高脂饮食对载脂蛋白E缺乏鼠维生素D受体表达及一氧化氮合酶活性影响研究

目的了解高脂饮食对载脂蛋白（apoE）缺乏鼠（apoE^-/-）维生素D受体（VDR）表达及内皮型一氧化氮合酶（eNOS）活性影响，探讨VDR在动脉粥样硬化（AS）形成的意义及可能机制。方法apoE^-／-小鼠与作为对照的C57BLP6J小鼠分别按数字表法分为正常食物组与高脂食物组，采用竞争蛋白结合放射免疫法检测小鼠血25-（OH）D水平，采用免疫荧光化学法及RT-PCR法检测小鼠主动脉VDR表达，应用硝酸还原酶法检测小鼠血一氧化氮（NO）含量和eNOS酶活力。结果高脂饮食进一步加重apoE-/-小鼠As病变、降低血25-（OH）D水平[血25-（OH）D：正常饲料C57BLP6J小鼠、高脂饲料C57BLP6J小鼠、正常饲料apoE。一小鼠、高脂饲料apoE-/-小鼠分别为[（26．44±1．28）ng／mL、（22．68±2．07）ng／mL、（1-7.46±4.2．22）ng／mL、（15．88±0．97）ng／mL，P〈0．01]。高脂饮食进一步上调apoE-/-小鼠主动脉VDR蛋白与mRNA表达水平[VDR蛋白分别为0．244±0．088、0．346±0．132、0．547±0．128、0．768±0．162，VDtlmRNA分另U为、0．228±O．08．3、0．375±0．103、0．451±0．117、0．597±0．131，P均〈0．01]。高脂饮食致apoE一小鼠血NO水平、eNOS酶活力明显增高[NO：（39．74±4．81）μmol／L、（48．1±5．24）ixmol／L、（67．34±6．14）tzmol／L、（86．74±8．05）txmol／L；eNOS：（8．6-t-O．77）u／L、（12．28±1．42）U／L、（15．96-t-O．92）U／L、（18．68±1．15）U／L，P均〈0．01]。血25-（OH）D水平与血浆中NO含量、eNOS酶活力及VDR表达呈负相关（P〈0．01）。结论apoE-/-小鼠血25-（OH）D水平降低，VDR表达量明显上调，血NO含量、eNOS酶活力增高，高脂饮食可进一步降低血25-（OH）13、NO水平，上调主动脉VDR表达，增加eNOS酶活力。高脂饮食、维生素D、apoE相互作用，影响As病变可能与NO、eNOS有关。

黑米花色苷影响动脉粥样硬化不稳定斑块及诱导型一氧化氮合酶mRNA表达的作用

目的:建立动脉粥样硬化不稳定斑块动物模型,观察黑米花色苷对动脉粥样硬化不稳定斑块及诱导型一氧化氮合酶mRNA表达的影响。方法:实验于2004-06/2006-10在中山大学公共卫生学院营养系完成。黑米花色苷从广东省广州市产的黑优占品种的米皮中提取纯化,主要成分为矢车菊定-3-葡萄糖苷和芍药定-3-葡萄糖苷。48只4周龄脂蛋白E基因敲除C57BL/6J小鼠,平均体质量(21±3)g,抽签随机分为3组:黑米花色苷组、辛伐他汀组和对照组,其中黑米花色苷的添加剂量为1g/kg饲料,辛伐他汀为0.5g/kg饲料,每组16只,雌雄各8只。所有小鼠分笼喂养在层流架中,自由饮水摄食,室温24℃,每两天用紫外灯消毒1次以保持层流架的无菌环境,30周后麻醉颈椎脱臼处死,磷酸盐缓冲液灌注后取出无名动脉,苏木精-伊红染色进行组织学观察,并提取RNA检测诱导型一氧化氮合酶表达变化。结果:48只小鼠均进入统计分析。①脂蛋白E基因敲除小鼠饲喂基础饲料30周在无名动脉处能观察到钙化、薄纤维帽及大脂核等不稳定斑块的典型特征。②与对照组小鼠相比,黑米花色苷组出现具有三层以下细胞组成的薄纤维帽、占斑块面积>50%的大脂核等特征的动脉粥样硬化斑块的频率分别降低了57.38%和53.13%;与对照组小鼠相比,辛伐他汀组薄纤维帽和大脂核出现的频率也分别降低了51.29%和64.25%,而3组间出现钙化现象斑块的频率差异不显著。③黑米花色苷组和辛伐他汀组与对照组相比,诱导型一氧化氮合酶mRNA的表达分别下降了39.26%和45.82%,而黑米花色苷组与辛伐他汀组相比,诱导型一氧化氮合酶mRNA的表达量差异不显著。结论:脂蛋白E基因敲除小鼠可作为动脉粥样硬化不稳定斑块实验动物模型,黑米花色苷能促进斑块稳定性,这种作用与不稳定斑块诱导型一氧化氮合酶表达下调有关。