同一家系中钼辅因子缺乏症相同MOCS1基因变异不同临床表型特点分析

目的通过同一家系中两个相同MOCS1基因变异序列、却不同临床表型特点的分析,希望未来对这种相关性研究提供可靠临床资料。方法应用高通量测序技术对先证者家系行致病基因检测,回顾分析2例A型钼辅因子缺乏症(MoCD)患者的临床特点和基因变异序列。结果先证者为足月儿,无窒息史,生后喂养困难,第2天出现抽搐,MRI示双侧基底节缺氧缺血性损伤和软化灶;3个月随访神经发育评估轻度落后。其5岁姐姐生后精神运动发育描述正常,10月时因“高热”突然出现抽搐,随即出现进行性全面神经发育倒退;MRI同样提示基底节缺氧缺血性改变。故行家系5人全外显子高通量测序,先证者和患病姐姐检出MOCS1基因NM_001358530.2,c.1275delA(p.Gly426Aspfs Ter10)纯合变异,其父母和另一个健康胞姐均为杂合变异。该变异位点未被报道。结论先证者和其患病胞姐具有相同MOCS1基因的突变序列,但二者临床过程并不相同。推测可能先证者亚硫酸盐氧化酶活性尚有残余功能,故临床表型温和。

毕赤酵母甲酸脱氢酶辅因子特异性改造及应用

甲酸脱氢酶(formate dehydrogenase,FDH,EC 1.2.1.2)在发酵工业中常被应用于酶法辅因子再生系统。为了改造巴斯德毕赤酵母甲酸脱氢酶(FDH from Komagataella phaffii,Kph FDH)的辅因子特异性并应用于体外NADPH辅因子再生系统,研究基于多序列比对和文献调研的结果,确定了D195、Y196为突变位点,构建了16个突变体,并表征了野生型和突变体的比酶活力和酶促反应动力学。得到最优的NADP+特异性突变体为Kph FDH D195Q/Y196R,其对NADP+的催化效率(k_(cat)/K_(m))为1.967 L/(mmol·s),催化特异性比率[(k_(cat)/K_(m)NADP+)/(k_(cat)/K_(m)NAD+)]为36.426;以NADP+作为辅因子时,对甲酸的催化效率(k_(cat)/K_(m))为0.020 L/(mmol·s)。最后成功将该突变体应用于苯丙酮酸还原胺化反应中的NADPH再生,200 min内几乎完全反应。该研究填补了毕赤酵母FDH辅因子特异性改造方面的研究空白,为发酵工业中NADPH辅因子再生系统应用提供了一种工具酶,同时也为进一步改造该酶的辅因子特异性提供了一种出发突变体。

肥胖患者胰岛素抵抗和血浆第八辅因子水平的相关性研究

目的研究肥胖病人与正常人之间体脂参数、代谢异常、胰岛素抵抗的程度及血浆第八辅因子(vWF)水平的变化,探讨肥胖病人的代谢特点、胰岛素抵抗与血管内皮损伤的关系。方法对59例肥胖患者和49例正常人分别进行血压、体脂参数、血糖、血脂谱、血浆vWF水平的测定;采用稳定模式评估法评价胰岛素抵抗的程度。结果肥胖组腰围、臀围、腰臀围比、血压、胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白水平均高于对照组,高密度脂蛋白低于对照组,空腹胰岛素和HOMA-IR明显高于对照组,vWF水平高于对照。结论肥胖病人存在明显体脂分布异常、胰岛素抵抗、血压改变及代谢紊乱,且肥胖病人有血管内皮损伤存在,而血管内皮损伤可能是多种因素综合作用结果。

天然烟酰胺辅因子再生体系及其人工类似物研究进展

氧化还原酶可以催化具有特定区域选择性、化学选择性、立体选择性的反应,反应条件温和且催化效率高,因此在有机化学和制药领域发挥着日益重要的作用。绝大多数氧化还原酶依赖烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NAD(H)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸NADP(H)为酶促反应提供氧化还原当量。NAD(H)/NADP(H)由于价格昂贵、稳定性差导致无法化学计量投入。经过几十年研究,形成了4种经典的NAD(H)/NADP(H)再生方法:酶法、化学法、电化学法和光化学法,与此同时,一系列稳定性好、活性高且廉价的人工烟酰胺辅因子m NAD(H)s尤其是1,4-二氢吡啶类烟酰胺辅因子的开发和利用为NAD(H)/NADP(H)工业化运用提供了新的思路。

血管性血友病因子瑞斯托霉素辅因子活性与脑梗死的相关性研究

[摘要]目的探讨血管性血友病因子瑞斯托霉素辅因子活性（Von Willebrand factor ristocetin cofactor activity, VWF ： Rco）在评估脑梗死（cerebral infarction，CI）患者病情及预后两年恢复情况中的临床价值。方法收集2014—07～2015—02我院收治的61例脑梗死患者及104例正常人血浆分别作为病例组和对照组，检测其VWF：Rco水平，根据改良Barthel指数评分和改良Rankin评分细则随访患者预后两年的日常生活活动能力和神经功能恢复情况，并对其资料进行分组和统计学分析。结果病例组VWF：Rco水平显著高于对照组（P〈0．0001），并与VWF抗原呈正相关（r=0．996，P〈0．0001）；患者不同年龄段VWF：Rco水平有差异，并随年龄增长而升高；病例组的血浆超长VWF水平增多；患者初诊VWF：Rco水平与超敏C-反应蛋白（hs—CRP）呈正相关（r=0．382，P=0．002），与预后两年的日常生活活动能力呈负相关（r=0．293，P=0．022），与神经功能恢复情况呈正相关（r=0．269，P=0．036），入院VWF：Rco水平越高，预后恢复越差。结论初诊脑梗死患者显著升高的VWF：Rco水平与病情严重程度相关。VWF：Rco可作为评估脑梗死预后的标志物，初诊VWF：Rco水平越高，患者预后越差。

辅因子再生研究进展

许多有价值的酶催化反应都需要辅因子的参与。因为辅因子价格昂贵,所以,在酶催化工业应用中,需要实现辅因子原位再生。经过几十年研究,出现了酶法、化学法、电化学法、光化学法和基因工程法等手段实现烟酰胺类辅因子(NAD(P)H)、ATP、糖核苷酸等辅因子再生。对辅因子再生研究中取得的进展以及存在的问题进行讨论。

调控辅因子水平减少酿酒酵母积累副产物乙醇

C4二元羧酸广泛用于食品、医药和化学等行业,市场潜在需求量巨大。酿酒酵母被认为是发酵生产C4二元羧酸的潜在最适微生物,却产生大量的乙醇,导致了碳流的损失。通过敲除硫胺素合成途径中的调控基因THI2,阻断了硫胺素的合成,使得副产物乙醇产量从5.27±0.23 g/L下降到0.53±0.12 g/L,但影响了葡萄糖消耗和菌体的生长。在此基础上,通过外源添加0.04μmol/L的硫胺素二磷酸,促进了葡萄糖的消耗和菌体生长;进一步通过外源添加1 000μg/L的NAD+,使得葡萄糖的消耗量和菌体的生长分别提高了48.6%和47.2%,而乙醇产量仅增加了0.56 g/L。通过调控辅因子水平(硫胺素和NAD+)可以有效减少副产物乙醇的积累,为解决利用酿酒酵母生产C4二元羧酸中副产物乙醇积累这一普遍性问题提供了一个新的策略。

瘤胃酸中毒与NADH辅因子的营养调控

瘤胃酸中毒是目前困扰规模化肉牛养殖场的一大难题。探讨了瘤胃内有机酸代谢与瘤胃酸中毒发生机制的关系;综述了瘤胃酸中毒营养调控措施的研究进展;提出采用NADH辅因子调控手段对瘤胃微生物有机酸代谢进行调控,进而防止瘤胃酸中毒发生。

基于辅因子化学本质及功能的分类与讨论

辅因子是蛋白质或酶结构的重要组成部分,在许多酶的功能中发挥重要乃至关键作用。在科研和教学中,现有的辅因子概念及其分类系统不够清晰准确。本文从化学本质和功能上将辅因子分为催化型、载体型和底物型3类,并以若干典型的辅因子为例讨论辅因子的特异性及再生性等问题。

钼铁蛋白铁钼辅因子的有机组分对其功能的影响

棕色固氮菌(Azotobacter vinelandii)固氮酶的钼铁蛋白经邻菲啰啉在厌氧或有氧环境中处理后,变为 P-cluster 单一缺失或 P-cluster 和 FeMoco 同时缺失的失活钼铁蛋白。含柠檬酸盐或高柠檬酸盐的重组液都使这两种失活蛋白能恢复固氮酶重组的 H^+和 C_2H_2还原活性,活性恢复程度随反映钼铁蛋白中金属原子簇含量变化的圆二色和磁圆二色谱及金属含量的恢复程度的提高而提高,但它们固 N_2能力的恢复程度则不相同:P-cluster 单一缺失的蛋白用两种重组液重组后均可恢复其固 N_2能力,而 P-cluster 和 FeMoco 同时缺失的蛋白,只有用含高柠檬酸盐的重组液重组才恢复其固 N_2能力,表明含不同有机组分的重组液所组装的 P-cluster 均与天然状态相同,只有含高柠檬酸盐的重组液所组装的 FeMoco 才与天然状态相同,从而证明高柠檬酸盐是 FeMoco 的必需的有机组分。

烟酰胺类辅因子的保留和再生研究进展

烟酰胺类辅因子是许多脱氢酶和还原酶的重要辅酶 ,其保留和再生利用是酶工程领域的重要研究课题。目前的再生方法主要有化学法、电化学法、光化学法和酶法。由于反应条件的限制 ,纯化学法已很少研究。辅酶 的电化学再生已比较成功 ,但辅酶 的电化学再生由于立体特异性和二聚体生成等问题未解决。光化学法再生系统需要厌氧条件 ,成分较复杂。酶法再生体系较为简单 ,单酶再生系统在产物分离等方面更有利。与高聚物结合是保留辅酶 的有效方法 ,但不适于辅酶 。用带电滤膜构建生物反应器可以有效地保留辅酶 。

发色底物法及酶联凝固法测定肝素辅因子Ⅱ活性

70年代初,Briginshaw发现一种有别于抗凝血酶Ⅲ（antithrombin Ⅲ,AT-Ⅲ）的肝素依赖性凝血酶抑制蛋白。1981年由Tollefsen首次将其分离提纯并命名为肝素辅因子Ⅱ（heparin cofactor cofactor Ⅱ,HC-Ⅱ）。目前,国外已应用火箭电泳及发色底物法（chromogenic peptide substrate assay,CPSA）对其检测。本文应用国产发色底物S2238及酶联凝固法（enzyme-linked coagula-tion assay,ELCA）对肝素辅因子Ⅱ活性（HC-Ⅱ:a）进行了检测。

蝶呤型钼辅因子生物合成、运输及组装——潜在的药物靶标

钼辅因子作为氧化还原反应中的重要分子,参与硫、氮、碳的氧化还原代谢.钼辅因子主要分为两类:以铁硫簇为基础的铁钼辅因子和以亚钼蝶呤为基础的钼辅因子.钼-二-亚钼蝶呤-鸟苷二核苷钼辅因子(Mo-bis-MGD)是蝶呤型钼辅因子的重要成员之一,是硝酸盐还原酶的重要辅因子.膜结合硝酸盐还原酶介导的硝酸盐还原为细菌提供了氮源和能源,与分枝杆菌的持留性感染相关.此外,膜结合硝酸盐还原酶能显著增加卡介苗在免疫缺陷鼠中的毒性.人与细菌中蝶呤型钼辅因子生物合成、运输和组装的差异提示,Mo-bis-MGD型钼辅因子的生物合成途径很可能作为新型药物靶标,有益于抗病原菌,尤其有利于抗多重耐药结核分枝杆菌新药的开发研究.

系统性红斑狼疮和类风湿关节炎患者血浆抗凝血酶-Ⅲ和肝素辅因子Ⅱ的水平的变化及意义

目的:探讨系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)和类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者抗凝血酶-Ⅲ (antithrombin Ⅲ AT-Ⅲ )和肝素辅因子Ⅱ(Heparin cofactor Ⅱ)HC Ⅱ的水平变化。方法:采用发色底物法和双抗体夹心酶联免疫吸附实验(ELISA)法对观察组和正常对照组患者的血浆AT-Ⅲ和HCⅡ水平进行测定。结果:观察组SLE患者血浆AT-Ⅲ和HC Ⅱ水平与对照组AT-Ⅲ和HC Ⅱ水平比较均降低,具有统计学意义(P<0.05);观察组RA组血浆AT-Ⅲ和HC Ⅱ水平与对照组AT-Ⅲ和HC Ⅱ水平比较均降低,具有统计学意义(P<0.05)。结论:SLE和RA患者可能存在着凝血-抗凝血系统异常,AT-Ⅲ和HC Ⅱ水平可能是影响抗凝血作用的主要因素。

肝素辅因子Ⅱ的研究进展

肝素辅因子Ⅱ(heparin cofactor Ⅱ,HCⅡ)是一种存在于血浆中的单链抗凝血酶糖蛋白,其作用机制是通过诱导凝血酶与之行成1:1稳定复合物,从而使凝血酶失去蛋白水解酶活性,在适量的硫酸皮肤素参与下,这种反应可以加快1000倍。HCⅡ不同于抗凝血酶Ⅲ,它主要是在血管系统外,在特殊的病理环境下发挥对凝血酶的调节作用。近来研究发现,HCⅡ与血管损伤后血栓形成及动脉粥样硬化的病理进程密切相关。HCⅡ可以被中性粒细胞释放的弹性蛋白酶水解,生成的N端多肽片段对中性粒细胞和单核细胞具有趋化作用,从而参与炎症反应。

辅因子再生在生物转化反应中的应用

依赖辅因子的酶可以催化复杂的合成反应。由于生物转化过程辅因子使用成本高,故需进行原位再生。目前可使用全酶或整个微生物细胞进行几种辅因子如NAD(P)H、ATP、糖核苷酸、及PAPS的再生,这些方法在生物转化过程中得到了应用。随着蛋白质工程、代谢工程、基因组及蛋白组研究的不断深入,辅因子再生技术将进一步拓展生物转化在医药和化学工业领域的应用。

钼辅因子缺乏症1例临床及遗传学分析

目的探讨钼辅因子缺乏症的临床及遗传学特征。方法回顾分析1例确诊钼辅因子缺乏症患儿的临床资料。结果女性患儿,6月龄,生后即出现喂养困难、抽搐,并逐渐出现小头畸形、痉挛型四肢瘫等。全外显子测序发现患儿MOCS2基因存在c.473T>G(p.Leu 158*)和c.472_477 del(p.Leu 158_Lys 159 del)复合杂合变异,分别遗传自父亲和母亲。按照美国医学遗传学学会指南,c.473T>G为致病变异,c.472_477 del为可能致病变异。结论患儿被确诊为MOCS2基因杂合变异所致的钼辅因子缺乏症。

固氮酶Fe-Mo辅因子空间构型模拟——分子力学在分子模型设计中的应用

在分子模型设计中交替使用分子图形学软件和分子力学优化计算,用计算机模拟固氮酶Fe-Mo辅因子空间构型,从而为进一步的理论研究提供了一个非实验方法的有效手段。

肝素辅因子Ⅱ的研究进展

肝素辅因子Ⅱ(Heparin CofactorⅡ,HCⅡ)又称肝素辅因子A(Heparin CofctotA)和抗凝血酶 BM(Antithrombin BM),是血浆中抗凝血酶Ⅲ(AntithrombinⅢ,ATⅢ)

国产发色底物S-2238检测肝素辅因子Ⅱ活性及其初步临床应用

本文应用国产发色底物S-2238建立了肝素辅因子Ⅱ(Heparin cofactor Ⅱ,HC-Ⅱ)的检测方法,并测定了正常人及肝硬化、肝癌、慢活肝、急黄肝、尿毒症、DVT、AMI患者的HC-Ⅱ活性,结果除DVT外,其余各组HC-Ⅱ活性均显著低于正常人组(p<0.001)。本文尚对测定的方法及临床意义作了初步探讨。