猪δ冠状病毒辅助蛋白研究进展

猪δ冠状病毒(PDCoV)是一种新发现的猪肠道冠状病毒,可引起新生仔猪的腹泻、呕吐、脱水、死亡,而且具有跨种感染潜能,给养猪业和公共卫生构成了巨大威胁。冠状病毒的辅助蛋白(accessory protein)是一类功能特殊的蛋白,不同属甚至同属不同种的冠状病毒编码的辅助蛋白数量、同源性均存在较大差异,具有属或种特异性。虽然辅助蛋白是冠状病毒增殖非必需的,但在调控宿主天然免疫、病毒复制与致病性中发挥重要作用。目前,已证实PDCoV至少编码3个辅助蛋白,而且近年来在PDCoV辅助蛋白的功能研究方面取得了显著进展。本文简要介绍了PDCoV辅助蛋白的鉴定及其在免疫调控和致病性中的作用,并对今后的研究进行了展望。

苏云金杆菌辅助蛋白P20对杀虫晶体蛋白Cry1Ab表达的影响

苏云金杆菌 (Bacillusthuringiensis,简称Bt)杀虫晶体蛋白Cry1Ab因其C 半端缺少了一段含 4个半胱氨酸的氨基酸序列而导致蛋白的不稳定 ,报道苏云金杆菌辅助蛋白P2 0帮助Cry1Ab蛋白的表达及晶体的形成。利用穿梭载体pHT310 1构建 3个表达质粒 ,即pT1B、pP1B和pDP1B ,3个质粒都含有cry1Ab基因 ,不同在于pT1B没有p2 0基因 ,pP1B含有p2 0全基因 ,而pDP1B不仅含有p2 0全基因 ,且在p2 0基因前插入cry1A(c)启动子。分别将这 3个表达质粒经电转化到苏云金杆菌晶体缺陷型菌株CryB中 ,获得转化菌株T1B、P1B和DP1B。Westernblot表明cry1Ab基因在这 3株菌中均表达了 130kD的蛋白 ,部分降解为大约 6 0kD的蛋白。蛋白定量分析显示 ,3株菌 130kD蛋白量的比为 1∶1.4∶1 5 ,降解后的 6 0kD蛋白量的比为 1∶1.1∶1.6 ,Cry1Ab蛋白总量的比为 1∶1∶2∶1 6。镜检发现 ,Cry1Ab在 3株菌中都形成典型的菱形晶体 ,其晶体大小为T1B <P1B <DP1B。生物测定结果显示 ,3个菌株对棉铃虫 (Helicoverpaarmigera)均具有明显的杀虫活性 ,三者的LC50 差异不显著。研究表明 ,P2 0对cry1Ab基因的表达和晶体形成均有帮助 ,P2

脑泰方对脑缺血/再灌注大鼠海马区Nrf2、HO-1和膜铁转运辅助蛋白表达的影响

目的研究益气活血中药脑泰方通过Keap1-Nrf2/ARE信号通路对脑缺血/再灌注后大鼠海马区血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)和膜铁转运辅助蛋白(hephaestin,Heph)表达的影响。方法将80只♂大鼠随机分为假手术组、模型组、脑泰方低剂量组(4.5 g·kg^(-1))、中剂量组(9 g·kg^(-1))和高剂量组(18 g·kg^(-1))。各组大鼠术前连续灌胃给药3 d,每日1次,再行大脑中动脉线栓法脑缺血/再灌注模型制备术,术后连续灌胃给药2 d。术后72 h采用Zea Longa神经功能学评分标准记录大鼠行为活动,TTC染色法测定脑梗死体积,real-time PCR检测大鼠海马区Nrf2、HO-1、Heph的mRNA表达,Western blot检测Nrf2、HO-1、Heph的蛋白表达。结果与模型组比较,脑泰方中、高剂量组的神经行为学评分明显下降(P<0.01),各脑泰方组脑梗死体积明显缩小(P<0.01);HO-1 mRNA表达均增加(P<0.05)。脑泰方中、高剂量组Heph mRNA表达增加(P<0.05);Nrf2和Heph蛋白表达明显增加(P<0.05,P<0.01)。各脑泰方组HO-1蛋白表达增高(P<0.01)。结论脑泰方能减轻脑缺血/再灌注损伤,其机制可能是通过激活Keap1-Nrf2/ARE信号通路,促进HO-1生成,上调Heph的表达,减少脑铁沉积,发挥脑缺血/再灌注后神经元的保护作用。

苏云金杆菌辅助蛋白P20对营养期杀虫蛋白Vip3A表达的影响

为检测苏云金杆菌辅助蛋白P20对Vip3A表达和杀虫活性的影响,将p20基因与vip3A基因相连构建了重组质粒pHVP20,然后电激转化至Bt中进行了共表达,以仅携带vip3A基因的质粒pHPT3作为对照质粒。Westernblot结果显示,当vip3A基因和p20基因在Bt无晶体缺陷株CryB中共表达时,Vip3A蛋白的最大表达量约是其在CryB(pHPT3)菌株中单独表达的1.5倍。生物测定结果表明,CryB(pHVP20)和CryB(pHPT3)菌株对初孵斜纹夜蛾幼虫的LC50值分别为48.79μg/mL和78.00μg/mL,这说明P20蛋白可以促进vip3A基因在Bt中的表达,但对提高Vip3A蛋白的杀虫毒力没有显著性帮助。

膜铁转运辅助蛋白研究进展

膜铁转运辅助蛋白(Hp)是研究性连锁遗传贫血(sla)小鼠时发现的一种新的铁转运相关蛋白．它与铜蓝蛋白(Cp)属同一家族．与Cp不同,Hp是具有一个跨膜结构的完整膜蛋白,主要存在于小肠绒毛的上皮细胞．作为亚铁氧化酶,Hp在铁从肠上皮细胞转运到血液的过程是必需的,该基因突变将造成机体严重的铁缺乏．脑内Hp的发现,为脑铁稳态的调控机制提供了新的认识．文中综述了Hp的发现、结构、表达、调控及其在脑铁代谢中的作用．

苏云金芽孢杆菌辅助蛋白的研究进展

杀虫晶体蛋白是苏云金芽孢杆菌所产生的主要杀虫成分 ,在其超量表达与晶体形成过程中有时需要辅助蛋白的参与。在这些辅助蛋白中有的能够防止正在翻译过程中的杀虫晶体蛋白被菌体内的蛋白酶降解 ,起着分子伴侣的作用 ;有的在晶体形成过程中起着脚手架的作用。本文对辅助蛋白 P2 0、P19以及ORF1、ORF2等在杀虫晶体蛋白表达及晶体形成过程中的作用作了综述。

谷氨酸钠、γ-氨基丁酸注入黑质对大鼠尾壳核二价金属离子转运体1和膜铁转运辅助蛋白表达的影响

目的探讨谷氨酸、γ-氨基丁酸(GABA)对大鼠尾壳核铁代谢的影响。方法大鼠立体定位后,向大脑黑质分别注射谷氨酸钠(MSG)和GABA,观察大鼠尾壳核铁含量,黑质多巴胺能神经元酪氨酸羟化酶(TH)的变化以及尾壳核的无铁反应元件结构的二价金属离子转运体1(DMT1-IRE)、膜铁转运辅助蛋白(HP)含量的变化。结果与对照组相比,MSG组大鼠尾壳核铁含量显著增加,GABA组与对照组相比没有显著差异;谷氨酸钠组和GABA组大鼠黑质TH免疫阳性细胞平均吸光度(AA)与对照组相比均无显著差异;与对照组相比,谷氨酸钠组大鼠尾壳核DMT1-IRE表达均显著增加,而GABA组DMT1-IRE表达有明显降低;谷氨酸钠组大鼠尾壳核HP表达显著降低,GABA组HP表达显著增高。结论黑质的谷氨酸和GABA可能通过影响尾壳核DMT1-IRE和HP的表达影响纹状体尾壳核的铁代谢。

苏云金杆菌辅助蛋白P19对杀虫晶体蛋白Cry11Aa表达的影响

苏云金杆菌以色列亚种的p19基因、cry11Aa基因和p20基因位于同一操纵子上,据推测辅助蛋白P19可能与Cry11Aa蛋白的晶体化相关。本研究利用穿梭载体pHT3101构建了两个重组质粒pHcy1和pHcy3,两质粒均携带cry11Aa基因,但后者完全缺失了cry11Aa基因上游的p19基因。将重组质粒电激转化至苏云金杆菌无晶体突变株4Q7中进行蛋白表达,SDS-PAGE结果表明在4Q7(pHcy1)和4Q7(pHcy3)中均能检测到正常表达的Cry11Aa蛋白,但单位体积培养液的Cry11Aa蛋白在辅助蛋白P19存在时的表达量明显高于其单独表达的表达量;透射电镜观察显示两菌株中的Cry11Aa蛋白形成了大小相近、形状相似的双梯形晶体;另外,生物测定结果表明重组菌株4Q7(pHcy1)和4Q7(pHcy3)对三龄致倦库蚊的杀虫活性没有显著性差异。该现象说明辅助蛋白P19的缺失对Cry11Aa蛋白的晶体形成和杀蚊活性没有影响,但P19作为分子伴侣在一定程度上帮助提高了Cry11Aa蛋白的表达水平。

内蒙古绒山羊角蛋白辅助蛋白1.1基因真核表达载体构建及基因转染

试验通过提取绒山羊皮肤总RNA,克隆角蛋白辅助蛋白1.1(keratin-associated protein 1.1,KAP1.1)基因,构建重组真核表达载体pEGFP-N3-KAP1.1,利用脂质体介导法将重组质粒转入内蒙古绒山羊体外培养的成纤维细胞中,研究该基因在真核细胞中的时空表达、亚细胞定位及表达规律。结果显示,2.0μg重组质粒和6.0μL脂质体的比例为适合本试验的最优化方案,KAP1.1基因能在内蒙古绒山羊成纤维细胞中成功表达,并在转染后48h转染率达到峰值,该基因在真核体外培养细胞中细胞核、细胞质和细胞膜上均有表达,但以细胞核表达量最强。

枸橼酸铁铵对原代培养的大鼠心肌细胞铜蓝蛋白、膜铁转运辅助蛋白和膜铁转运蛋白表达的影响

目的观察枸橼酸铁铵（FAC）对原代培养的大鼠心肌细胞铁释放相关蛋白表达的影响,探讨枸橼酸铁铵对心肌细胞铁代谢的影响机制。方法以原代培养的乳鼠心肌细胞为材料,分为对照组、20mg/L枸橼酸铁铵组、40mg/L枸橼酸铁铵组和80mg/L枸橼酸铁铵组,每组6个重复。然后检测心肌细胞存活率、搏动频率,免疫组织化学检测铜蓝蛋白（CP）、膜铁转运辅助蛋白（HP）和膜铁转运蛋白（FP1）表达的变化。结果各剂量枸橼酸铁铵对大鼠心肌细胞存活率无明显影响;心肌细胞搏动频率减慢,停止跳动的细胞数量明显增加,收缩幅度逐渐降低;随着枸橼酸铁铵浓度的增加,心肌细胞铜蓝蛋白、膜铁转运辅助蛋白和膜铁转运蛋白的表达均增加。结论枸橼酸铁铵影响大鼠心肌细胞的生理功能,IRP-IRE可能参与膜铁转运蛋白表达的调控,铜蓝蛋白、膜铁转运辅助蛋白表达的升高可能与铁处理增加细胞的氧化紧张性有关。

膜辅助蛋白在自然流产中的表达及其生物学意义

目的探讨膜辅助蛋白(MCP)在自然流产中的表达及其生物学意义。方法采用Real-time PCR和免疫印迹技术检测MCP基因的mRNA和蛋白质表达水平;采用流式细胞术检测滋养层细胞的凋亡率,Transwell小室法评估滋养层细胞的侵袭能力。结果 MCP在自然流产蜕膜组织中显著低于人工流产的蜕膜组织;抑制MCP基因表达显著增加滋养层细胞凋亡,且滋养层细胞侵袭能力显著减弱。结论 MCP在滋养层细胞凋亡中发挥重要作用,并可能由此导致自然流产的发生。

纤维素降解辅助蛋白及其作用机理研究进展

化石燃料的日渐枯竭及环境污染的日益严重使得生物质原料的资源化、能源化利用受到广泛关注。木质纤维素是地球上最丰富的可再生生物质,其通过生物转化可获得多种燃料和化学品,而纤维素难以有效糖化是木质纤维素生物转化的主要瓶颈。本文介绍了某些纤维素非降解性辅助蛋白提高纤维素酶解效率的相关研究进展,重点分析了近些年发现并研究较多的裂解性多糖单加氧酶(AA9和CBM33)、纤维二糖脱氢酶(CDH)、扩展蛋白(expansin)、膨胀素(SWOI)等几种纤维素辅助蛋白及其协助纤维素降解的机理,总结出这些辅助蛋白主要是通过促进木质素或半纤维素降解以及破坏纤维素的氢键网络和结构来协同纤维素酶催化纤维素的糖化降解。通过以上概括和评述,认为这些辅助蛋白虽然一定程度上可以促进纤维素的酶解,但其研究和应用还仅限于实验室基础研究,如何将其有效并廉价应用于木质纤维素生物转化的工业过程还面临着巨大挑战。指出相关研究工作的重点还需要从廉价而有效的蛋白筛选与构建、协同作用机理解析、过程优化与强化等方面深入开展。

微波辅助蛋白质水解效果稳定性研究

目的:考察微波辅助蛋白质水解效果的稳定性。方法:以鱼粉和豆粕为研究对象,采用微波辅助蛋白质水解-柱后衍生-紫外检测法测定氨基酸,通过比较分析一定时期内鱼粉和豆粕样品氨基酸结果的变化,研究微波辅助蛋白质水解效果的稳定性。结果:在一定时期内,采用微波辅助蛋白质水解,进口鱼粉、豆粕样品氨基酸测定结果RSD值均小于4.0%。结论:微波辅助蛋白质水解效果的稳定性好,可替代传统蛋白质酸水解方法,并为保证氨基酸检测结果的准确性提供技术支持。

鸡传染性支气管炎病毒辅助蛋白研究进展

鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis,IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)引起的高度接触性传染病,给养殖生产造成巨大的经济损失。近年来随着反向遗传操作技术的发展,国内外学者在分子生物学水平对IBV基因组结构与功能开展了深入研究,在IBV编码的结构蛋白和辅助蛋白功能研究方面取得了重要进展。文章就IBV辅助蛋白对病毒复制、病毒毒力的影响以及辅助蛋白在疾病预防方面的研究进行总结,为IBV辅助蛋白的功能研究及减毒活疫苗研发提供新的方向。

白介素1受体辅助蛋白在儿童和成人低级别胶质瘤中的作用

目的探讨白介素1受体辅助蛋白(interleukin 1 receptor accessory protein,IL-1RAP)在成人与儿童低级别胶质瘤中的表达,分析其与预后的相关性。方法应用高通量全基因分析、免疫组织化学法、qRT-PCR和Western blotting方法对20例低级别胶质瘤(成人10例,儿童10例)标本中IL-1RAP的表达进行检测。结果经高通量全基因分析、免疫组织化学、qRT-PCR和Western blotting分析证明IL-1RAP与成人比较,儿童低级别胶质瘤总阳性表达率较低,有统计学意义(100%>30%,Chi-Square=12.439,P<0.05)。结论 IL-1RAP可能在胶质瘤的发生、发展过程之中扮演重要的角色。IL-1RAP可能成为评价低级别胶质瘤预后差异的重要参考指标及潜在的药物靶点。

3个山羊品种角蛋白辅助蛋白7基因的遗传多态性分析

本研究采用PCR-SSCP方法对陕北白绒山羊、太行黑山羊及南疆绒山羊的角蛋白辅助蛋白(keratin-associated pro-teins,KAP)7基因进行遗传多态性研究。结果显示,KAP7基因在3个山羊品种中有多态性,有AA和AB 2种基因型,AA基因型均为其优势基因型。测序结果发现,KAP7基因在129bp处存在C→G的突变,突变的位置位于5′调控区。

膜辅助蛋白致宫颈癌细胞免疫逃逸机制探讨

目的:探讨膜辅助蛋白(membrane cofactor protein,MCP)与宫颈癌细胞免疫逃逸之间的关系,揭示MCP在宫颈癌发生、发展中的作用。方法:以宫颈癌细胞系ME180、宫颈癌组织和癌旁正常组织为材料,采用real-time PCR和Western blot检测MCP基因mRNA和蛋白质表达水平;利用小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)沉默MCP基因表达后,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检查宫颈癌细胞的增殖,以Transwell评估宫颈癌细胞的迁移能力。结果:MCP的表达在宫颈癌组织中明显高于其配对的癌旁正常组织,抑制MCP基因的表达能显著降低ME180细胞的增殖、迁移能力。结论:MCP在宫颈癌细胞中的高表达可能是肿瘤细胞免疫逃逸的重要机制,在宫颈癌的发生发展中发挥重要作用。

SARS冠状病毒辅助蛋白的研究进展

严重急性呼吸道综合征冠状病毒(SARS-CoV)在2002～2003年在全球范围内引起了SARS的大规模暴发。其基因组约30kb,含14个潜在的开放阅读框(ORF),其中6个ORF编码病毒复制的必需蛋白如复制酶(ORF1a和1b)和4个结构蛋白:核衣壳、刺突、膜和包膜。其余8个ORF编码SARS-CoV特有的辅助蛋白。本文主要在3个方面概述了SARS-CoV辅助蛋白的研究进展:检测感染病人辅助蛋白的抗体;辅助蛋白的表达、加工和定位;辅助蛋白对细胞功能的影响,从而揭示SARS-CoV辅助蛋白的分子和生化特征,为研究SARS-CoV为何有如此强大的致病力提供线索。

产纤维素酶辅助蛋白菌种筛选及蛋白增效作用条件研究

[目的]筛选产纤维素酶辅助蛋白的菌种,测定该辅助蛋白作用条件。[方法]从纤维素降解菌的生存环境中,寻找到产纤维素酶辅助蛋白的菌株,通过Sephadex-G75分子筛层析对产纤维素酶辅助蛋白菌株胞外培养液进行蛋白分离纯化,分析辅助蛋白的增效作用,并进一步探讨其增效作用适宜的温度及pH条件。[结果]从纤维素降解菌的生长环境中分离得到80余株菌株,经液体培养、胞外蛋白检测筛选出3株产纤维素酶辅助蛋白的菌株,分别命名为BAP1、BAP2、BAP3。经Sephadex-G75分子筛层析纯化,获得了最大增效率分别为35%,27%及47%的辅助蛋白。测定其中辅助增效作用最明显的BAP3峰2蛋白增效作用条件为温度40～60℃、pH 4.0～6.0。[结论]该研究为通过菌体诱变和培养条件优化等手段获得高效纤维素酶辅助蛋白提供了较好的原始菌株资源。