载脂蛋白E敲除(ApoE^(-/-))小鼠整装(whole-mount)主动脉免疫荧光组织化学染色的血管外膜淋巴管成像

目的 探索载脂蛋白E敲除(ApoE^(-/-))小鼠整装(whole-mount)主动脉免疫荧光组织化学染色法显示血管外膜淋巴管的可行性。方法 制备ApoE^(-/-)小鼠整装主动脉,进行淋巴管内皮受体1(LYVE1)、 α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫荧光组织化学染色,染色后组织经5 g/L苏丹黑B处理30 min、组织透明液透明,移至自制的样本容器中,荧光显微镜下成像。结果经5 g/L苏丹黑B处理的整装主动脉可见血管自发荧光显著降低,外膜淋巴管的特异性荧光强度显著增强,更易观察且不会对其他通道荧光产生干扰。结论 建立的ApoE^(-/-)小鼠整装主动脉免疫荧光组织化学染色显示血管外膜淋巴管的方法操作简便,特异性好。

高热量饮食和年龄对载脂蛋白E基因敲除小鼠脑功能的影响

目的探讨高热量饮食和年龄对载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠脑功能的影响。方法选取8月龄成年ApoE^(-/-)小鼠和18月龄老年ApoE^(-/-)小鼠共20只,随机分为正常饮食成年组、正常饮食老年组、高热量饮食成年组、高热量饮食老年组,每组5只。正常饮食成年组、正常饮食老年组小鼠喂食实验室标准饲料,高热量饮食成年组、高热量饮食老年组小鼠喂食高脂饲料,干预8周。用体质量监测和葡萄糖耐量实验测试小鼠体质量、血糖变化,核磁共振波谱检测海马和下丘脑N-乙酰天冬氨酸(NAA)、胆碱(Cho)含量,Y迷宫和旷场实验检测认知功能,Western blot检测脑组织突触体相关蛋白25(SNAP-25)、突触素(synaptophysin)、突触后致密蛋白95(PSD-95)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素1β(IL-1β)表达。结果与正常饮食成年组比较,高热量饮食成年组海马NAA、下丘脑Cho和NAA、自发交替率、SNAP-25、synaptophysin、PSD-95表达降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),iNOS、IL-1β表达升高,差异有统计学意义(P<0.01);与正常饮食成年组比较,正常饮食老年组海马NAA、下丘脑Cho、SNAP-25、synaptophysin、PSD-95表达降低(P<0.05,P<0.01),iNOS、IL-1β表达升高(P<0.01);与正常饮食老年组比较,高热量饮食老年组海马和下丘脑Cho和NAA、中心路程/总路程、SNAP-25、synaptophysin、PSD-95表达降低(P<0.05,P<0.01),iNOS、IL-1β表达升高(P<0.01);与高热量饮食成年组比较,高热量饮食老年组海马NAA、中心路程/总路程、平均速度、synaptophysin表达降低(P<0.05,P<0.01),iNOS、IL-1β表达升高(1.61±0.10 vs 1.35±0.13,2.04±0.08 vs 1.54±0.11,P<0.05,P<0.01)。结论高热量饮食导致ApoE^(-/-)小鼠代谢障碍和神经炎症,抑制突触蛋白表达引起认知功能障碍;长期高热量饮食和年龄增加促进ApoE^(-/-)小鼠脑功能衰退。

解毒活血中药配伍对载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉NF-κB与MMP-9表达的调控作用

目的观察解毒活血中药配伍对载脂蛋白E基因敲除小鼠[apolipoprotein E knocked-out mice, ApoE(-/-)mice]主动脉核因子-κB(NF-κB)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达水平的调控作用。方法13周龄ApoE(-/-)小鼠分为高脂组(给予高脂饲料)和普通饲料组(给予普通饲料),同时设13周龄C57 BL/6J小鼠对照组(给予普通饲料)。19周后进行干预,普通饲料模型组、C57BL/6J小鼠对照组灌服生理盐水,高脂组随机分为解毒组[灌服虎杖苷26．6 mg／(kg·d)],活血组[灌服芎芍胶囊110 mg／(kg·d)],解毒活血配伍高剂量组[灌服虎杖提取物53．2 mg／(kg·d),芎芍胶囊220 mg／(kg·d)];解毒活血配伍中剂量组[灌服虎杖提取物26．6 mg／(kg·d),芎芍胶囊110 mg／(kg·d)];解毒活血配伍低剂量组[灌服虎杖提取物13．3 mg／(kg·d),芎芍胶囊55 mg／(kg·d)],洛伐他汀组[灌服洛伐他汀3．3 mg／(kg·d)],高脂饲料模型组(灌服生理盐水)。17周后,取主动脉做常规石蜡切片,免疫组化观察其NF-κB和MMP-9表达的程度。结果模型组ApoE(-/-)小鼠主动脉及粥样斑块NF-κB和MMP-9表达明显增加,虎杖苷、芎芍胶囊、洛伐他汀及解毒活血配伍治则的虎杖苷与芎芍胶囊配伍均可降低其主动脉NF-κB和MMP-9表达(P<0．01),且以解毒活血配伍高剂量组疗效最好(P<0．01)。结论解毒活血配伍可降低ApoE(-/-)小鼠主动脉NF-κB和MMP-9表达,且优于单纯解毒和活血组。

艾塞那肽对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化模型中VCAM-1、ICAM-1表达的影响

目的探讨胰高血糖素样肽1(GLP-1)受体激动剂艾塞那肽对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型中主动脉病变的影响。方法 ApoE-/-小鼠随机分为普通饮食组(n=14)和高脂饮食组(n=68),喂养12周后随机抽取普通饮食组4只和高脂饮食组8只小鼠检测造模情况。将高脂饮食组小鼠再分为非药物干预组、阿托伐他汀钙片组、艾塞那肽小剂量组、艾塞那肽大剂量组、阿托伐他汀+艾塞那肽小剂量组、阿托伐他汀+艾塞那肽大剂量组(每组10只)。药物干预6周后,各组小鼠眶周静脉丛取血,并取主动脉弓行石蜡切片,HE染色观察。ELISA法检测血清血脂水平,Western blotting检测主动脉血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的蛋白表达水平。结果 HE染色结果显示:普通饮食组及阿托伐他汀+艾塞那肽大剂量组镜下观察未见异常;阿托伐他汀钙片组,艾塞那肽小、大剂量组,阿托伐他汀+艾塞那肽小剂量组可见广泛的病理性内膜增厚;非药物干预组有脂质斑块形成,可见脂核。单独应用艾塞那肽或联合阿托伐他汀可不同程度降低血清血脂(TC、TG、LDL-C)水平(P<0.05)。艾塞那肽不同剂量单独或联合阿托伐他汀可降低主动脉VCAM-1、ICAM-1的表达(P<0.05)。结论艾塞那肽可能通过下调ApoE-/-小鼠主动脉VCAM-1、ICAM-1的表达,抑制ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化病变的形成。

选择性环氧化酶-2抑制剂对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化影响的实验研究

目的:观察选择性环氧化酶-2抑制剂对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化进展的影响。方法:8周龄载脂蛋白E基因敲除小鼠分为塞来昔布(celecoxib)组及安慰剂组,均予高脂饮食喂养,分别以特异性环氧化酶-2抑制剂塞来昔布及安慰剂灌胃8周;同龄野生型小鼠为正常对照组。酶法分析测定血脂,油红O染色观察主动脉根部粥样硬化斑块大小。结果:塞来昔布组与安慰剂组之间实验前后血脂水平均无差异,但均高于正常对照组(胆固醇水平P<0.01,甘油三酯水平P<0.05)。油红O染色显示,塞来昔布组及安慰剂组可见明显粥样硬化斑块形成;前者的斑块面积及斑块面积/原管腔面积均较后者显著降低(P均<0.01)。结论:用选择性环氧化酶-2抑制剂塞来昔布进行抗炎干预可抑制动脉粥样硬化的进展,其机制与调脂无关。针对炎症机制有望有效控制动脉粥样硬化的发生发展。

脂欣康胶囊对载脂蛋白E基因敲除小鼠TNF-α、IL-1β干预作用

目的观察脂欣康胶囊对载脂蛋白E(ApoE)基因敲除小鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)的影响。方法将6周龄ApoE基因敲除小鼠随机分为模型组与脂欣康组,相同遗传背景的同龄正常C57BL/6J小鼠为正常对照组。脂欣康组灌服脂欣康胶囊内之药粉,模型组、正常对照组均灌服生理盐水。连续灌胃2周后(8周龄),各组随机取出半数小鼠,雌雄各半,麻醉后由腹腔静脉抽血。另一部分继续灌胃4周后(12周龄)由腹腔静脉抽血。离心分离血清,ELISA法检测TNF-α和IL-1β。结果灌服2周后,脂欣康组小鼠血清TNF-α和IL-1β显著低于模型组(P<0.05),模型组显著高于正常对照组(P<0.05);继续用药4周后,TNF-α和IL-1β无明显增高,脂欣康组显著低于模型组(P<0.05),模型组显著高于正常对照组(P<0.05)。结论脂欣康胶囊具有显著抑制ApoE基因敲除小鼠血清TNF-α与IL-1β增高的作用。

LXR激动剂对ApoE基因敲除小鼠主动脉粥样硬化斑块内组织因子和基质金属蛋白酶-9表达及胶原含量的影响

目的:探讨肝X受体(LXR)激动剂对南脂饲养ApoE基因敲除小鼠(ApoE^(-/-))在动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)病变形成的早期阶段斑块内组织因子和基质金属蛋白酶-9表达及胶原含量的影响。方法:8周龄雄性ApoE^(-/-)小鼠12只,随机分入LXR激动剂T0901317干预组或二甲基亚砜(DMSO)溶剂对照组,每组各6只。均高脂饲养8周,在高脂饲养的后4周,分别给予T0901317 20 mg·kg^(-1)·d^(-1)或相当剂量的DMSO腹腔注射。麻醉后处死小鼠,取小鼠主动脉,以石蜡包埋,行主动脉根部连续切片:以HE染色观察形态学变化,生化法检测小鼠血脂,免疫组化法检测主动脉壁斑块内组织因子(tissue factor,TF)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达水平,苦味酸-天狼星红染色检测斑块内胶原含量,以Image Pro Plus 6.0软件进行图像分析。结果:T0901317干预组血浆总胆固醇、甘油三脂、高密度脂蛋白胆固醇明显高于对照组(P<0.01,P<0.01和P<0.05);T0901317干预组主动脉AS斑块面积明显小于对照组(P<0.05),分别为(4285±2133)μm^2和(8403±2535)μm^2;T0901317干预组主动脉AS斑块面积/血管壁面积比值明显小于对照组(P<0.05);T0901317干预组动脉粥样硬化斑块内TF表达水平较对照组明显减低(P<0.05),平均吸光度值分别为(0.0309±0.0109)与(0.0764±0.0346);动脉粥样硬化斑块内MMP-9表达水平较对照组明显减少(P<0.01),平均吸光度值分别为(0.0293±0.0163)与(0.0671±0.0200);T0901317干预组动脉粥样硬化班块内胶原纤维的含量较对照组明显增加(P<0.01),平均吸光度分别为(0.0311±0.0101)与(0.0142±0.0054)。结论:LXR激动剂不仅可以抑制动脉粥样硬化的发展,而且可能通过减少动脉粥样硬化斑块内组织因子和基质金属蛋白酶-9的产生,改变斑块内的胶原构成,而起到稳定动脉粥样硬化斑块的作用。

南蛇藤素对ApoE基因敲除小鼠主动脉壁MIF及MMP-9表达的影响

目的观察南蛇藤素对ApoE基因敲除小鼠在动脉粥样硬化斑块形成的早期阶段主动脉壁中巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达的影响。方法8周龄雄性ApoE基因敲除小鼠12只,按随机数字表法分为南蛇藤素干预组和对照组,每组6只,均给予高脂饮食饲养8周,在高脂饲养的后4周,分别予以2mg.kg-1.d-1南蛇藤素和相当剂量的溶剂二甲基亚砜(DMSO)腹腔注射,每日1次,连续用药4周;小鼠处死后行主动脉连续石蜡切片,HE染色观察组织形态学改变,测定ApoE基因敲除小鼠主动脉根部粥样斑块面积,同时采用免疫组化方法观察主动脉壁MIF和MMP-9蛋白表达的强度。结果图像分析测量结果显示对照组形成了早期斑块;南蛇藤素干预组斑块面积较对照组明显减小(P<0.01),斑块面积/动脉壁横切面积也明显降低(P<0.01);南蛇藤素干预组与对照组比较,MIF、MMP-9的表达均明显降低(P<0.01)。结论南蛇藤素可能通过下调ApoE基因敲除小鼠主动脉壁MIF、MMP-9表达,发挥一定的抗动脉粥样硬化作用。

运动对Apo E基因敲除小鼠冠状动脉超氧化物阴离子和NF-κB的调控作用

目的:探讨长期中等负荷耐力运动对载脂蛋白E(ApoE)基因敲除小鼠冠状动脉粥样硬化的影响和对冠状动脉超氧化物阴离子、CD40L的调控作用。方法:40只6周龄ApoE基因敲除小鼠随机分为运动干预组和对照组。运动干预组给予长期中等负荷耐力跑台运动干预32周;一般对照组未予以特殊干预。实验结束后评估两组小鼠冠状动脉主干的动脉粥样硬化病理形态学改变程度,采用荧光免疫组化法测定冠状动脉主干的超氧化物阴离子、CD40L的表达、实时PCR的方法测定NF-κB、MCP-1mRNA的表达。结果:一般对照组冠状动脉粥样硬化进展显著;长期中等负荷耐力运动组冠状动脉粥样硬化程度显著下降、冠状动脉主干狭窄率较对照组显著下降(33.3±5.66%vs48.3±5.91%,P<0.01)、冠状动脉主干超氧化物阴离子显著低于对照组(2.17±0.69vs3.70±0.51,P<0.01),CD40L的表达均显著低于对照组(1.97±0.41vs2.47±0.35,P<0.01),并且NF-κB、ICAM-1、MCP-1mRNA的表达也显著低于对照组。结论:长期中等负荷耐力运动可显著下调ApoE基因敲除小鼠冠状动脉超氧化物阴离子与CD40L的表达,减轻炎症浸润并延缓冠状动脉粥样硬化的进展。

DPP4抑制剂西格列汀对ApoE基因敲除小鼠肾脏Egr-1及FN表达的影响

目的观察DPP4抑制剂西格列汀对Apo E基因敲除小鼠肾脏组织中早期生长反应因子-1(Egr-1)及纤连蛋白(FN)表达的影响。方法 8周龄雄性Apo E基因敲除小鼠12只,按随机数字表法分为西格列汀干预组(sig+apo E-/-组)和实验组(apo E-/-组),每组6只,另取C57BL小鼠6只作为正常对照组(control组)。高脂饮食结合药物饲养16周后,行腹腔耐量实验,观察血糖水平,后收集24 h尿标本,用ELISA法检测24 h尿蛋白,随后取血并处死各组小鼠,血清学检测血脂变化,取肾组织行实时荧光定量PCR及免疫印迹(Western blotting),检测肾组织中Egr-1及FN的m RNA和蛋白表达水平。结果血脂检测显示,实验组和西格列汀干预组小鼠甘油三酯、胆固醇、低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白均显著高于正常对照组(P<0.05),实验组和西格列汀干预组间上述指标无统计学差异(P>0.05),而高密度脂蛋白在西格列汀干预组显著高于实验组(P<0.001)和正常对照组(P<0.001)。IPGTT结果显示,apo E-/-组、sig+apo E-/-组和对照组3组间空腹血糖水平均没有显著差异(P>0.05)。24 h尿液检测结果显示:apo E-/-组24 h尿白蛋白排泄量明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01);西格列汀治疗后,sig+apo E-/-组小鼠24 h尿白蛋白较apo E-/-组显著降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。Real-time PCR和Western blotting检测显示:实验组肾皮质中,Egr-1及FN的m RNA水平和蛋白水平均高于正常对照组,而与实验组相比,西格列汀能显著降低Egr-1及FN的m RNA和蛋白水平。结论西格列汀可能通过调控Egr-1的表达从而下调FN,从而达到肾脏保护作用。

耐力训练对ApoE^(-/-)致AS小鼠IL-18和IL-10表达的影响

目的:深入观察耐力训练对载脂蛋白E基因敲除(Apo E^(-/-))致动脉粥样硬化(AS)小鼠白介素18(IL-18)和白介素10(IL-10)的影响,探讨运动防治AS的可能机制。方法:选取8周龄雄性Apo E^(-/-)小鼠20只:随机分为2组(n=10):AS模型组(AC组)和运动干预组(AE组),AE组进行跑台耐力训练;选取8周龄C57BL/6J雄性小鼠10只作为正常对照组(CC组)。实验持续12周,取主动脉制作冰冻切片,分别用于观察主动脉AS斑块和病理变化以及主动脉IL-18、IL-10蛋白表达;采用ELISA法检测血清IL-18、IL-10水平。结果:112周高脂膳食致Apo E^(-/-)小鼠发生典型的AS病变,耐力训练使AS斑块面积显著减少(P<0.01),病变程度显著减轻。2与CC组比较,AC组、AE组小鼠血清IL-18和IL-10水平均显著升高(P<0.01),且AC组IL-18/IL-10比值显著升高(P<0.01)。AE组血清IL-18水平及IL-18/IL-10比值均显著低于AC组(P<0.01)。3与CC组比较,AC组、AE组小鼠主动脉IL-10和IL-18蛋白表达均显著升高(P<0.01),AE组IL-10表达显著高于AC组(P<0.05),IL-18表达显著低于AC组(P<0.05)。结论:耐力训练通过降低血液和主动脉IL-18及提高IL-10水平,增强了主动脉血管抗炎能力,从而发挥抗AS的作用。

荷丹片对APOE^(-/-)小鼠血脂、炎症因子及形态学变化的影响

目的研究荷丹片(荷叶,丹参,山楂,番泻叶,补骨脂)对载脂蛋白E基因敲除(APOE-/-)小鼠的血脂、脂联素、肿瘤坏死因子(TNF-α)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)和形态学变化的影响。方法将50只APOE-/-小鼠随机分为对照组、模型组、荷丹片低、高剂量组、辛伐他汀组。对照组普通饲料喂养,其余各组高胆固醇饲料喂养。12周后,取血清测血脂,ELISA法测脂联素、TNF-α、hs-CRP水平;取同部位主动脉HE染色光镜下观察形态学变化。结果与对照组相比,模型组血脂、TNF-α、hs-CRP水平明显升高(P<0.01),脂联素水平明显降低(P<0.01),主动脉形态学病变加重。与模型组相比,荷丹片低、高剂量组、辛伐他汀组的血脂、TNF-α、hs-CRP水平明显降低(P<0.01),脂联素水平明显升高(P<0.05),主动脉形态学病变有所减轻。结论荷丹片可降低APOE-/-小鼠血脂和TNF-α、hs-CRP水平,升高脂联素水平,从而抑制动脉粥样硬化的发生、发展。

MMP-9 DNA甲基化变化在ApoE^(-/-)小鼠肾脏中的作用及高蛋氨酸饮食的影响

目的探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)DNA甲基化变化在载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)C57BL/6J小鼠肾脏中的作用及高蛋氨酸饮食的影响。方法将ApoE-/-小鼠随机分成模型组、高蛋氨酸组和叶酸及维生素B12治疗组,并设正常C57BL/6J小鼠为正常对照组,喂养14周后采血,分离肾脏。全自动生化分析仪检测血清同型半胱氨酸(Hcy)、尿素(Urea)和肌酐(Cr)水平;免疫组织化学法分析肾脏MMP-9蛋白表达;荧光定量RT-PCR检测MMP-9 mRNA表达;巢式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)和降落式PCR检测MMP-9 DNA甲基化变化程度。结果模型组血清Hcy、Urea、Cr浓度均明显升高,MMP-9甲基化程度降低,mRNA和蛋白表达增强(均P<0.05),与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);高蛋氨酸组各项指标变化较模型组更为明显(均P<0.05);而叶酸及维生素B12治疗组MMP-9 mRNA和蛋白表达减少,甲基化程度升高(P<0.05)。结论 MMP-9 DNA甲基化变化可能是ApoE-/-小鼠高蛋氨酸饮食致肾功能损伤的重要机制之一。

耐力训练对动脉粥样硬化ApoE^-/-小鼠主动脉NF-κB和MMP-9表达的影响

目的:探讨耐力训练对动脉粥样硬化(AS)载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠主动脉核因子-κB(NF-κB)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响及其在抗AS中的作用。方法:36只8周龄ApoE-/-小鼠随机分为14周AS模型组(H组)、26周AS模型组(HH组)、14周造模+12周运动干预组(HE组),每组12只,均饲以高脂膳食饲料。HE组小鼠经14周高脂饲养形成AS后,开始在活动跑台上进行12周耐力训练(13 m/min,60min/次,每周5次)。另选取12只8周龄C57BL/6J小鼠作为对照组(N组),饲以标准饲料。制备主动脉根部冰冻切片,行HE染色观察主动脉病理变化,行原位杂交法测定主动脉NF-κB mRNA表达,行免疫组化法测定主动脉NF-κBp65及MMP-9蛋白表达,其表达量用阳性细胞%表示。结果:①14周高脂膳食后H组小鼠发生AS;HH组较H组病变加重,而HE组较HH组病变减轻。②HH组小鼠主动脉NF-κB mRNA及NF-κBp65阳性细胞%均显著高于N组,而HE组显著低于HH组(P<0.01)。③HH组小鼠主动脉MMP-9阳性细胞%显著高于N组,而HE组显著低于HH组(P<0.01)。结论:耐力训练降低AS小鼠主动脉NF-κB表达和MMP-9表达,发挥抗AS作用,可能是运动防治AS的机制之一。

耐力训练对ApoE^-/-小鼠AS形成及病理变化的干预作用研究

目的:采用复制的实验动物AS模型,观察耐力运动对AS形成的预防作用和对已经形成的AS的治疗或干预效果。方法:选取48只8周龄ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠,饲以高脂高胆固醇膳食,实验动物分组为14周AS模型组(H组)、14周跑台运动组(HE组)、26周AS模型组(HH组)、14周造模+12周跑台运动组(H+E组),并选取8周龄C57BL/6J小鼠24只作为对照组,每组12只。令HE组和H+E组小鼠在活动跑台上进行耐力性运动(13 m/min,60 min/次,每周5次)。取主动脉组织制备主动脉根部冰冻切片,油红O染色评估AS斑块面积,HE染色分析主动脉组织病理学变化等。结果:(1)H组小鼠主动脉血管内膜可见大量AS斑块,其面积占血管腔总面积的41.79±6.93%,HE组主动脉斑块面积为25.07±7.04%,显著低于H组(P<0.01),且病变程度较H组明显减轻。(2)与H组相比,HH组小鼠主动脉AS病变进一步加重,斑块面积与血管腔总面积比例达58.80±6.40%,H+E组斑块面积为50.35±3.52%,显著低于HH组(P<0.05),且病变进展程度相对减缓。结论:14周耐力训练能有效地预防ApoE-/-小鼠AS的形成,12周耐力训练对ApoE-/-小鼠已经形成的AS起到了减缓其病变进展的作用。

瑞舒伐他汀对载脂蛋白E基因敲除小鼠血管炎症的作用研究

目的研究瑞舒伐他汀对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠血管炎症的作用。方法采用含瑞舒伐他汀的高脂饲料连续喂养载脂蛋白E基因敲除型小鼠8周,诱导主动脉血管炎症,并检测其对血脂水平、大动脉血管内皮炎症的影响,以及对促炎性细胞因子、趋化因子和黏附分子表达的影响。结果瑞舒伐他汀能显著改善ApoE-/-小鼠的血管炎症,缩小主动脉F4/80阳性区域面积,并剂量依赖的降低血清TNF-α,IL-6及主动脉组织中ICAM-1,VCAM-1的表达。结论瑞舒伐他汀在ApoE-/-小鼠中具有不依赖脂代谢调节功能的抗血管炎症活性。

瑞舒伐他汀、普罗布考对Apo-E-/-小鼠心脏内LOX-1表达的影响

目的探讨瑞舒伐他汀、普罗布考及二者联合对载脂蛋白E基因敲除(Apo-E-/-)小鼠心脏内血凝集素样氧化低密度脂蛋白-1(LOX-1)表达的影响。方法雄性8周龄Apo-E-/-小鼠40只被随机分为对照组(单纯高脂饲料)、瑞舒伐他汀组(单纯高脂饲料+10 mg/kg灌胃)、普罗布考组(100 g饲料加入1 g普罗布考药粉)、联合组(10 mg/kg瑞舒伐他汀灌胃+100 g饲料加入1 g普罗布考药粉)4组,均采用相应的方法进行喂养,12周后进行解剖,显微镜下观察各组小鼠的主动脉脂质沉淀及动脉粥样硬化斑块情况,来判断动脉粥样硬化模型是否建立成功,取出心脏。应用实时定量荧光PCR及ELISA方法检测各组小鼠心脏中LOX-1在mRNA及蛋白水平的表达。结果显微镜下观察各组主动脉可见治疗组脂质沉积及粥样硬化斑块量较对照组少,以联合组为最少;对照组、普罗布考组、瑞舒伐他汀组、联合组4组小鼠心脏中LOX-1在mRNA及蛋白水平的表达量分别为:12.43±11.716,4.39±2.844;10.82±9.151,2.29±0.575;4.479±0.238,2.880±0.35及3.553±0.719,2.634±0.297,普罗布考组、联合组LOX-1在mRNA及蛋白水平明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);但瑞舒伐他汀组与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论瑞舒伐他汀、普罗布考及二者联合可减少主动脉中脂质沉积,但短期内对心脏中LOX-1的表达无明显影响。

基质金属蛋白酶-9在动脉粥样硬化血管中的异常表达

目的了解基质金属蛋白酶-9在Apo-E基因敲除小鼠的动脉粥样硬化斑块血管中的表达。方法 8只5周龄,雄性SPF级C57BL/6J小鼠为对照组(NS组)。8只相同周龄,雄性SPF级载脂蛋白E基因敲除(C57BL/6J-ApoE-/-)小鼠为实验组(FS组)。高脂(1%胆固醇+15%猪油)喂食15周,20周龄取材检测。结果 FS组和NS组体重分别为(29.10±2.53)g和(33.20±5.18)g,差异无统计学有意义(P>0.05)。FS组较NS组血清总胆固醇显著增高,分别为(13.52±1.58)mEq/L和(2.12±0.35)mEq/L,差异有统计学有意义(P<0.01)。NS组主动脉管壁正常,无AS斑块;FS组主动脉出现典型的AS斑块,胶原纤维明显减少。免疫组化显示NS组可见主动脉血管内、中膜MMP-9呈散在弱阳性表达;而其在FS组则是内膜表达明显增高,呈强阳性表达。FS组主动脉弓MMP-9在mRNA及蛋白水平的表达较NS组均明显增高。mRNA平均光密度值为(11.61±1.92)和(1.52±0.40),差异有统计学意义(P<0.05);蛋白平均光密度值为(190.40±102.71)和(40.19±26.83),差异有统计学有意义(P<0.01)。结论在高脂喂食的载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化模型中,MMP-9高表达可能与动脉粥样硬化斑块的形成和胶原纤维明显减少有关。

IL-22对ApoE基因敲除小鼠脂肪肝抑制作用的研究

目的:研究白介素-22(IL-22)对ApoE基因敲除小鼠肝脏的保护作用并探讨其作用机制。方法:选取24只ApoE基因敲除小鼠,随机分为IL-22组和生理盐水组,尾静脉注射IL-22,剂量0.25 mg/kg,隔天给药一次,连续20次,观察肝功指标、损伤指标、血脂水平和病理变化的情况。结果:小鼠经IL-22处理后,其C反应蛋白(CRP)水平虽没有明显改变(P>0.05),但小鼠的血脂、ALT、AST、MAD水平以及肝指数显著降低(P<0.05),并且小鼠脂肪肝的病变程度也明显减轻。结论:IL-22能够降低ApoE基因敲除小鼠肝脏炎症指标并抑制脂肪肝发展。

刺五加乙酸乙酯部位对ApoE^(-/-)动脉粥样硬化小鼠肠道菌群的影响

目的:观察刺五加乙酸乙酯部位对高脂饮食诱导的载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠的影响,探讨其通过调控肠道菌群从而治疗动脉粥样硬化的作用机制。方法:32只8周龄雄性;小鼠随机分为模型组,瑞舒伐他汀组(10 mg·kg^(-1))和刺五加乙酸乙酯部位高、低剂量组(75,25 mg·kg^(-1)),每组8只。8只C57BL/6小鼠作为空白组。连续给药8周后,取血测定其血脂水平;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)试剂盒检测小鼠血清中相关指标含量;苏木素-伊红(HE)染色法观察小鼠主动脉病理形态;收集盲肠内容物采用16S rRNA扩增子测序检测肠道菌群。结果:与空白组比较,模型组小鼠斑块面积显著增加并伴有炎性浸润,升高甘油三酯(TG),总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量,增加炎症因子和血管内皮因子诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)含量,降低高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量;与模型组比较,瑞舒伐他汀组和刺五加乙酸乙酯部位高、低剂量组能改善小鼠主动脉斑块沉积,降低TG,TC,LDL-C,炎症因子和iNOS含量,升高HDL-C含量。与空白组比较,模型组厚壁菌门和变形菌门相对丰度升高,拟杆菌门相对丰度降低。Alpha和Beta多样性分析显示,各组样本能够显著分离,模型组肠道菌群物种总数和丰度较低;与模型组相比,刺五加乙酸乙酯部位可提高有益菌的相对丰度,降低致病菌的相对丰度。结论:刺五加乙酸乙酯部位主要为黄酮类成分,能够通过调控肠道菌群来治疗动脉粥样硬化,改善高脂饮食喂养ApoE;小鼠主动脉病理变化,作用机制可能与其能够降低炎症因子水平、提高抗氧化能力、修复肠道菌群结构紊乱现象有关。