核受体辅抑制因子1对缺血再灌注损伤小鼠的心肌保护作用

目的探讨心肌细胞来源的核受体辅抑制因子1(nuclear receptor corepressor 1, NCoR1)对心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia/reperfusion injury, MI/RI)小鼠心肌的保护作用及可能机制。方法心肌细胞NCoR1基因特异性敲除小鼠44只,随机分为假手术基因敲除组和MI/RI基因敲除组各22只;具有心脏特异性aMHC-Cre标签的野生型小鼠44只,随机分为假手术野生型组和MI/RI野生型组各22只。MI/RI基因敲除组、MI/RI野生型组结扎左冠状动脉30 min后恢复灌注血流制备MI/RI模型;假手术基因敲除组、假手术野生型组仅穿线不结扎左冠状动脉。造模成功后24 h,各组分别取12只小鼠测定左室射血分数(left ventricular ejection fraction, LVEF)和左心室短轴缩短分数(left ventricular fractional shortening, LVFS),然后处死小鼠取心脏,采用TTC染色法评估心肌梗死面积百分比;各组分别取1只小鼠行MRI检查,评估小鼠心肌收缩情况和水肿程度。造模成功后3 h,各组分别取4只小鼠处死后取心脏组织,行DHE染色观察活性氧(reactive oxygen species, ROS)含量,行免疫组织化学染色观察还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nacotinamide adenine dinucleotide phosphate, NADPH)、3-硝基酪氨酸(3-nitrotyrosine, 3-NT)阳性细胞;各组分别再取5只小鼠,采用ELISA法检测心肌组织中NADPH、3-NT水平。结果造模后24 h, LVEF、LVFS在MI/RI基因敲除组[(34.16±1.61)%、(16.08±0.87)%]、MI/RI野生型组[(40.61±1.07)%、(19.61±0.60)%]均低于假手术基因敲除组[(58.47±2.12)%、(29.59±1.64)%]、假手术野生型组[(58.23±2.13)%、(30.35±1.47)%](P<0.05),心肌梗死面积百分比在MI/RI基因敲除组[(38.71±2.63)%]大于MI/RI野生型组[(18.34±2.16)%](P<0.05),MI/RI基因敲除组LVEF、LVFS均低于MI/RI野生型组(P<0.05);MI/RI基因敲除组心肌收缩、水肿程度均较MI/RI野生型组严重。ROS含量及NADPH、3-NT水平在MI/RI基因敲除组[(1.61±0.08)%、(3.26±0.19)μg/L、(15.50±1.07)μg/L]、MI/RI野生型组[(0.58±0.03)%、(2.39±0.17)μg/L、(9.96±0.70)μg/L]均高于假手术野生型组[0、(1.12±0.09)μg/L、(3.12±0.14)μg/L]、假手术基因敲除组[0、(0.95±0.04)μg/L、(3.25±0.28)μg/L](P<0.05),MI/RI基因敲除组高于MI/RI野生型组(P<0.05),假手术野生型组与假手术基因敲除组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论心肌细胞来源NCoR1对MI/RI小鼠的心肌具有保护作用,其机制可能缓解MI/RI损伤诱发的氧化应激损伤。

过氧化物酶体增殖物激活受体辅调节因子与肾脏损伤的关系

过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)作为一类核转录因子,能与其特异性配体结合,进而在转录水平上调节多种基因的表达。近年来研究发现,PPARs的辅调节因子,包括辅激活因子和辅抑制因子,能够通过不同的机制促进或抑制PPARs的转录活性,调节其目的基因的表达。并且还是很多细胞内信号通路和翻译后修饰作用的对象,在肾脏疾病的进展中发挥重要重要。选择不同的辅调节因子的激活剂或抑制剂来调节相关基因的转录活性,将会成为治疗一些肾脏疾病如肾小球硬化、肾小球肾炎、糖尿病肾病及肾小管间质疾病的新的治疗手段和方法。

大豆苷原对成骨细胞MC3T3-E1甾体激素受体辅激活因子1表达的调节作用及其机制

目的:研究大豆苷原对成骨细胞MC3T3-E1甾体激素受体辅激活因子1(steroid receptorcoactivator-1,SRC-1)和核受体辅抑制因子(nuclear receptor corepressor,NcoR)表达的调节作用及其机制。方法:体外培养MC3T3-E1细胞于含2%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)的α最低必须培养基(α-minimal essential medium,α-MEM)中,给予不同浓度大豆苷原或10^(-8)mol/L的雌二醇作用3 d后收获细胞,采用蛋白质印迹法观察SRC-1和NcoR蛋白的表达水平。分别应用雌激素受体(estrogen receptor,ER)拮抗剂ICI182780(Faslodex,ICI,10^(-7) mol/L)和雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)特异性拮抗剂(methyl-piperidino-pyrazole,MPP,10^(-6) mol/L)干预,观察大豆苷原对细胞SRC-1和NcoR蛋白表达水平的影响。结果:大豆苷原可上调MC3T3-E1细胞SRC-1的表达,10^(-7)mol/L和10^(-5)mol/L大豆苷原组SRC-1的蛋白水平分别增加至对照组的2.5倍(P<0.05)和2倍(P<0.05)。各剂量组NcoR表达水平与对照组比较差异无统计学意义。雌二醇组SRC-1水平与对照组比较未见明显变化,而其NcoR表达水平较对照组下调35%(P<0.05)。ICI182780可拮抗大豆苷原对SRC-1的上调作用。在ICI182780作用下,各剂量组SRC-1蛋白水平与对照组比较差异无统计学意义;MPP干预下,10^(-7)mol/L和10^(-5) mol/L大豆苷原组SRC-1的蛋白水平分别为对照组的1.8倍(P<0.05)和2.4倍(P<0.05)。结论:大豆苷原可增加成骨细胞SRC-1的蛋白表达水平,提高细胞SRC-1/NcoR比值。ERβ参与了大豆苷原对SRC-1的调节过程。成骨细胞内SRC-1蛋白的增加和SRC-1/NcoR比值的提高是大豆苷原促进成骨细胞分化的机制之一。

羧基末端结合蛋白:一种实体肿瘤的致癌因子

肿瘤的发生、发展涉及多因素、多阶段的相互协调、相互作用,预测肿瘤相关标志物是目前医学研究的热点。羧基末端结合蛋白(CtBP)是一种转录辅抑制因子,在许多实体肿瘤细胞中过表达,可与其相关的转录因子相结合,参与肿瘤细胞“Warburg效应”、上皮-间充质转化、肿瘤干细胞自我更新等多个过程,促进肿瘤的发生、发展。本文就CtBP在肝癌、乳腺癌、结肠癌、前列腺癌中的研究进展作一综述。

CtBP与肿瘤相关的研究

羧基末端结合蛋白(C-terminal-binding protein,CtBP)在进化上保守,主要发挥转录辅抑制因子的功能。研究发现,CtBP通过与多个转录因子相互作用,参与多个肿瘤相关基因的转录调控。因此,CtBP对肿瘤的研究提供了新思路,对于揭示肿瘤的发生、发展,肿瘤的治疗、预防具有重要意义。本文主要对近年来CtBP与肿瘤相关的研究作一综述。

心肌细胞来源NCoR1对小鼠心肌梗死损伤的保护作用

目的探究心肌细胞来源的核受体辅抑制因子1(NCoR1)对小鼠心肌梗死损伤发挥的作用。方法构建心肌细胞NCoR1特异性敲除小鼠并根据不同手术处理分为假手术野生型组、假手术基因敲除组、心肌梗死野生型组和心肌梗死基因敲除组,每组各50只小鼠。统计各组小鼠在心肌梗死28 d的生存率和心功能水平;通过病理染色判断梗死面积与纤维化程度;测定小鼠血清心肌酶[磷酸肌酸激酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)]及炎症指标[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)]水平。结果与野生型小鼠相比,基因敲除组小鼠存活率更低,左心室射血分数[(30.39±5.13)%vs.(9.46±2.10)%]和左心室缩短分数[(14.62±2.69)%vs.(4.26±0.96)%]均明显下降,而左室容积[(101.50±14.07)μL vs.(197.50±22.41)μL]明显升高(均P<0.05);小动物PET/CT提示心肌梗死后野生型小鼠对^(18)F-FDG的摄取量更高[(2.74±0.06)MBq vs.(1.60±0.03)MBq],梗死程度[(36.22±0.86)%vs.(47.17±1.27)%]和纤维化程度[(32.70±0.85)%vs.(46.38±1.31)%]更低(均P<0.05);血清学指标显示敲除小鼠心肌损伤更重且炎症水平更高(均P<0.05)。结论心肌细胞中NCoR1在小鼠心肌梗死中发挥重要的保护作用。

丝裂原活化蛋白磷酸酶1调控法尼醇X受体转录活性的研究

目的:探讨丝裂原活化蛋白磷酸酶1(mitogen activated protein kinase phosphatase-1,MKP-1)调控法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)转录活性的作用。方法:采用实时定量PCR和蛋白印迹法,检测肥胖小鼠模型肝脏FXR和MKP-1的mRNA和蛋白表达;采用免疫共沉淀和荧光素酶报告基因实验,探讨MKP-1调控FXR转录活性的作用。结果:肥胖小鼠的肝脏组织中,FXR的表达显著下调(P<0.05),而MKP-1的表达则显著增加(P<0.05);免疫共沉淀和荧光素酶报告基因实验结果显示,MKP-1与FXR间存在蛋白-蛋白相互作用。MKP-1过表达后,可抑制FXR的转录活性(P<0.05),而干扰MKP-1的表达则可上调其转录活性(P<0.05)。结论:MKP-1可能作为FXR的辅抑制因子,从而参与肝脏糖脂代谢的调控。