基膜聚糖通过抑制1型辅助T细胞分化提高耐药性卵巢癌治疗效果

目的探讨基膜聚糖(LUM)在卵巢癌顺铂耐药中的作用机制,并初步探索其对1型辅助T(Th1)细胞分化的影响。方法通过基因表达数据集(GEO)筛选卵巢癌顺铂耐药株及敏感株中差异表达的基因,通过实时定量PCR检测其表达水平。利用小干扰RNA(siRNA)敲低人卵巢癌细胞中LUM表达,并用Western blot法验证敲低效率。通过流式细胞术检测敲低LUM对顺铂处理后的卵巢癌细胞系周期及凋亡的影响。通过蛋白质相互作用(PPI)网络筛选LUM潜在靶蛋白,并用分子对接验证其相互作用。肿瘤免疫评估资源数据库(TIMER)筛选LUM对卵巢癌系分泌细胞因子的影响,并利用ELISA与实时定量PCR验证。流式细胞术分析LUM对共培养的CD4^(+)T细胞分化的调控作用。结果GEO数据显示LUM在顺铂耐药株中显著上调,且其表达水平与患者预后相关。LUM在卵巢癌顺铂耐药细胞株中表达水平较高,且顺铂治疗能促进LUM的表达。敲低LUM增加顺铂诱导的卵巢癌细胞的凋亡和细胞周期阻滞,提高药物敏感性。靶基因筛选表明,LUM可能通过与Src同源域磷酸酶2(SHP2)相互作用调控卵巢癌细胞对顺铂的敏感性。另外,TIMER分析结果提示高表达LUM抑制Th1细胞分化,在卵巢癌耐药株中敲低LUM促进Th1细胞分化,通过调控γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素12(IL-12)分泌影响免疫细胞的肿瘤杀伤力。结论LUM在卵巢癌顺铂耐药中表达上调,可能通过调控SHP2相关信号通路降低卵巢癌细胞顺铂敏感性。LUM还通过调控卵巢癌细胞细胞因子分泌,进而抑制Th1细胞分化,促进肿瘤耐药性产生,可能是卵巢癌治疗新的潜在靶点。

HPV DNA负荷量、辅助性T细胞17、FoxP3+调节性T细胞及炎症因子与高危型HPV感染的相关性分析

目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)DNA、辅助性T细胞17(Th17)、叉头状转录因子3阳性(FoxP3^(+))调节性T细胞(Treg)及宫颈灌洗液中炎症因子与高危型HPV感染的相关性,为高危型HPV感染防治提供新思路。方法将2020年9月至2021年2月该院收治的高危型HPV感染患者100例纳入研究作为研究组,然后将其中50例高危型HPV16/18阳性患者作为HPV16/18组,50例其他12种高危型阳性病例作为其他亚型组。另外,选取同期体检的健康女性作为对照组(n=50)。比较研究组和对照组HPV DNA负荷量、Th17、FoxP3^(+)Treg及宫颈灌洗液中炎症因子[白细胞介素(IL)-10、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-17A]水平,比较HPV16/18组和其他亚型组各项指标水平,比较不同宫颈病变患者各项指标水平。分析各项指标与高危型HPV感染、宫颈病变的相关性,以及对宫颈病变患者高危型HPV感染的诊断价值。结果研究组HPV DNA负荷量、Th17、FoxP3^(+)Treg及宫颈灌洗液中IL-10、TNF-α、IL-17A水平均高于对照组(P<0.05),HPV16/18组各项指标水平均高于其他亚型组(P<0.05)。不同宫颈病变患者各项指标水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。HPV DNA负荷量、FoxP3^(+)Treg、Th17及宫颈灌洗液中IL-10、TNF-α、IL-17A水平与高危型HPV感染分型(HPV16/18=1,其他亚型=2)均呈负相关(P<0.05),与宫颈病变(宫颈上皮内瘤变Ⅰ级=1,宫颈上皮内瘤变Ⅱ级=2,宫颈上皮内瘤变Ⅲ级=3,宫颈癌=4)均呈正相关(P<0.05)。各项指标联合诊断高危型HPV16/18阳性的曲线下面积(AUC)为0.911(95%CI:0.837~0.959),大于各指标单独诊断。结论高危型HPV感染患者HPV DNA负荷量、Th17、FoxP3^(+)Treg及炎症因子水平异常,与高危型HPV感染分型、宫颈病变密切相关,而且HPV DNA负荷量与Th17、FoxP3^(+)Treg、炎症因子相关,各项指标联合检测可为临床防治高危型HPV持续感染提供可靠依据。

不同中医证型特应性皮炎患者外周血Th1、Th2、Th17细胞及miR-155表达分析

目的:分析研究不同中医证型特应性皮炎(AD)患者外周血辅助性T细胞1(Th1)、Th2、Th17细胞及微小RNA-155(miR-155)表达。方法:回顾性选取2021年6月~2022年6月我院收治的AD患者作为AD组(n=112),根据不同中医证型将患者分为脾虚湿蕴组(n=46)、湿热内蕴组(n=37)和血虚风燥组(n=29),另选60例本院同期体检健康人群为对照组(n=60)。比较各组外周血Th1、Th2、Th17细胞百分比差异、Th1类细胞因子(IFN-γ)、Th2类细胞因子(IL-4)、Th17类细胞因子(IL-17)及miR-155表达。结果:AD组外周血Th1、IFN-γ水平低于对照组,Th2、Th17、IL-4、IL-17、miR-155表达均高于对照组(P<0.05);不同中医证型的AD患者外周血Th1、IFN-γ水平比较差异无统计学意义(P>0.05);不同中医证型的Th2、Th17、IL-4、IL-17表达水平相比,湿热内蕴组>脾虚湿蕴组>血虚风燥组(P<0.05);不同中医证型的miR-155表达水平相比,湿热内蕴组>脾虚湿蕴组>血虚风燥组(P<0.05)。结论:不同中医证型AD患者外周血Th2、Th17细胞及相关细胞因子与miR-155表达存在差异性,检测其表达水平有助于指导AD中医辨证分型和治疗。

人工虫草对2型糖尿病早期肾病辅助T细胞1/2平衡的影响

目的探讨人工冬虫夏草(简称虫草)对早期2型糖尿病肾病(T2DN)患者辅助T细胞(Th)1/2细胞的影响。方法选择60例T2DN患者,随机分为两组,虫草治疗组30例,在原用药物基础上加用人工虫草(金水宝胶囊)3粒,每天3次,口服,连用12 w。常规治疗组30例,原用药继续,不加用虫草。健康对照组20例。检测T2DN患者治疗前后及健康受检者外周血Th、24 h尿微量白蛋白排泄率(UAER)及高敏C反应蛋白(hs-CRP)的表达。结果 T2DN组外周血CD4+IFN-γT1细胞,Th1/Th2比值,hs-CRP,UAER均高于健康对照组(P<0.05);T2DN组CD4+IL-4Th2细胞低于健康对照组(P>0.05);虫草治疗组治疗后外周血CD4+IFN-γT细胞,Th1/Th2比值,hs-CRP,UAER较常规治疗组下降更明显(P<0.05),CD4+IL-4 Th2细胞数较常规治疗组升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论虫草通过调节T2DN患者外周血Th1/Th2淋巴细胞的失衡,减轻其免疫炎症反应,从而减轻尿白蛋白的排出,有利于早期肾功能的恢复。

克拉霉素对铜绿假单胞菌慢性肺部感染小鼠辅助性T淋巴细胞1型/辅助性T淋巴细胞2型免疫平衡的调节作用

目的探讨克拉霉素对铜绿假单胞菌(PA)慢性肺部感染小鼠肺组织辅助型T淋巴细胞(Th)1/Th2免疫平衡的调节作用。方法将54只小鼠随机分入克拉霉素组、0.9%氯化钠溶液组和对照组。克拉霉素组和0.9%氯化钠溶液组通过小鼠气道接种由包裹PA的琼脂糖珠方法建立的PA慢性肺部感染模型,自建模后第7天起分别给予克拉霉素和0.9%氯化钠溶液治疗,对照组小鼠经气道接种无菌琼脂糖珠给予0.9%氯化钠溶液。分别于建模后第7、10、14天处死小鼠。标本进行肺组织细菌培养、病理学检查、支气管肺泡灌洗液(BALF)中γ-干扰素(IFN-γ)/白细胞介素(IL)-4水平测定和肺组织转录因子T-betmRNA/GATA-3mRNA表达水平分析。结果克拉霉素组小鼠在治疗后慢性肺部感染的症状明显改善。经气道接种后第7天,0.9%氯化钠溶液组和克拉霉素组BALF中IFN-γ、IL-4水平均显著高于对照组(P值均<0.05)。气道接种后第14天,克拉霉素组的IFN-γ水平显著低于0.9%氯化钠溶液组(P<0.05)。气道接种后第10、14天,克拉霉素组BALF中IL-4水平均显著高于0.9%氯化钠溶液组和对照组同时间点(P值均<0.05),而IFN-γ/IL-4比值均显著低于0.9%氯化钠溶液组同时间点(P值均<0.05)。气道接种后第7、10天,克拉霉素组与0.9%氯化钠溶液组的Th1、Th2细胞转录因子T-betmRNA、GATA-3mRNA表达水平相近,均显著高于对照组(P值均<0.05)。气道接种后第14天,克拉霉素组T-betmRNA表达水平、T-betmRNA/GATA-3mRNA比值均显著低于0.9%氯化钠溶液组(P值均<0.05)。结论在PA慢性肺部感染初期采用克拉霉素治疗可使小鼠肺组织的Th1/Th2平衡向Th2偏移,有利于缓解气道炎症。

T-bet重组腺病毒调节哮喘小鼠辅助性T细胞1型/2型免疫平衡

目的研究静脉注射T-bet重组腺病毒(AdT-bet)对小鼠哮喘模型过敏性气道炎症及辅助性T细胞1型/2型(Th1/Th2)免疫失衡的影响。方法随机将36只C57BL/6小鼠分为AdT-bet治疗(A)组、模型对照(B)组、正常对照(C)组。以卵蛋白、氢氧化铝免疫建立哮喘模型,A组激发前尾静脉注射1×10~8 pfu/100μL的AdT-bet,各组激发后进行肺泡灌洗分析细胞组分,分离肺T淋巴细胞测定细胞因子分泌水平,以流式细胞仪检测CD3^+、CD4^+T细胞比例及表达γ-干扰素(IFN-γ)和白细胞介素(IL)-4、IL-5的比例,比较各组肺组织学改变。结果A组与B组相比:①明显抑制抗原激发后气道内嗜酸性粒细胞的浸润(0.004±0.003比0.221±0.067,P<0.01);②明显抑制肺T淋巴细胞产生IL-4[(22±12)pg/mL比(170±28)pg/mL]、IL-5[(16±13)pg/mL比(330±30)pg/mL],增加了IFN-γ[(2100±360)pg/mL比(60±50)pg/mL]的产生,差异均有统计学意义(P值均<0.01);③肺T淋巴细胞CD4^+IFN-γ%及IFN-γ^+/IL-4^+明显升高(P值均<0.01),而CD4^+IL-4^+%明显下降(P<0.01);④明显抑制哮喘鼠气道内及肺泡内的过敏性炎症反应。结论激发前静脉应用AdT-bet对哮喘小鼠过敏性气道炎症有明显的防治作用,其机制可能与表达的T-bet上调Th1/Th2比值,从而调整了免疫平衡有关。

循环滤泡型辅助性T淋巴细胞及IL-21在自身免疫性肝炎中的初步研究

目的检测外周血滤泡型辅助性T淋巴细胞百分率(Tfh)及细胞上CCR7、PD-1、IL-21R等分子的表达水平,血清IL-21的表达水平,为进一步研究Tfh细胞及其相关分子在自身免疫性肝炎发病机制中的作用提供实验依据。方法收集20例自身免疫性肝炎患者与20例健康志愿者外周抗凝血,流式细胞仪检测循环Tfh细胞百分率与细胞膜上CCR7,PD-1,IL-21R等分子的表达水平,并进一步分析CCR7+Tfh亚型细胞上PD-1、IL-21R等分子的表达水平,同时ELISA检测外周血血清IL-21的水平;统计分析健康对照与自身免疫性肝炎患者的外周血Tfh细胞百分率、细胞膜上PD-1与IL-21R分子表达水平,血清IL-21表达水平的差异。结果 1)循环Tfh细胞百分率在健康对照(4.793%±1.5609%)与自免肝患者(8.915%±3.235%)具有显著性差别;循环Tfh细胞表达的PD-1分子(健康对照:91.173%±5.032%,自免肝患者:5.177%±3.267%)与IL-21R(健康对照97.625%±1.137%,自免肝患者27.800%±7.918%)具有显著性差别;2)外周血血清IL-21水平[健康对照(:444.75±75.05)pg/ml,自免肝患者(:862.80±109.83)pg/ml]也具有显著性差别;3)自身免疫性肝炎患者循环Tfh细胞百分率与血清GGT、ALP呈正相关与细胞上的PD-1表达水平呈负相关,后者与血清TB呈正相关。结论 Tfh细胞及其表达的相关分子(PD-1,IL-21R)在健康人与自免肝患者的表达水平是不同的,可能参与介导了自身免疫性肝炎的发生与发展。

腹腔镜下卵巢型子宫内膜异位囊肿剥除术后T辅助细胞1/T辅助细胞2的动态漂移

目的研究腹腔镜下卵巢子宫内膜异位囊肿剥除术后Th1(T辅助细胞1)、Th2(T辅助细胞2)各细胞因子的动态变化。方法 2009年7月～2011年8月收住宁夏医科大学附属医院妇科行腹腔镜下卵巢子宫内膜异位囊肿剥除术并经术后病理证实诊断的患者36人,ELISA法检测手术前2d、术后2h、术后72h血清的IL-2(白介素2)、IL-4(白介素4)、IL-6(白介素6)、IL-10(白介素10)、TNF-α(肿瘤坏死因子α)及IFN-γ(干扰素γ)表达变化。结果 IFN-γ在术后2h下降明显,术后72h复又升高,且升高程度与术后2h以及术前相比均有统计学差异;IL-4、IL-6在术后2h升高明显,术后72h下降,且下降程度与术后2h以及术前相比均有统计学差异;IFN-γ/IL-4比值在术后2h下降,与术前相比有统计学差异,而术后72h比值升高,与术后2h及术前均有统计学差异。结论腹腔镜下卵巢型子宫内膜异位囊肿剥除术有利于纠正Th2漂移,破坏了有利于异位内膜生长的免疫环境。

食管鳞癌组织微小RNA-138、微小RNA-145表达水平与1型/2型辅助性T细胞漂移和预后的关系

目的 分析食管鳞癌组织中微小RNA(miR)-138、miR-145的表达水平及两者与1型辅助性T细胞(Th1)/2型辅助性T细胞(Th2)漂移和预后的关系。方法 2015年5月~2018年5月间我院收治的112例食管鳞癌病人为食管鳞癌组,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测食管鳞癌组织及癌旁组织中miR-138、miR-145的表达水平。同期70例健康体检人群作为对照组,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测食管鳞癌组及对照组血清Th1型细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-2和Th2型细胞因子IL-4、IL-10水平。分析癌组织中miR-138、miR-145表达水平与临床病理参数关系。Pearson相关性分析癌组织中miR-138、miR-145与Th1型、Th2型细胞因子的相关性。分析不同miR-138、miR-145表达情况食管鳞癌病人生存情况。结果 食管鳞癌组织中miR-138、miR-145的表达水平分别为(1.155±0.232)、(1.110±0.217),癌旁组织分别为(4.155±0.732)、(3.910±0.617),食管鳞癌组织中miR-138、miR-145的表达水平明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。不同肿瘤分期的食管鳞癌组织中miR-138、miR-145表达水平差异具有统计学意义(P<0.05)。癌组织中miR-138、miR-145的表达水平均与IFN-γ、IL-2呈正相关(r=0.451、0.543;0.520、0.401,P<0.05),与IL-4、IL-10呈负相关(r=-0.391、-0.510;-0.402、0.553,P<0.05)。miR-138高表达病人的3年总体生存率(overall survival, OS)为58.49%(31/53),明显高于低表达病人17.24%(P<0.05);miR-145高表达3年OS为52.73%(29/55),明显高于低表达病人21.43%(12/56)(P<0.05)。结论 食管鳞癌组织中miR-138、miR-145表达水平降低,且与病人不良预后有关。miR-138、miR-145可能通过影响Th1/Th2漂移促进食管鳞癌恶性进展。

乳酸杆菌对新生鼠和成年鼠辅助性T细胞1/辅助性T细胞2平衡及肺树突状细胞表型的影响

目的:探讨乳酸杆菌对新生鼠和成年鼠辅助性T细胞(Th)1/Th2平衡及肺树突状细胞(DC)表型的影响。方法:新生鼠从出生后连续7 d每天经口给予109 CFU/mL浓度乳酸杆菌10μL,成年鼠选取满6周的小鼠连续7 d每天经口给予109 CFU/mL浓度乳酸杆菌50μL,实验第8天进行盲肠内容物培养以确定乳酸杆菌肠道定植情况。干预3周后,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-4和IL-10水平,流式细胞仪检测肺树突状细胞亚型和成熟度。结果:(1)乳酸杆菌干预的新生鼠乳酸杆菌数量较对照组增加,而肠球菌和肠杆菌数量降低(P<0.01),乳酸杆菌干预的成年鼠肠道乳酸杆菌数量较对照组增加(P<0.01),但肠道肠球菌和肠杆菌数量没有变化。(2)乳酸杆菌干预的新生鼠IFN-γ和IL-10水平较对照组高(P<0.05),IL-4水平两组比较差异无统计学意义。乳酸杆菌干预的成年鼠IFN-γ、IL-4和IL-10水平与对照组比较差异无统计学意义。(3)乳酸杆菌干预的新生鼠肺CD11c^(+)CD8α^(-)水平为92.34%±0.94%,较对照组降低(P<0.05),干预组CD11c^(+)CD8α^(+)水平较对照组增加(P<0.05)。经过乳酸杆菌干预后,新生鼠肺部14.03%±1.14%的DC表达MHCⅡ类分子,较对照组明显增加。成年鼠乳酸杆菌干预组CD11c^(+)CD8α^(-)、CD11c^(+)CD8α^(+)和CD11c^(+)MHCⅡ+水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:乳酸杆菌干预可以促进新生鼠Th1/Th2平衡向Th1方向偏移,而对成年鼠没有影响。

Th1/Th2、Th17/Treg型细胞因子群在稽留流产病因学中的研究进展

近年来稽留流产发病率逐年上升,然病因复杂,免疫相关因素是其病因学研究的热点。妊娠被看作是一次成功的同种异体移植,母体对胎儿形成免疫耐受,但母胎界面免疫微环境的任何失衡都可能导致妊娠失败。辅助型T细胞1(Th1)/辅助型T细胞2(Th2)、辅助型T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)细胞因子共同构成的细胞因子网络对维持母胎界面免疫微环境的平衡至关重要,该文以Th1/Th2、Th17/Treg型细胞因子群为中心,对其在稽留流产病因学领域的研究概况进行综述。

淋巴结滤泡辅助T细胞淋巴瘤-血管免疫母细胞型临床病理特征和预后因素分析

目的:探讨淋巴结滤泡辅助T细胞淋巴瘤-血管免疫母细胞型(nodal T-follicular helper cell lymphoma,angioimmunoblastic-type,nTFHL-AI)临床病理特征和预后因素。方法:回顾性分析63例nTFHL-AI患者临床信息,利用免疫组化(immuno⁃histochemistry,IHC)、原位杂交(in situ hybridization,ISH)和抗原受体基因重排评估nTFHL-AI临床病理特征。使用Cox比例风险回归模型评估预后因素。结果:免疫染色提示CD4阳性肿瘤细胞例数明显超过CD8(66%vs.5%)。Epstein-Barr病毒(Epstein-Barr virus,EBV)编码的小RNA(EBV-encoded small RNA,EBER)阳性患者比EBER阴性患者更易表达CXCL13(P=0.006)。5年总体生存期(overall survival,OS)和无进展生存期(progression-free survival,PFS)分别为31%和16%。CXCL13阳性组OS和PFS显著优于CXCL13阴性组(P=0.003、P=0.040)。相反,BCL6阳性表达与较差的OS和PFS相关(P=0.026、P=0.044),EBER阴性也与较差的OS和PFS相关(P=0.013、P=0.047)。多因素分析表明EBER阴性是OS和PFS独立不良预后因素(P=0.001、P=0.003)。结论:CXCL13阳性预示nTFHL-AI患者预后良好,而BCL6阳性和EBER阴性与患者预后不良相关,并且EBER阴性是患者预后的独立危险因素。

血清中IL-33在1型糖尿病患儿中的表达情况及其与部分Th1/Th2细胞因子的相关性研究

目的 检测1型糖尿病患儿血清中白细胞介素33(IL-33)的表达水平,研究其与部分Ⅰ型T辅助细胞/Ⅱ型T辅助细胞(Th1/Th2)细胞因子的相关性。方法 选取2020年3月至2022年3月在秦皇岛市妇幼保健院内分泌科接受治疗的125例1型糖尿病患儿为研究对象,将其纳入1型糖尿病患儿组,另选取120例同期健康体检儿童作为对照组。两组研究对象血清IL-33、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素10(IL-10)表达水平通过酶联免疫吸附(ELISA)法检测;比较两组研究对象TNF-α/IL-4、TNF-α/IL-10、IL-2/IL-4、IL-2/IL-10的比值;Pearson相关性分析患儿血清IL-33的表达水平与部分Th1/Th2细胞因子平衡的相关性;采用logistic回归分析患儿发生1型糖尿病的影响因素。结果 与对照组相比,1型糖尿病患儿组总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、空腹血糖(FBG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平均升高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平降低(P<0.05)。与对照组相比,1型糖尿病患儿组IL-33、IL-4、IL-10表达水平降低,TNF-α、IL-2表达水平及TNF-α/IL-4、TNF-α/IL-10、IL-2/IL-4、IL-2/IL-10值升高(P<0.05)。Pearson相关性分析结果发现,1型糖尿病患儿血清IL-33表达水平与TNF-α/IL-4、TNF-α/IL-10、IL-2/IL-4、IL-2/IL-10呈负相关(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,IL-33表达水平(OR=0.725,95%CI:0.571~0.921,P=0.008)、IL-4表达水平(OR=0.694,95%CI:0.533~0.904,P=0.007)、IL-10表达水平(OR=0.715,95%CI:0.559~0.915,P=0.008)是患儿发生1型糖尿病的保护因素,FBG水平(OR=1.445,95%CI:1.116~1.872,P=0.005)、TNF-α表达水平(OR=1.463,95%CI:1.145~1.869,P=0.002)、IL-2表达水平(OR=2.007,95%CI:1.322~3.047,P=0.001)是患儿发生1型糖尿病的危险因素。结论 血清IL-33水平与部分Th1/Th2细胞因子平衡状态具有相关性,且IL-33、IL-4、IL-10、FBG、TNF-α、IL-2等表达水平是儿童发生1型糖尿病的影响因素。

淋巴结滤泡辅助T细胞淋巴瘤伴B细胞克隆性增生10例临床病理特征分析

目的探讨淋巴结滤泡辅助T细胞淋巴瘤血管免疫母细胞型(nodal follicular helper T cell lymphoma,angioimmunoblastic-type,nTFHL-AI)伴B细胞克隆性增生的临床病理学特征、免疫表型、分子特征、治疗及预后。方法收集10例nTFHL-AI伴B细胞克隆性增生患者的临床病理资料,分别行HE、免疫组化和基因重排检测,并复习相关文献。结果10例患者中男性5例,女性5例,中位年龄73岁。临床表现以全身淋巴结肿大、脾肿大及B症状为主;Ann Arbor分期:Ⅳ期8例,Ⅰ+Ⅱ期2例。实验室检查以β2微球蛋白和乳酸脱氢酶(LDH)升高,血红蛋白、红细胞和血小板减少为主,血浆EBV核酸定量阳性8例。镜下均可见典型结节状聚集或散在的透明细胞、分枝状高内皮血管及增生杂乱“风吹”状的滤泡树突网。肿瘤细胞背景中嗜酸性粒细胞浸润0~5个/HPF 7例,5~10个/HPF 2例,>50个/HPF 1例。浆细胞含量≤5%6例,浆细胞含量10%和20%各1例,浆细胞含量较多(30%)2例。组织细胞明显增生7例。见RS样大细胞1例。背景中含大量B细胞5例,含少量B细胞5例。10例患者均表达T细胞标志物,滤泡辅助性T细胞标志物CD10、BCL6、CXCL13和PD-1同时阳性6例,BCL6、CXCL13和PD-1同时阳性10例。EBER原位杂交阳性8例。10例患者均检测到TCR基因重排和IG基因重排阳性。所有患者诊断后均行化疗,其中3例疾病进展死亡。结论伴B细胞克隆性增生nTFHL-AI中,B细胞的克隆性增生与EBV是否感染及感染细胞的数量无关,同时浆细胞增生提示预后不良。

骨形态构建蛋白2型受体下调单核细胞趋化蛋白1/CC类趋化因子受体2通路对哮喘小鼠气道炎症和Th1/Th2平衡的影响

目的探究骨形态构建蛋白2型受体(BMPR2)对小鼠哮喘模型气道炎症和Th1/Th2平衡的影响及其机制。方法于2021年9月至2022年11月选用24只C57BL/6小鼠尾静脉注射BMPR2腺病毒,随后卵清蛋白(OVA)致敏和激发建立哮喘小鼠模型;采用随机数字表法分为对照组(生理盐水替代OVA造模)、OVA模型组(OVA诱导小鼠哮喘模型)、OVA+载体(Vector)组(空载慢病毒处理的OVA哮喘模型小鼠)、OVA+BMPR2组(BMPR2过表达慢病毒处理的OVA哮喘模型小鼠),每组6只。收集支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织。免疫组织化学检测肺组织BMPR2表达水平;苏木精-伊红染色观察肺组织病理学改变;瑞氏染色后计数BALF中各类炎症细胞数目;酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测BALF中白细胞介素(IL)-4,IL-5和IL-13炎症因子水平;蛋白质印迹法检测肺组织和气道上皮细胞16HBE中BMPR2、单核细胞趋化蛋白-1(MCP1)及其受体CC类趋化因子受体2(CCR2)蛋白表达水平。免疫共沉淀实验检测BMPR2与MCP1相互作用。结果与对照组相比,OVA模型组肺组织BMPR2(0.36±0.05比1.04±0.04)显著降低(P<0.01);小鼠肺泡破坏程度严重,肺组织有大量的淋巴细胞浸润;BALF中炎症细胞总数[(93.25±9.32)×10^(4)个/毫升比(4.79±0.41)×10^(4)个/毫升,P<0.001]、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和淋巴细胞均升高;Th1相关炎症因子γ干扰素(IFN-γ)水平降低,Th2相关炎症因子IL-4,IL-5和IL-13水平升高。过表达BMPR2可降低肺泡破坏程度和淋巴细胞浸润程度。与OVA+Vector组相比,OVA+BMPR2组BALF中炎症细胞总数、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和淋巴细胞均降低;ELISA结果表明,OVA+BMPR2组BALF中IFN-γ水平升高,IL-4,IL-5和IL-13水平降低,提示过表达BMPR2可上调Th1百分比,下调Th2细胞百分比。进一步研究表明,BMPR2过表达显著下调了MCP1及其受体CCR2的表达水平,且BMPR2与MCP1存在相互作用。结论BMPR2可通过下调MCP1/CCR2通路降低哮喘小鼠气道炎症,并调节Th1/Th2平衡。

miR-487a通过靶向调控TIA1对胃癌肿瘤相关巨噬细胞M2型极化的抑制作用

目的:探讨微小RNA(miR)-487a对胃癌肿瘤相关巨噬细胞(TAMs) M2型极化的抑制作用,并阐明其对胃癌AGS细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:分离和培养原发性胃癌患者胃癌组织TAMs及癌旁组织来源的正常巨噬细胞(NTMs),体外诱导人单核细胞THP-1分化为TAMs,将分化得到的M0、M1和M2型巨噬细胞经条件培养基(CM)刺激培养24 h,分别获取TAMs、M1-TAMs和M2-TAMs。转染TAMs,分为空白组、 inhibitor-NC组、 miR-487a inhibitor组、 miR-487a inhibitor+si-NC组和miR-487ainhibitor+si-TIA1组,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法验证转染效率。将M2-TAMs与AGS细胞共培养,分为AGS组、AGS+inhibitor-NC组、AGS+miR-487ainhibitor组、AGS+miR-487ainhibitor+si-NC组和AGS+miR-487ainhibitor+si-TIA1组,RT-qPCR法检测胃癌组织TAMs和癌旁组织NTMs及各组TAMs中miR-487a和T淋巴细胞胞浆内抗原-1(TIA1) mRNA表达水平,Western blotting法检测胃癌组织TAMs和癌旁组织NTMs及各组TAMs中TIA1蛋白表达水平,流式细胞术检测各组TAMs中CD206和CD163水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组TAMs培养上清中白细胞介素10(IL-10)、转化生长因子β(TGF-β)、血管内皮生长因子A(VEGF-A)和精氨酸酶1(Arg-1)水平,CCK-8法检测各组AGS细胞增殖活性,细胞划痕实验检测各组AGS细胞迁移率,Transwell实验检测各组AGS细胞侵袭细胞数。结果:RT-qPCR法,与癌旁组织NTMs比较,胃癌组织TAMs中miR-487a表达水平明显升高(P<0.01),TIA1 mRNA表达水平明显降低(P<0.01);与TAMs比较,M1-TAMs中miR-487a表达水平明显降低(P<0.01),TIA1 mRNA表达水平明显升高(P<0.01);M2-TAMs中miR-487a表达水平明显升高(P<0.01),TIA1 mRNA表达水平明显降低(P<0.01);转染后,与空白组和inhibitor-NC组比较,miR-487a inhibitor组细胞中miR-487a表达水平明显降低(P<0.01),提示细胞转染成功。Western blotting法,与癌旁组织NTMs比较,胃癌组织TAMs中TIA1蛋白表达水平明显降低(P<0.01);与TAMs比较,M1-TAMs中TIA1蛋白表达水平明显升高(P<0.01),M2-TAMs中TIA1蛋白表达水平明显降低(P<0.01);共转染后,与inhibitor-NC组比较,miR-487a inhibitor组细胞中TIA1蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与miR-487a inhibitor+si-NC组比较,miR-487a inhibitor+si-TIA1组细胞中TIA1蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。流式细胞术,与空白组和inhibitor-NC组比较,miR-487a inhibitor组细胞中CD206和CD163水平明显降低(P<0.01);共转染后,与inhibitor-NC组比较,miR-487a inhibitor组细胞中CD206和CD163水平均明显降低(P<0.01);与miR-487a inhibitor+si-NC组比较,miR-487a inhibitor+si-TIA1组细胞中CD206和CD163水平均明显升高(P<0.01)。ELISA法,与空白组和inhibitor-NC组比较,miR-487a inhibitor组TAMs细胞培养上清中IL-10、TGF-β、VEGF-A和Arg-1水平均明显降低(P<0.01);共转染后,与inhibitor-NC组比较,miR-487a inhibitor组TAMs细胞培养上清中IL-10、TGF-β、VEGF-A和Arg-1水平均明显降低(P<0.01);与miR-487a inhibitor+si-NC组比较,miR-487a inhibitor+si-TIA1组TAMs细胞培养上清中IL-10、TGF-β、VEGF-A和Arg-1水平均明显升高(P<0.01)。CCK-8法,与AGS组比较,AGS+inhibitor-NC组细胞增殖活性明显升高(P<0.01);与AGS+inhibitor-NC组比较,AGS+miR-487a inhibitor组细胞增殖活性明显降低(P<0.01);与AGS+miR-487a inhibitor+si-NC组比较,AGS+miR-487a inhibitor+si-TIA1组细胞增殖活性明显升高(P<0.01)。细胞划痕实验,与AGS组比较,AGS+inhibitor-NC组AGS细胞迁移率明显升高(P<0.05);与AGS+inhibitor-NC组比较,AGS+miR-487a inhibitor组AGS细胞迁移率明显降低(P<0.01);与AGS+miR-487a inhibitor+si-NC组比较,AGS+miR-487a inhibitor+si-TIA1组AGS细胞迁移率明显升高(P<0.05)。Transwell实验,与AGS组比较,AGS+inhibitorNC组AGS细胞侵袭细胞数明显升高(P<0.01);与AGS+inhibitor-NC组比较,AGS+miR-487a inhibitor组AGS细胞侵袭细胞数明显降低(P<0.01);与AGS+miR-487a inhibitor+si-NC组比较,AGS+miR-487a inhibitor+si-TIA1组AGS细胞侵袭细胞数明显升高(P<0.01)。结论:沉默miR-487a表达可通过靶向上调TIA1抑制胃癌肿瘤相关巨噬细胞M2型极化,并抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭。

辅助性T细胞1/辅助性T细胞2标志性细胞因子与晚期肺腺癌化疗近远期疗效的关联性分析

目的分析辅助性T细胞(TH)1/TH2标志性细胞因子与晚期肺腺癌化疗近远期疗效的关联性。方法选取2021年1月至2023年12月江苏省徐州市中医院收治的82例晚期肺腺癌患者为研究对象,均给予培美曲塞+顺铂或卡铂治疗,21 d为1个周期,连续治疗3个周期。比较不同近期临床疗效者化疗前及化疗3个周期后血清γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-10变化及不良反应发生情况,并记录化疗后2年生存与死亡者化疗3个周期后血清IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10差异。结果82例晚期肺腺癌患者均完成3个周期的化疗,其中完全缓解(CR)1例,部分缓解(PR)34例,疾病稳定(SD)28例,疾病进展(PD)19例,晚期肺腺癌患者化疗3个周期后血清IFN-γ、IL-2均高于本组化疗前,血清IL-4、IL-10均低于本组化疗前,差异有统计学意义(P<0.05);CR+PR患者化疗后血清IFN-γ、IL-2高于SD+PD者,差异有统计学意义(P<0.05),血清IL-4、IL-10低于SD+PD者,差异有统计学意义(P<0.05)。CR+PR患者与SD+PD患者的化疗期间不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。42例获得随访终点的晚期肺腺癌患者中死亡8例(19.05%),生存34例(80.95%),化疗后2年死亡者化疗3个周期血清IFN-γ、IL-2低于生存者,差异有统计学意义(P<0.05),血清IL-4、IL-10高于生存者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TH1/TH2平衡不仅与晚期肺腺癌患者化疗近期疗效有关,也与患者远期预后生存情况有关。

成人急性髓性白血病患者血清Th1/Th2型细胞因子、PCT、CRP检测及其临床意义

目的 检测成人急性髓性白血病患者血清辅助性T细胞1/T细胞2(Th1/Th2)型细胞因子、降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)水平并探讨其临床意义。方法 选取2021年1月至2023年12月曲靖市第一人民医院收治的98例成人急性髓性白血病感染患者为研究组,按照不同感染程度分为17例脓毒症组与81普通感染组;同期选取98例成人急性髓性白血病无感染患者为非感染组;同期选择98例门诊健康体检者作为对照组。比较研究组、非感染组及对照组的血清白介素-2、干扰素-γ、白介素-4、白介素-10、PCT、CRP水平,比较脓毒症组与普通感染组患者的血清白介素-2、干扰素-γ、白介素-4、白介素-10、PCT、CRP水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析以上指标对成人急性髓性白血病感染的诊断价值。结果 研究组患者的血清白介素-2、干扰素-γ、PCT、CRP水平分别为(30.27±3.02) pg/mL、(280.16±31.59) pg/mL、(2.57±0.52) ng/mL、(89.42±10.36) mg/L,依次高于非感染组的(13.29±1.42) pg/mL、(229.47±23.15) pg/mL、(0.43±0.06) ng/mL、(13.28±1.54) mg/L和对照组的(6.09±1.26) pg/mL、(150.29±16.58) pg/mL、(0.21±0.03) ng/mL、(7.04±1.40) mg/L,差异均有统计学意义(P<0.05);研究组患者的血清白介素-4、白介素-10分别为(32.39±3.75) pg/m L、(2.96±0.45) pg/m L,依次低于非感染组的(51.03±7.28) pg/m L、(4.21±0.72) pg/m L和对照组的(78.29±10.45) pg/m L、(6.50±0.51) pg/m L,差异均有统计学意义(P<0.05);脓毒症组患者的血清白介素-2、干扰素-γ、PCT、CRP水平分别为(45.93±8.15) pg/m L、(340.17±40.21) pg/m L、(6.95±1.28) ng/m L、(134.73±12.81) mg/L,明显高于普通感染组的(26.98±2.57) pg/mL、(267.57±29.78) pg/mL、(1.65±0.36) ng/mL、(79.91±9.85) mg/L,差异均有统计学意义(P<0.05);脓毒症组患者的血清白介素-4、白介素-10水平分别为(18.87±1.65) pg/mL、(1.29±0.31) pg/mL,明显低于普通感染组的(35.88±4.19) pg/mL、(3.31±0.48) pg/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);ROC曲线分析结果显示,白介素-2、干扰素-γ、白介素-4、白介素-10、PCT、CRP单独及联合检测对成人急性髓性白血病感染诊断的曲线下面积(AUC)分别为0.817、0.789、0.798、0.827、0.786、0.766、0.962,联合检测的AUC大于各指标单独检测。结论 成人急性白血病感染患者Th1细胞因子、PCT及CRP水平明显上升,Th2细胞因子水平明显下降,临床通过检测血清Th1/Th2细胞因子、PCT、CRP水平能够辅助成人急性髓性白血病感染的早期诊断,值得推广。

过表达M2型肿瘤相关巨噬细胞TIA1基因通过调控PI3K/AKT信号通路抑制胃癌细胞侵袭和迁移

目的:探讨过表达M2型肿瘤相关巨噬细胞(M2-TAMs)T淋巴细胞内抗原1(TIA1)基因对胃癌BGC-823细胞侵袭和迁移的影响及其机制。方法:从胃癌组织中提取原代TAMs,采用IL-4和IL-13刺激TAMs诱导分化成M2-TAMs,再将TIA1基因过表达质粒(oe-TIA1)及其空载质粒(Vector)转染至M2-TAMs中,采用qRT-PCR和Western blot检测细胞中TIA1 mRNA和蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞中CD206和CD163表达水平;ELISA检测细胞培养上清液中IL-10、TGF-β、VEGF-A和Arg-1水平。通过Transwell共培养体系将转染后的M2-TAMs与胃癌BGC-823细胞共培养,并联用PI3K激动剂740Y-P进行干预,采用划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;Western blot检测细胞中PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、MMP-2和MMP-9等蛋白表达水平。结果:①与原代TAMs比较,M2-TAMs中CD206和CD163表达水平及细胞培养上清液中IL-10、TGF-β、VEGF-A和Arg-1水平均显著升高(P<0.05),而TIA1 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。TIA1基因过表达可显著降低M2-TAMs中CD206和CD163表达水平及细胞培养上清液中IL-10、TGF-β、VEGF-A和Arg-1水平(P<0.05)。②M2-TAMs中过表达TIA1基因可显著降低BGC-823细胞迁移和侵袭能力及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、MMP-2和MMP-9等蛋白表达水平(P<0.05)。③740Y-P可显著逆转M2-TAMs中过表达TIA1基因对BGC-823细胞迁移、侵袭及PI3K/AKT信号通路的抑制作用。结论:过表达M2-TAMs中TIA1基因表达可通过阻断PI3K/AKT信号通路影响胃癌细胞侵袭和迁移。