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小鼠附睾特异性辅脂酶的原核表达及其抗体的制备 被引量:2
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作者 关艺青 禹艳红 +1 位作者 黄丹 潘善培 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期105-110,共6页
目的:利用原核表达系统重组表达小鼠附睾特异性辅脂酶(meClps),并制备抗meClps抗体。方法:通过生物信息分析meClps蛋白结构,Oligo 6设计引物,PCR法从小鼠附睾cDNA中扩增meClps全长序列并克隆到pMD19-T载体中。将含meClps序列pMD19-T载... 目的:利用原核表达系统重组表达小鼠附睾特异性辅脂酶(meClps),并制备抗meClps抗体。方法:通过生物信息分析meClps蛋白结构,Oligo 6设计引物,PCR法从小鼠附睾cDNA中扩增meClps全长序列并克隆到pMD19-T载体中。将含meClps序列pMD19-T载体通过PCR扩增成熟肽区段序列,重组到pET-21b原核表达载体上,经菌落PCR及测序鉴定后,转化到表达菌株E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导蛋白表达后用Tricine-SDS-PAGE和Western blotting检测重组meClps的表达。包涵体沉淀经浓度为2 mol/L尿素洗涤,Tricine-SDS-PAGE分离、染色、脱色,切下目的条带用生理盐水浸泡、磨碎与弗氏佐剂混合后免疫新西兰大白兔获取免疫血清,Western blotting检测抗体与meClps反应。结果:在原核表达系统成功重组表达meClps,目的蛋白主要以包涵体形式存在,制备了高效价的兔抗meClps抗体。结论:成功建立meClps的原核表达系统和获得兔抗meClps抗体。 展开更多
关键词 附睾 辅脂酶 原核表达 抗体
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人辅脂酶样3基因hCLPSL3及其同源基因cDNA克隆及鉴定
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作者 卢艳 薛永常 +1 位作者 于鹏 王平章 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期575-584,共10页
为发现新的辅脂酶样家族成员,通过EST拼接获得1个新的人类辅脂酶样蛋白编码基因hCLPSL3(human colipase-like 3);同时,通过同源性分析,对小鼠(Mus musculus)、大鼠(Rattus norvegicus)同源基因Clpsl3的完整编码区进行分析和预测。利用RT... 为发现新的辅脂酶样家族成员,通过EST拼接获得1个新的人类辅脂酶样蛋白编码基因hCLPSL3(human colipase-like 3);同时,通过同源性分析,对小鼠(Mus musculus)、大鼠(Rattus norvegicus)同源基因Clpsl3的完整编码区进行分析和预测。利用RT-PCR技术以人细胞系cDNA为模板成功扩增到hCLPSL3的2个转录变异体,即hCLPSL3-v1和-v2,前者包含完整的开放阅读框架(ORF),后者ORF被提前终止密码子(premature stop codon,PTC)中断;hCLPSL3-v1包含159个氨基酸,含有1个典型的信号肽,2个高度同源的内部序列重复区以及2个不完整的辅脂酶样结构域。通过真核表达载体构建,在人293T细胞中以过表达方式证实了hCLPSL3-v1能够分泌。通过RT-PCR技术,在小鼠肾、结肠和脾脏组织中各获得1个Clpsl3转录变异体序列,分别称为mCLPSL3-v1、-v2和-v3,其中mCLPSL3-v1包含完整的编码区,编码产物含161个氨基酸,而mCLPSL3-v2和-v3的ORF均被PTC中断;从大鼠结肠和小肠组织中克隆到大鼠Clpsl3的cDNA序列,即rCLPSL3,其编码162个氨基酸。此外,CLPSL3在哺乳动物中广泛存在,基因结构相似,均含有高度保守的18个半胱氨酸,推测与二硫键形成有关。这些工作为CLPSL3的功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 克隆 辅脂酶 辅脂酶样3基因
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胰辅脂酶 被引量:3
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作者 段瑞冬 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 1992年第4期303-307,共5页
胰辅脂酶是胰腺分泌的一个小分子蛋白质,具有与胰脂肪酶及脂肪底物相结合的特性。它使胰脂肪酶得以克服胆盐的阻隔作用,从而确保胰脂肪酶与脂肪底物相结合。因而胰辅脂酶是在生理情况下,肠腔中脂肪消化的一个必不可少的因子。胰辅脂酶... 胰辅脂酶是胰腺分泌的一个小分子蛋白质,具有与胰脂肪酶及脂肪底物相结合的特性。它使胰脂肪酶得以克服胆盐的阻隔作用,从而确保胰脂肪酶与脂肪底物相结合。因而胰辅脂酶是在生理情况下,肠腔中脂肪消化的一个必不可少的因子。胰辅脂酶的合成受食物成份的影响,同时还受体内激素水平的调节,其中包括胰岛素、抑胃多肽及肾上腺皮质激素等。 展开更多
关键词 辅脂酶 胰腺
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高脂血症肾损害大鼠体内辅脂酶的变化
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作者 肖云 谢辉 +2 位作者 肖洁 张萌 吴峻 《热带医学杂志》 CAS 2011年第1期35-37,共3页
目的观察高脂血症大鼠血脂、尿蛋白、血肌酐,以及血清和肾皮质辅脂酶浓度及辛伐他汀治疗后的影响,探讨辅脂酶在高脂血症大鼠肾损害中可能的作用机制。方法将30只SD大鼠随机分为正常对照组、高脂血症模型组和辛伐他汀(10mg·kg-1d-1... 目的观察高脂血症大鼠血脂、尿蛋白、血肌酐,以及血清和肾皮质辅脂酶浓度及辛伐他汀治疗后的影响,探讨辅脂酶在高脂血症大鼠肾损害中可能的作用机制。方法将30只SD大鼠随机分为正常对照组、高脂血症模型组和辛伐他汀(10mg·kg-1d-1)治疗组,每组10只,12周后检测三组大鼠的血脂、血肌酐、24h尿蛋白水平以及血清和肾皮质辅脂酶浓度。结果高脂血症组尿蛋白明显高于正常对照组(P<0.01),肾组织辅脂酶水平低于正常对照组(P<0.05)。辛伐他汀治疗组总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、24h尿蛋白定量显著低于高脂血症组(P<0.01),血清及肾组织colipase含量高于高脂血症组。结论辅脂酶可能参与了高脂血症肾损害的发生,辛伐他汀可能通过调节辅脂酶水平来保护高脂血症肾损害。 展开更多
关键词 辛伐他汀 血症 辅脂酶
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辛伐他汀对高脂血症大鼠肾损害的保护机制 被引量:4
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作者 肖云 谢辉 +2 位作者 肖洁 张萌 吴峻 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第14期2698-2700,共3页
目的观察辛伐他汀对高脂血症大鼠肾损害的保护机制。方法实验分为正常对照组、高脂血症模型组和辛伐他汀治疗组,12 w后检测三组大鼠的血脂、血肌酐、24 h尿蛋白水平,以及肾皮质colipase浓度。结果高脂血症组尿蛋白明显高于正常对照组(P&... 目的观察辛伐他汀对高脂血症大鼠肾损害的保护机制。方法实验分为正常对照组、高脂血症模型组和辛伐他汀治疗组,12 w后检测三组大鼠的血脂、血肌酐、24 h尿蛋白水平,以及肾皮质colipase浓度。结果高脂血症组尿蛋白明显高于正常对照组(P<0.01),肾组织colipase水平低于正常对照组(P<0.05)。辛伐他汀治疗组总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、24 h尿蛋白定量显著低于高脂血症组(P<0.01),血清及肾组织colipase含量高于高脂血症组(P<0.05)。结论辛伐他汀在调脂的同时,还能显著增加血清及肾组织colipase水平,colipase的增加可能是辛伐他汀保护高脂血症肾损害的重要机制之一。 展开更多
关键词 辛伐他汀 血症 肾脏 辅脂酶
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脂质消化的生理规律 被引量:3
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作者 E.Bauer 王彦华 《中国畜牧兽医》 CAS 2005年第7期i004-i004,共1页
脂质在被肠道吸收之前,其消化过程可以被分为几个连续的阶段:脂质乳化、水解和微粒形成。脂质乳化作用从胃中开始,并受机械力调控,在胃脂酶的作用下,部分日粮中的脂肪分解又能够增强脂质的乳化作用。脂肪在十二指肠继续消化,在十... 脂质在被肠道吸收之前,其消化过程可以被分为几个连续的阶段:脂质乳化、水解和微粒形成。脂质乳化作用从胃中开始,并受机械力调控,在胃脂酶的作用下,部分日粮中的脂肪分解又能够增强脂质的乳化作用。脂肪在十二指肠继续消化,在十二指肠里胰甘油三酯脂酶(PTL)催化下脂肪分解出50%~70%的膳食脂肪酸。 展开更多
关键词 消化 生理规律 乳化作用 胰甘油三酯 辅脂酶 羧基酯
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雪莲果浸膏对高脂模型大鼠肠道脂质吸收的影响及机制 被引量:2
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作者 孙见飞 龚顺航 +5 位作者 姚龙凤 殷文凤 章先旭 刘俊奇 李蓉 吴遵秋 《贵州医科大学学报》 CAS 2022年第10期1137-1146,共10页
目的观察雪莲果浸膏对高脂模型大鼠的降脂作用及机制。方法利用网络药理学方法对雪莲果干预高脂血症的可能分子机制进行预测,确定脂质代谢研究对象;80只SD大鼠随机选取20只作为空白组(普通饲料饲养8周),60只作为高脂模型组(用高脂高糖... 目的观察雪莲果浸膏对高脂模型大鼠的降脂作用及机制。方法利用网络药理学方法对雪莲果干预高脂血症的可能分子机制进行预测,确定脂质代谢研究对象;80只SD大鼠随机选取20只作为空白组(普通饲料饲养8周),60只作为高脂模型组(用高脂高糖饲料饲养8周建模);建模成功后高脂模型组大鼠再分为阳性对照组、模型组及雪莲果浸膏(高、中、低)剂量组,雪莲果浸膏3个剂量组给予相应浓度雪莲果浸膏灌胃、阳性对照组给予奥利司他灌胃、其余各组给予生理盐水灌胃,连续8周,观察各组大鼠的体质量变化;采用酶联免疫吸附法检测各组大鼠血清总甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量,实时荧光定量PCR及免疫印迹法分别检测各组大鼠胰腺组织中胰脂肪酶、辅脂酶的m RNA及蛋白水平。结果通过网络药理学对雪莲果干预高脂血症的可能分子机制进行预测分析,确定胰脂肪酶和辅脂酶为脂质代谢研究的目标;动物实验结果显示,与模型组比较,雪莲果浸膏可降低高脂大鼠胰腺组织中胰脂肪酶、辅脂酶m RNA及蛋白表达水平(P<0.05),能改善高脂模型大鼠的血脂情况。结论雪莲果浸膏具有降脂作用,其机制为抑制胰脂肪酶、辅脂酶表达,抑制胰腺中胰脂肪酶、辅脂酶的合成,降低大鼠肠道对脂质的吸收。 展开更多
关键词 雪莲果浸膏 模型 作用 辅脂酶
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Cloning and functional characterization of two cDNAs encoding NADPH-dependent 3-ketoacyl-CoA reductased from developing cotton fibers 被引量:15
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作者 YongMeiQIN FrancoisMAPUJOL +5 位作者 YongHuiSHI JianXunFENG YiMingLIU AlexanderJKASTANIOTIS JKalervoHILTUNEN YuXianZHU 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 2005年第6期465-473,共9页
Genes encoding enzymes involved in biosynthesis of very long chain fatty acids were significantly up-regulatedduring early cotton fiber development. Two cDNAs, GhKCR1 and GhKCR2 encoding putative cotton 3-ketoacyl-CoA... Genes encoding enzymes involved in biosynthesis of very long chain fatty acids were significantly up-regulatedduring early cotton fiber development. Two cDNAs, GhKCR1 and GhKCR2 encoding putative cotton 3-ketoacyl-CoAreductases that catalyze the second step in fatty acid elongation, were isolated from developing cotton fibers. GhKCR1and 2 contain open reading frames of 963 bp and 924 bp encoding proteins of 320 and 307 amino acid residues,respectively. Quantatitive RT-PCR analysis showed that both these genes were highly preferentially expressed duringthe cotton fiber elongation period with much lower levels recovered from roots, stems and leaves. GhKCR1 and 2showed 30%-32% identity to Saccharomyces cerevisiae Ybr159p at the deduced amino acid level. These cotton cDNAswere cloned and expressed in yeast haploid ybr159w? mutant that was deficient in 3-ketoacyl-CoA reductase activity.Wild-type growth rate was restored in ybr159w? cells that expressed either GhKCR1 or 2. Further analysis showed thatGhKCR1 and 2 were co-sedimented within the membranous pellet fraction after high-speed centrifugation, similar to theyeast endoplasmic reticulum marker ScKar2p. Both GhKCR(s) showed NADPH-dependent 3-ketoacyl-CoA reductaseactivity in an in vitro assay system using palmitoyl-CoA and malonyl-CoA as substrates. Our results suggest thatGhKCR1 and 2 are functional orthologues of ScYbr159p. 展开更多
关键词 very-long-chain fatty acids endoplasmic reticulum fatty acid elongation system 3-ketoacyl-CoA reductase Gossypium hirsutum short-chain alcohol dehydrogenase/reductase protein family.
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Roles of Long-chain Acyl Coenzyme A Synthetase in Absorption and Transport of Fatty Acid 被引量:2
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作者 Fan Gao Xue-feng Yang +4 位作者 Nian Fu Yang Hu Yan Ouyang Kai Qing 《Chinese Medical Sciences Journal》 CAS CSCD 2016年第1期62-64,共3页
Long-chain acyl coenzyme A synthetase(ACSL) is a member of the synthetase family encoded by a multigene family;it plays an important role in the absorption and transport of fatty acid.Here we review the roles of ACSL ... Long-chain acyl coenzyme A synthetase(ACSL) is a member of the synthetase family encoded by a multigene family;it plays an important role in the absorption and transport of fatty acid.Here we review the roles of ACSL in the regulating absorption and transport of fatty acid,as well as the connection between ACSL and some metabolic diseases. 展开更多
关键词 long-chain acyl coenzyme A synthetase fatty acid ABSORPTION transport
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