组小鼠喂养高脂饲料。从第8周开始,栀子苷各剂量组每日灌胃栀子苷(25、50、100 mg/kg),连续8周。试验结束时,采用油红O染色评估主动脉及其根部动脉粥样硬化(AS)病变面积比。采用定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)分析主动脉组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-17A和IL-10 mRNA表达;采用流式细胞仪分析脾脏中Th17和Treg细胞百分比;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测主动脉组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关蛋白表达。结果:油红O染色病变显示,栀子苷中剂量组、栀子苷高剂量组病变百分比低于模型组(P<0.05)。与对照组比较,模型组主动脉TNF-α、IL-6和IL-17A mRNA表达水平升高(P<0.05);栀子苷各剂量组主动脉TNF-α、IL-6和IL-17A mRNA表达水平降低(P<0.05)。与对照组比较,模型组主动脉抗炎细胞因子IL-10 mRNA表达水平降低(P<0.05);栀子苷各剂量组主动脉抗炎细胞因子IL-10 mRNA表达水平升高(P<0.05)。与对照组比较,模型组小鼠脾脏中Th17细胞百分比升高,Treg细胞百分比降低(P<0.05)。栀子苷处理恢复了AS小鼠Th17和Treg细胞的平衡。栀子苷抑制PI3K的表达及AKT和mTOR的磷酸化,MHY1485(mTOR活化剂)减弱了栀子苷对T细胞分化的影响。结论:栀子苷抗AS作用机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号引起的Treg细胞增多和Th17细胞减少有关。

化瘀祛痰方对ApoE^(-/-)小鼠主动脉MAPK信号通路相关蛋白表达的影响

目的:探讨载脂蛋白敲除(Apoe-/-)小鼠主动脉丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关mRNA的表达变化及化瘀祛痰方药对其的干预作用,探讨化瘀祛痰方药抗AS作用及可能的机制。方法:50只Apo E-/-小鼠随机分为模型组,丹参酮ⅡA组(30 mg·kg^(-1)·d^(-1)),化瘀祛痰高剂量组(20 g·kg^(-1)·d^(-1)),化瘀祛痰中剂量组(10 g·kg^(-1)·d^(-1)),化瘀祛痰低剂量组(5 g·kg^(-1)·d^(-1)),10只C57BL/6/J小鼠作为正常组。全自动生化仪检测血清甘油三酯(triglyceride,TG),胆固醇(cholesterol,TC),高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C),低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)的含量;苏木素-伊红(HE)检测各组小鼠主动脉斑块情况;油红O检测各组小鼠肝脏脂质沉积情况;酶联免疫吸附测定(ELISA)测定各组小鼠血清中血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion protein 1,VCAM-1),细胞间黏附分子-1(ICAM-1),白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6),肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠主动脉c-Jun氨基末端激酶(c-Jun n-terminal kinase,JNK),磷酸化c-Jun氨基末端激酶(phosphorylated c-Jun N-terminal kinase,p-JNK),p38 MAPK,p-p38 MAPK,细胞外调节激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK),磷酸化细胞外调节激酶(extracellular regulated protein kinases,p-ERK)蛋白的表达变化。结果:与正常组比较,模型组小鼠血清TC,TG,LDL-C水平明显升高,HDL-C水平明显降低;主动脉管腔见较大粥样斑块,肝细胞中见大量脂质沉积;血清内相关炎性因子TNF-α,IL-6,VCAM-1,ICAM-1含量增加;血管内相关MAPK信号通路p-p38,p-JNK蛋白表达明显增加(P<0.05)。与模型组比较,丹参酮ⅡA组与化瘀祛痰各组小鼠TC,TG,LDL-C明显下降,HDL-C明显升高,主动脉管腔中粥样斑块面积和肝脏脂质沉积量明显减少,血清内相关炎性因子TNF-α,IL-6,VCAM-1,ICAM-1含量降低(P<0.05);血管内相关MAPK信号通路p-p38,p-JNK蛋白表达明显降低(P<0.05),p-ERK表达趋势不明显。结论:化瘀祛痰方药可抑制Apo E-/-小鼠主动脉斑块形成,其机制可能与调控血管MAPK信号通路基因表达有关。